李 芳 嚴(yán)斯剛 黃小武 蘇益瓊 覃萬福 韋玉慶余 波 薛新綿 梁麗娟 羅 生 覃周嵐

1.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣動物疫病預(yù)防控制中心，廣西鹿寨545600；

2.廣西壯族自治區(qū)柳州市動物疫病預(yù)防控制中心，廣西柳州545006；

3.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣鹿寨鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西鹿寨545600；

4.廣西壯族自治區(qū)柳州市獸醫(yī)化制場，廣西柳州545004；

5.廣西壯族自治區(qū)鹿寨縣平山鎮(zhèn)水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)站，廣西鹿寨545612

小反芻獸疫（peste des petits ruminants，PPR）是由副粘病毒科麻疹病毒屬小反芻獸疫病毒引起的小反芻動物的一種急性接觸傳染病，俗稱羊瘟，以發(fā)熱、口炎、腹瀉、肺炎為主要特征，主要感染綿羊和山羊，危害相當(dāng)嚴(yán)重[1]。目前，小反芻獸疫無特效治療藥物，以疫苗接種為主的綜合措施是預(yù)防控制小反芻獸疫有效策略。免疫母畜能通過母乳使幼畜獲得母源抗體，為幼畜提供保護(hù)的同時又會干擾其接種疫苗的主動免疫反應(yīng)。幼畜首次免疫需要考慮母源抗體水平、自身免疫應(yīng)答能力等因素影響。張子榮等[2]、何世成等[3]、郝飛等[4]、李芳等[5]對小反芻獸疫母源抗體消長規(guī)律進(jìn)行了研究。本試驗采用小反芻獸疫疫苗接種不同母源抗體水平山羊組群，監(jiān)測其免疫水平，旨在探索直觀評價更加接近當(dāng)?shù)厣a(chǎn)實際的疫苗免疫效果，為有效預(yù)防及控制小反芻獸疫提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗疫苗

小反芻獸疫弱毒疫苗，新疆天康畜牧生物技術(shù)股份有限公司生產(chǎn)，規(guī)格：50 頭份/ 瓶，批號：2016044-2，每頭份疫苗含有的小反芻獸疫弱毒病毒至少為103TCID50。按瓶標(biāo)簽注明頭份，用滅菌生理鹽水將疫苗稀釋至每毫升含有1 頭份，充分混合均勻，冷藏保存?zhèn)溆?，稀釋后的疫苗? h 內(nèi)使用完畢。

1.2 診斷試劑

小反芻獸疫抗體ELISA 檢測試劑盒，購自北京勤邦生物技術(shù)有限公司，批號為20170802。

1.3 試驗場地及試驗動物

在筆者單位轄區(qū)內(nèi)隨機抽取6 個符合試驗要求的山羊養(yǎng)殖場(母羊均已接種小反芻獸疫疫苗12個月以上)，場名分別標(biāo)記為A、B、C、D、E、F；每個養(yǎng)殖場選取2～4月齡、未接種過小反芻獸疫疫苗且臨床檢查健康的本地山羊30 只，每只山羊頸部皮下注射疫苗1 mL，做好標(biāo)識，在未改變原有條件下按照養(yǎng)殖場常規(guī)飼養(yǎng)。

1.4 樣品采集

分別于接種疫苗當(dāng)天（即0 d）以及接種疫苗后28、120、180 d 頸靜脈采血，每次3～5 mL/只，分離的血清不少于1 mL/只，血清清亮、無溶血、無染污，-20 ℃以下保存待檢。

1.5 抗體檢測

1）檢測方法。使用前將各試劑盒放置室溫30 min，恢復(fù)至室溫。取相應(yīng)用量酶標(biāo)板條，設(shè)陰性和陽性對照各2 孔；陰、陽性對照孔分別加入陰、陽性對照50 μL；樣品孔每孔加入5 倍稀釋后的樣品50 μL；每孔加抗體工作液50 μL，混勻，置37 ℃反應(yīng)30 min；除去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30 s 后棄去，重復(fù)洗滌5 次，拍干；每孔加酶標(biāo)記物100 μL，置37 ℃反應(yīng)30 min；甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30 s后棄去，重復(fù)洗滌5 次，拍干；每孔依次加底物液A、底物液B 各50 μL，混勻，37 ℃避光反應(yīng)15 min；每孔加終止液50 μL，混勻，于450 nm 波長下測定各孔吸光值。

2）結(jié)果判定，以 450 nm 吸光值為判定標(biāo)準(zhǔn)。正常試驗情況下，陰性對照吸光值≥1.0，陽性對照吸光值≤陰性對照吸光值×50%。按照公式計算阻斷率（PI）：PI=（1-樣本值/陰性對照孔均值）×100%。根據(jù)PI 進(jìn)行結(jié)果判定：PI≥50%為陽性；PI＜50%為陰性。陰性結(jié)果表明，羊只抗體水平不足，需要補打相應(yīng)疫苗。該試驗僅定性檢測羊血清中PPR 抗體，根據(jù)PI 對抗體水平進(jìn)行粗略評估。

