王妮 尹顯慧 彭麗娟 李榮玉 龍友華 吳小毛 樊榮 王坤英 李繼業(yè)

摘要 從貴陽(yáng)市花溪區(qū)磊莊村辣椒基地采集疑似炭疽病的典型的自然發(fā)病辣椒果實(shí)，采用組織分離、培養(yǎng)、形態(tài)學(xué)觀察、致病性測(cè)定以及多基因分子系統(tǒng)學(xué)，確定病原菌的種類;采用菌絲生長(zhǎng)速率法研究了8種殺菌劑對(duì)該病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果表明，引起貴陽(yáng)市花溪區(qū)磊莊村辣椒炭疽病的病原菌為尖孢炭疽菌Capsicum acutatum。室內(nèi)毒力測(cè)定發(fā)現(xiàn)8種殺菌劑對(duì)尖孢炭疽菌均有一定的抑制作用，其中25%咪鮮胺EC 和30%吡唑醚菌酯SC抑制效果最好，EC50分別為0.253 5 mg/L和0.720 3 mg/L;其次為22.5%啶氧菌酯SC和22.7%二氰蒽醌SC，EC50分別為7.249 5 mg/L和21.664 5 mg/L。將30%吡唑醚菌酯SC和22.7%二氰蒽醌SC按照9∶1、6∶4、3∶7、4∶6的比例混配，聯(lián)合毒力測(cè)定和評(píng)價(jià)結(jié)果顯示兩者混配對(duì)該病菌具有協(xié)同增效作用，且25%咪鮮胺EC和22.5%啶氧菌酯SC以6∶4、4∶6、8∶2的比例進(jìn)行混配時(shí)也表現(xiàn)出明顯的增效作用。引起貴陽(yáng)市花溪區(qū)磊莊村辣椒基地辣椒炭疽病的致病菌為尖孢炭疽菌。咪鮮胺、吡唑醚菌酯、啶氧菌酯和二氰蒽醌對(duì)該菌具有較好的抑制作用，可為辣椒炭疽病的田間防治提供參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞 辣椒炭疽病; 病原鑒定; 多基因分子系統(tǒng)學(xué); 尖孢炭疽菌; 聯(lián)合毒力測(cè)定

中圖分類號(hào)： S 432.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： A

DOI： 10.16688/j.zwbh.2018341

辣椒炭疽病是辣椒上的一種普遍發(fā)生的真菌性病害。引起辣椒炭疽病的病原菌種類較多，屬于類別復(fù)雜、種類繁多的半知菌亞門炭疽菌屬Colletotrichum，被列為世界上重要的植物病原真菌群[1]。病原菌可危害辣椒果實(shí)、葉片和莖部，嚴(yán)重影響辣椒的品質(zhì)和產(chǎn)量。近年，隨著貴州省農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整助推脫貧攻堅(jiān)的大力開展，辣椒種植面積不斷擴(kuò)大，在高溫高濕的氣候條件下，辣椒炭疽病的危害程度也在逐年加劇[23]。在國(guó)內(nèi)研究報(bào)道中，辣椒炭疽病主要危害葉片與果實(shí)，引起落葉及采前、采后的果實(shí)腐爛等癥狀，病害發(fā)生較重時(shí)病果率達(dá)20%～30%，造成極為嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失[4]。周傳波等[5]于2001年在海南省澄邁縣白連鎮(zhèn)辣椒產(chǎn)區(qū)調(diào)查中發(fā)現(xiàn)膠孢炭疽病菌C.gloeosporioides引起的辣椒炭疽病占調(diào)查病果的92%，而在澄邁縣永發(fā)鎮(zhèn)辣椒產(chǎn)區(qū)中發(fā)現(xiàn)由黑色炭疽病菌C.nigrum所引致的辣椒炭疽病，則占調(diào)查病果的87%，可見不同致病菌引起的炭疽病均可對(duì)辣椒果實(shí)造成嚴(yán)重的損失。李小霞和肖仲久[6]于2011年在貴陽(yáng)市花溪區(qū)磊莊村辣椒基地中發(fā)現(xiàn)，引起該地區(qū)辣椒炭疽病的主要病菌是黑色炭疽菌C.nigrum。

在國(guó)外的研究報(bào)道中，炭疽病菌感染辣椒最早在印度發(fā)現(xiàn)，引起辣椒炭疽病的真菌主要有4種：辣椒炭疽菌C.capsici、膠孢炭疽菌C.gloeosporioides、尖孢炭疽菌C.acutatum和黑色炭疽菌C.nigrum[79]。這4種炭疽菌在中國(guó)、印度、越南、巴西、泰國(guó)和韓國(guó)等國(guó)家的辣椒生產(chǎn)中均有發(fā)生，其中膠孢炭疽菌和辣椒炭疽菌的侵染發(fā)生普遍，黑色炭疽病僅部分地區(qū)發(fā)生，而最近幾年尖孢炭疽菌的危害逐年加重[10]。

目前，化學(xué)防治仍是防治辣椒炭疽病的關(guān)鍵技術(shù)措施。傳統(tǒng)藥劑如多菌靈、甲基硫菌靈、代森錳鋅等對(duì)辣椒炭疽病的防治效果不很理想，并且長(zhǎng)期使用容易導(dǎo)致病菌對(duì)其產(chǎn)生抗藥性，因此不建議用于該病害的田間防治[11]。甲氧基丙烯酸酯類如醚菌酯、肟菌酯等在防治辣椒炭疽病上被廣泛使用，但其對(duì)病原菌作用位點(diǎn)單一，容易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生抗藥性[12]。本研究通過對(duì)辣椒炭疽病菌進(jìn)行形態(tài)學(xué)觀察、致病力測(cè)定和多基因聯(lián)合分析，確定致病菌種類，并通過測(cè)定8種殺菌劑及其混配藥劑對(duì)辣椒炭疽病菌的聯(lián)合毒力作用，篩選出對(duì)該病菌具有強(qiáng)烈抑制作用的化學(xué)藥劑，以期控制辣椒炭疽病的發(fā)生和流行，為辣椒炭疽病的防治提供理論參考依據(jù)，從而進(jìn)一步滿足生產(chǎn)需要。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

供試菌株：從貴陽(yáng)市花溪區(qū)湖潮鄉(xiāng)磊莊村的辣椒基地采集疑似炭疽病的典型的自然發(fā)病的辣椒果實(shí)，帶回實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行組織分離、培養(yǎng)。

培養(yǎng)基：馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基（PDA）：馬鈴薯200.00 g、葡萄糖20.00 g、瓊脂15.00～20.00 g、蒸餾水1 L，pH為7.0。121℃滅菌40 min，用于辣椒炭疽病的分離、純化及培養(yǎng)。

供試藥劑：20%噁霉·乙蒜素可濕性粉劑（WP），河南省南陽(yáng)臥龍農(nóng)藥廠;30%吡唑醚菌酯懸浮劑（SC），青島星牌作物科學(xué)有限公司;25%咪鮮胺乳油（EC），重慶雙豐化工有限公司;22.5%啶氧菌酯懸浮劑（SC），美國(guó)杜邦公司;50%多菌靈·代森錳鋅可濕性粉劑（WP），山東省濰坊海宇生物化學(xué)農(nóng)藥公司;22.7%二氰蒽醌懸浮劑（SC），江西禾益化工股份有限公司;40%百菌清懸浮劑（SC），日本史迪士生物科學(xué)株式會(huì)社;27%春雷·溴菌腈可濕性粉劑（WP），陜西湯普森生物科技有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病原菌的組織分離

用75%乙醇擦拭辣椒果實(shí)表面，殺死果實(shí)表面的雜菌，用消毒的剪刀在辣椒果實(shí)病健交界處切取大小為2 mm2的組織，采用常規(guī)組織分離法分離培養(yǎng)[13]。挑取具有典型真菌菌落特征的單菌落分離純化，采用斜面保存法對(duì)純化后的目標(biāo)菌株編號(hào)并于4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 病原菌致病力測(cè)定