2 結(jié)果與分析

2.1 各養(yǎng)殖場山羊母源抗體檢測情況

6 個養(yǎng)殖場的山羊母源抗體陽性率都在70%以下；F 養(yǎng)殖場山羊母源抗體陽性率最高，為66.67%；A 養(yǎng)殖場山羊母源抗體陽性率最低，為3.33%；A、B、C 養(yǎng)殖場平均PI 小于50%，D、E、F 養(yǎng)殖場平均PI 大于50%（表1）。

2.2 各養(yǎng)殖場山羊接種疫苗后免疫抗體檢測情況

1）接種疫苗28 d 后免疫抗體檢測情況。從表2可以看出，接種疫苗28 d 后，F(xiàn) 養(yǎng)殖場的山羊免疫抗體陽性率為50%，其余5 個養(yǎng)殖場的山羊免疫抗體陽性率均在80%以上。A、C、D 3 個養(yǎng)殖場平均阻斷率大于79.96%，B、E、F 3 個養(yǎng)殖場平均阻斷率小于79.96%。由于F 養(yǎng)殖場山羊母源抗體陽性率較高，可能是母源抗體對疫苗抗原有部分中和作用，所以免疫后28 d 陽性率較低。

表1 各養(yǎng)殖場的山羊母源抗體檢測結(jié)果

表2 免疫后28 d 山羊免疫抗體檢測結(jié)果

表3 免疫后120 d 山羊免疫抗體檢測結(jié)果

表4 免疫后180 d 山羊免疫抗體檢測結(jié)果

2）接種疫苗120 d 后山羊免疫抗體檢測情況。從表3可以看出，6 個養(yǎng)殖場山羊在接種疫苗120 d后免疫抗體的陽性率均為100%，其平均PI 在80%以上。

3）接種疫苗180 d 后山羊免疫抗體檢測情況。從表4可以看出，山羊接種疫苗180 d 后，E 養(yǎng)殖場和F 養(yǎng)殖場山羊的免疫抗體陽性率分別為53.33%和56.67%，均在70%以下；其余4 個養(yǎng)殖場山羊的免疫抗體陽性率均在70%以上。A、C、D 3 個養(yǎng)殖場平均阻斷率大于76.40%，B、E、F 3 個養(yǎng)殖場平均阻斷率小于76.40%。

圖1為各監(jiān)測時間點山羊抗體陽性率比較。從圖1可以看出，山羊母源抗體水平與接種疫苗后28、180 d 免疫抗體陽性率成反比關(guān)系，即母源抗體陽性率高的羊群，接種疫苗后28、180 d 免疫抗體陽性率就低。

圖1 各監(jiān)測時間點抗體陽性率比較

3 討 論

本研究結(jié)果顯示，6 個山羊養(yǎng)殖場小反芻獸疫母源抗體的陽性率在3.33%～66.67%，平均PI 值36.18%～56.38%，說明大部分免疫母羊的子代羔羊中有母源抗體存在。張子榮等[2]、何世成等[3]、郝飛等[4]、李芳等[5]的研究也證實，免疫母羊后代獲得一定水平母源抗體。

本研究結(jié)果顯示，羔羊PPR 母源抗體陽性率下降到70%以下，接種疫苗28 d 后，有5 個山羊養(yǎng)殖場的免疫抗體陽性率高于70%，達(dá)到預(yù)期免疫效果，而F 養(yǎng)殖場山羊的母源抗體陽性率為66.67%，接種疫苗28 d 后的免疫抗體陽性率僅為50%（遠(yuǎn)低于70%）；接種疫苗180 d 后，E 和F 養(yǎng)殖場山羊的免疫抗體陽性率分別為53.33%和56.67%，均在70%以下，其余4 個養(yǎng)殖場山羊的免疫抗體陽性率均在70%以上。試驗結(jié)果說明，從母羊中獲得的母源抗體對其接種疫苗的主動免疫反應(yīng)有一定的干擾作用，養(yǎng)殖場母源抗體陽性率低于50%時接種疫苗的免疫效果較好。羔羊的母源抗體水平受母羊免疫時間與次數(shù)，即免疫抗體水平有關(guān)，同時也與羔羊斷奶時間和日齡有關(guān)；大部分羔羊在2月齡以后，母源抗體水平顯著下降，因此，建議羔羊的最早免疫時間為60日齡左右[5]。有條件的養(yǎng)殖場可通過監(jiān)測評估，根據(jù)母源抗體消長情況選擇最佳免疫時機，即可減少其對疫苗免疫效果影響，又可防止羔羊出現(xiàn)過長免疫空白期。

75/1 毒株是OIE 規(guī)定的唯一允許使用的PPRV疫苗，該疫苗用于全國PPRV 疫情防控，疫苗效果在多個研究報道中獲得良好評價[6-12]。本試驗結(jié)果顯示，不同監(jiān)測時間點羊群免疫抗體陽性率均發(fā)生明顯的變化。在養(yǎng)殖生產(chǎn)實踐中，羊群免疫狀況往往會受到各種因素影響而發(fā)生改變，適時開展監(jiān)測區(qū)域羊群免疫效果的監(jiān)測和評估，并及時掌握群體抵御病毒侵襲的能力是非常必要的。當(dāng)羊群免疫水平低于防疫目標(biāo)時，應(yīng)當(dāng)及時加強免疫。群體免疫力的存在可阻斷病原在羊群中的傳播，長期使用疫苗并配合其他相應(yīng)措施可逐步達(dá)到凈化疫病的目的。