根據(jù)柯赫氏法則進(jìn)行回接試驗(yàn)，測(cè)定分離菌株的致病力。參考高楊楊等[14]的方法，并做改進(jìn)。采用針刺接種法和直接涂抹法在辣椒果實(shí)上接種。接種后將辣椒置于含濾紙和脫脂棉的保鮮盒（34 cm×27 cm×10 cm）中保濕培養(yǎng)24 h，濾紙和脫脂棉用滅菌的去離子水浸濕，辣椒果蒂用潤(rùn)濕的脫脂棉包裹保濕，控制培養(yǎng)的濕度條件，每隔1～2 d觀察癥狀。

1.2.3 病原菌形態(tài)學(xué)鑒定

選取具有致病性、且接種辣椒果實(shí)后有典型發(fā)病特征的菌株，用鑷子挑取病原菌的分生孢子制片，在光學(xué)顯微鏡下觀察分生孢子的形態(tài)特征并拍照。觀察PDA平板上該病原菌菌落的形態(tài)、大小、顏色等特征。

1.2.4 病原菌分子鑒定

采用Biomiga公司的真菌基因組DNA提取試劑盒提取DNA。分別對(duì)病原菌的核糖體轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)序列（internal transcribed spaces， ITS）、肌動(dòng)蛋白基因（actin gene， ACT）、β-微管蛋白基因（β-tubulin gene，TUB 2）、幾丁質(zhì)合成酶A基因（chitin synthase A gene，CHS-1）、3-磷酸甘油醛脫氫酶基因（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase gene， GAPDH）和組蛋白基因（histone 3，-HIS 3）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR反應(yīng)體系總體積為50 μL，包括DNA模板2 μL，正反向引物各2 μL，2×MasterMix 25 μL，以ddH2O補(bǔ)足至50 μL。反應(yīng)程序?yàn)椋?4℃預(yù)變性5 min;94℃變性30 s，按各引物相應(yīng)的退火溫度退火45 s（表1），72℃延伸1 min，共30個(gè)循環(huán)[15]。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物用1%的瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)，獲得與預(yù)期大小一致的核苷酸片段后，送至生工生物工程（上海）公司純化和測(cè)序。

將獲得的各個(gè)基因序列與GenBank中的序列進(jìn)行比對(duì)，下載同時(shí)含有ITS、ACT、TUB 2、CHS-1、GAPDH和HIS 3基因的炭疽菌屬模式菌株及其他菌株序列作為參考序列[16]，將目標(biāo)菌株基因按照ITS-ACT-TUB 2-CHS-1-GAPDH-HIS 3的順序首尾拼接，用MEGA 7.0軟件的“W”功能比對(duì)并手工校正后，選擇鄰接法（neighbor-joining，NJ）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，以自展法（bootstrap）進(jìn)行檢測(cè)，共循環(huán)1 000次。

1.2.5 藥劑室內(nèi)毒力測(cè)定

單劑毒力測(cè)定：采用菌絲生長(zhǎng)速率法進(jìn)行室內(nèi)藥劑篩選。將各供試藥劑用無(wú)菌水配制成10倍于試驗(yàn)所需濃度的母液，然后以體積比1∶9分別加至冷卻至45℃的PDA培養(yǎng)基中，充分搖勻后制成含藥平板。用打孔器（d=0.50 cm）在供試菌株菌落邊緣處打取菌餅，用接種針挑取菌餅接種在PDA平板的中央，以無(wú)菌水作對(duì)照，設(shè)5個(gè)濃度，3次重復(fù)。接種后置于28℃恒溫箱中倒置培養(yǎng)7 d，待對(duì)照組菌餅長(zhǎng)至整個(gè)平板的三分之二時(shí)，用十字交叉法測(cè)量供試菌株在不同濃度藥劑平板上的菌落直徑（cm），按照如下公式計(jì)算供試藥劑在不同濃度下的菌絲生長(zhǎng)抑制率。

菌絲生長(zhǎng)抑制率=（對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑）/（對(duì)照菌落直徑-菌餅直徑）×100%。

混劑毒力測(cè)定：采用交互測(cè)定法進(jìn)行配比篩選，首先設(shè)置11個(gè)濃度梯度及對(duì)照測(cè)定各個(gè)單劑的EC50;其次選擇兩種抑菌效果好的藥劑EC50溶液以不同的體積比進(jìn)行復(fù)配，計(jì)算各組配比的毒效比（TR）[17]。

根據(jù)毒效比選擇有增效作用或相加作用的兩種配比進(jìn)行混配。同樣計(jì)算EC50，采用Sun和Johnson[18]的方法計(jì)算共毒系數(shù)（CTC）。

1.3 數(shù)據(jù)分析

利用Office 2010對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行整理，結(jié)合DPS 7.05統(tǒng)計(jì)軟件，以處理濃度（mg/L）的對(duì)數(shù)值為橫坐標(biāo)和相應(yīng)抑制幾率值為縱坐標(biāo)求出毒力回歸方程（y=a+bx），并以回歸方程計(jì)算各供試藥劑對(duì)辣椒炭疽菌菌絲生長(zhǎng)的抑制中濃度（EC50）、置信區(qū)間及相關(guān)系數(shù)（r），比較不同殺菌劑對(duì)辣椒炭疽病菌的抑制作用。

2 結(jié)果與分析

2.1 病原菌的形態(tài)學(xué)鑒定

病原菌在PDA平板上的菌落呈圓形，開始生長(zhǎng)較緩慢，5 d后，菌落直徑可達(dá)60 mm，邊緣光滑且整齊，菌絲茂盛，呈柔軟絨狀，菌落灰白色，貼附培養(yǎng)基生長(zhǎng)，后期逐漸變?yōu)榛液稚疵嬗袦\褐色的同心環(huán)紋（圖1a、圖1b）。顯微鏡下觀察，分生孢子梭形，表面光滑，無(wú)色，單胞，兩端或一端尖，有的有油球，大小為（7.5～11.5）μm×（3.5～4.3）μm;附著胞褐色，卵圓形或倒卵圓形，邊緣規(guī)則或不規(guī)則，大小為（4.5～5.4）μm×（4.1～6.5）μm（圖1c）。參照真菌鑒定手冊(cè)以及植物病原真菌學(xué)[1920]，初步將該菌株鑒定為尖孢炭疽菌C.acutatum。

2.2 病原菌的致病力鑒定

通過針刺接種法和直接涂抹法接種的辣椒果實(shí)，分別表現(xiàn)出不同的特征。采用針刺接種法接種的辣椒果實(shí)在第3天開始發(fā)病，病斑擴(kuò)展速度快，到第5天病斑直徑可達(dá)15～20 mm（圖2a）。直接涂抹法接種的辣椒果實(shí)接種第5天開始發(fā)病，隨后病斑逐漸擴(kuò)展，到第7天病斑直徑可達(dá)10～15 mm，但與針刺接種法相比，直接涂抹法接種的病斑擴(kuò)展速度較慢，且發(fā)病效果沒有前者好（圖2c），病斑癥狀也不如前者明顯，對(duì)照沒有發(fā)病。接種后的辣椒果實(shí)病斑呈橢圓形，向內(nèi)凹陷、病斑局部呈黑褐色，且脆弱單薄，水漬狀，中央有很多橘黃色的黏性物質(zhì)溢出，即為分生孢子團(tuán)（圖2b、圖2d）。挑取橘黃色黏質(zhì)物進(jìn)行重新組織分離，根據(jù)柯赫氏法則，再次得到與接種菌基本一致的病原菌菌株，證明該菌為辣椒炭疽病的致病菌。

2.3 病原菌的分子生物學(xué)鑒定

從純化后的病原菌中提取DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用瓊脂糖凝膠電泳對(duì)擴(kuò)增出的ITS、ACT、TUB2、CHS-1、GAPDH、HIS3的核苷酸片段進(jìn)行檢測(cè)，分別得到558、250、759、291、248和387 bp的片段（圖3）。序列測(cè)序后，與參考基因進(jìn)行比對(duì)，系統(tǒng)發(fā)育樹顯示，病原菌TJ0102與尖孢炭疽菌C.acutatum模式菌株（CBS 292.67）聚為一個(gè)進(jìn)化支，并且支持率為98%（圖4）。結(jié)合病原菌形態(tài)特征和多基因系統(tǒng)發(fā)育樹，鑒定該辣椒炭疽病病原菌為尖孢炭疽菌C.acutatum。

2.4 供試藥劑對(duì)辣椒炭疽病菌的室內(nèi)毒力測(cè)定

2.4.1 8種殺菌劑毒力測(cè)定

由表2可見，8種殺菌劑對(duì)辣椒炭疽病菌均表現(xiàn)出一定的抑制效果，但對(duì)菌絲生長(zhǎng)的抑制效果不同，毒力差異較大。從藥劑的EC50來看，25%咪鮮胺EC與30%吡唑醚菌酯SC的抑菌作用最強(qiáng)，其 EC50分別為0.253 5和0.720 3 mg/L;其次是22.5%啶氧菌酯SC，EC50為7.249 5 mg/L，也表現(xiàn)出較好的抑制效果。另外，50%多菌靈·代森錳鋅WP，27%春雷·溴菌腈WP和22.7%二氰蒽醌SC的抑菌活性也較好，EC50分別為28.347 2、28.810 8和21.664 5 mg/L;而40%百菌清SC及20%噁霉·乙蒜素WP的抑菌效果一般，其EC50分別為105.397 3 mg/L和81.601 2 mg/L。

2.4.2 混合藥劑配比篩選

30%吡唑醚菌酯SC和22.7%二氰蒽醌SC對(duì)辣椒炭疽病菌的毒性較高，且兩種藥劑作用機(jī)制不一致，由表3可見，將30%吡唑醚菌酯SC和22.7%二氰蒽醌SC以不同比例進(jìn)行混配，其毒效比大于1或在1左右，說明兩種藥劑混配具有一定的增效或者相加作用。當(dāng)30%吡唑醚菌酯SC和22.7%二氰蒽醌SC配比為9∶1、6∶4和3∶7時(shí)，毒效比大于1且大于兩種藥劑的其他配比。當(dāng)兩種藥劑配比為4∶6和1∶9時(shí)，毒效比接近1，說明兩種藥劑以此配比進(jìn)行混配具有一定的相加作用。因此，根據(jù)兩種藥劑毒效比的大小，可以選擇配比為9∶1、6∶4、3∶7、4∶6和1∶9這5種配比來進(jìn)行共毒系數(shù)及聯(lián)合毒力的測(cè)定。

22.5%啶氧菌酯SC和25%咪鮮胺EC作用機(jī)理不同且沒有交互抗性，可以選擇這兩種藥劑進(jìn)行混配。由表4可見，將25%咪鮮胺EC和22.5%啶氧菌酯SC以不同比例進(jìn)行混配，其毒效比大于1或在1左右，說明兩種藥劑混配具有一定的增效或者相加作用。因此，根據(jù)兩種藥劑毒效比的大小，可以選擇配比為5∶5、3∶7、6∶4、4∶6和8∶2這5種配比來進(jìn)行共毒系數(shù)及聯(lián)合毒力的測(cè)定。

2.4.3 混劑共毒系數(shù)測(cè)定

由表5可見，將30%吡唑醚菌酯SC和22.7%二氰蒽醌SC按照篩選出的配比進(jìn)行混配并測(cè)定其共毒系數(shù)及聯(lián)合毒力，結(jié)果表明：配比組合為4∶6、6∶4和9∶1時(shí)，其EC50均較小，且明顯小于兩種單劑的EC50，配比組合為3∶7時(shí)，其EC50明顯小于兩種單劑中的某一種單劑，說明以這4種配比組合進(jìn)行混配均對(duì)該辣椒炭疽病菌具有較強(qiáng)的抑制作用。4種配比組合的共毒系數(shù)分別為231、661、542、857，其CTC大于120，表現(xiàn)出明顯的增效作用，且4種配比組合中，9∶1為最佳配比。

由表6可見，將25%咪鮮胺EC和22.5%啶氧菌酯SC按照篩選出的配比進(jìn)行混配并測(cè)定其共毒系數(shù)及聯(lián)合毒力，結(jié)果表明：配比組合為6∶4、2∶8和4∶6時(shí)，其EC50均較小，且明顯小于兩種單劑的EC50，說明以這3種配比組合進(jìn)行混配對(duì)辣椒炭疽病菌具有較強(qiáng)的抑制作用。3種配比組合的共毒系數(shù)分別為226、606、711，其CTC大于120，表現(xiàn)出明顯的增效作用。

3 討論

本研究對(duì)采自貴陽(yáng)市花溪區(qū)磊莊村的疑似辣椒炭疽病的果實(shí)進(jìn)行病原菌的分離純化和柯赫氏法則驗(yàn)證，確定分離菌株為辣椒炭疽病的病原菌。通過對(duì)病原菌的形態(tài)觀察，發(fā)現(xiàn)其與尖孢炭疽菌Colletotrichum acutatum形態(tài)特征基本一致。由于炭疽菌屬形態(tài)學(xué)特征可變性強(qiáng)，培養(yǎng)形狀不穩(wěn)定，容易受到環(huán)境的影響[21]，以形態(tài)學(xué)或單基因序列作為唯一的分類標(biāo)準(zhǔn)其鑒定結(jié)果具有不確定性。雖然ITS序列為多數(shù)物種的鑒定提供了有力工具，但對(duì)炭疽菌屬真菌系統(tǒng)發(fā)育樹構(gòu)建的支持率較低，具有一定的局限性[22]。因此，我們采用多基因系統(tǒng)發(fā)育分析法對(duì)病原菌的ITS、ACT、TUB 2、CHS-1、GAPDH和HIS 3基因進(jìn)行聯(lián)合分析，系統(tǒng)發(fā)育樹結(jié)果顯示，病原菌與尖孢炭疽菌C.acutatum模式菌株（CBS 292.67）聚為一個(gè)進(jìn)化支，支持率為98%。其他分支中，同種菌株間也以非常高的支持率聚在一起，比單基因序列更能準(zhǔn)確地鑒定炭疽菌的種類[23]。辣椒炭疽病由多種致病菌引起，由尖孢炭疽菌引起的辣椒炭疽病在山東[14]、重慶[24]、湖南[25]、江西[26]等地較為普遍，而在貴州尚未報(bào)道。結(jié)合形態(tài)學(xué)特征和多基因分析結(jié)果鑒定該辣椒炭疽病的病原菌為尖孢炭疽菌C.acutatum。本結(jié)果與楊佳文等[27]在陜西省線辣椒上首次發(fā)現(xiàn)的尖孢炭疽菌基本相同。尖孢炭疽菌侵染后發(fā)病速度快，傳染力強(qiáng)，且具有很強(qiáng)的寄主組織?；裕軌蛭：Σ葺?、蘋果、辣椒、杧果等的果實(shí)[28]，對(duì)果實(shí)的品質(zhì)和產(chǎn)量造成一定的影響。

采用菌絲生長(zhǎng)速率法對(duì)8種不同殺菌劑進(jìn)行了室內(nèi)毒力測(cè)定。結(jié)果顯示8種殺菌劑對(duì)辣椒炭疽病菌均有一定的抑制作用。從EC50來看，30%吡唑醚菌酯SC與25%咪鮮胺EC對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制效果最好，EC50為0.720 3和0.253 5 mg/L，相關(guān)結(jié)果與劉曦等[8]用咪鮮胺處理辣椒炭疽病菌和林琳等[29]用吡唑醚菌酯處理辣椒黑色炭疽菌和膠孢炭疽菌的毒力測(cè)定結(jié)果基本一致，即25%咪鮮胺EC和30%吡唑醚菌酯SC均表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制作用，EC50分別為0.144 5和0.481 8 mg/L;其次是22.5%啶氧菌酯SC，EC50為7.249 5 mg/L，與任璐等[30]在研究辣椒炭疽病對(duì)啶氧菌酯敏感性的測(cè)定中得出的結(jié)論相似。另外，50%多菌靈·代森錳鋅WP，27%春雷·溴菌腈WP和22.7%二氰蒽醌SC的抑菌活性較好，而40%百菌清SC及20%噁霉·乙蒜素WP的抑菌效果一般，與彭好翌[31]用百菌清處理辣椒尖孢炭疽菌和膠孢炭疽菌得出的結(jié)論一致，即都沒有表現(xiàn)出較高的抑制作用。

吡唑醚菌酯是一種新近開發(fā)的農(nóng)藥，它能夠抑制孢子萌發(fā)，影響菌絲生長(zhǎng)，而二氰蒽醌有很好的保護(hù)活性和防治作用，目前這兩種藥劑混配只在防治蘋果炭疽病上使用過，且具有明顯的防治效果[32]，而在辣椒炭疽病的防治上，還尚未見報(bào)道，故選擇這兩種藥劑混配來研究其對(duì)辣椒炭疽病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用。試驗(yàn)結(jié)果表明30%吡唑醚菌酯SC和22.7%二氰蒽醌SC按照4∶6、6∶4、9∶1和3∶7的比例進(jìn)行混配，EC50均明顯低于兩種單劑中的某一種單劑，說明以這4種配比組合進(jìn)行混配對(duì)辣椒炭疽病菌具有較強(qiáng)的抑制作用，且共毒系數(shù)均大于120，具有顯著的增效作用。啶氧菌酯作為甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑，突變位點(diǎn)單一，長(zhǎng)期使用易產(chǎn)生抗藥性[33]，且還沒有被廣泛用于辣椒炭疽病的防治，因此可以選擇與其作用機(jī)理不同且沒有交互抗性的甾醇合成抑制劑殺菌劑咪鮮胺進(jìn)行混配探究其對(duì)辣椒炭疽病菌的抑制作用。試驗(yàn)結(jié)果表明25%咪鮮胺EC和22.5%啶氧菌酯SC以6∶4、2∶8和4∶6進(jìn)行混配時(shí)，其EC50均較小，且明顯小于兩種單劑的EC50，說明以這三種配比組合進(jìn)行混配均對(duì)辣椒炭疽病菌具有較強(qiáng)的抑制作用。通過藥劑間混配，不僅顯著增強(qiáng)了藥劑對(duì)病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用，也有利于延緩病菌抗藥性的產(chǎn)生，延長(zhǎng)藥劑的使用壽命。

由于田間環(huán)境影響因素多，室內(nèi)篩選的藥劑與田間實(shí)際防效可能存在差異，對(duì)于藥劑作用于病菌孢子的情況也有待進(jìn)一步試驗(yàn)。不同殺菌劑對(duì)不同致病菌的毒力存在差異，有必要明確炭疽菌屬的生物學(xué)特性，從而為該病的防治奠定基礎(chǔ)。目前，辣椒炭疽病發(fā)生范圍逐年擴(kuò)大，且呈現(xiàn)病情加劇的趨勢(shì)，化學(xué)藥劑防治只是綜合防治中的一個(gè)環(huán)節(jié)，為實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展，避免因田間管理不當(dāng)而造成病原菌的再次流行和暴發(fā)，應(yīng)結(jié)合農(nóng)業(yè)防治措施，開展針對(duì)辣椒炭疽病的抗病品種選育和無(wú)病種苗繁育工作，加強(qiáng)栽培管理，改進(jìn)栽培措施，減少農(nóng)藥使用，從而有效控制辣椒炭疽病的發(fā)生和蔓延。

參考文獻(xiàn)

[1] DEAN R， VAN KAN J A， PRETORIUS Z A， et al. The top 10 fungal pathogens in molecular plant pathology [J]. Molecular Plant Pathology， 2012， 13（4）： 804.

[2] 程微娜，薛麗靜，卜瑞，等.辣椒主要病害的識(shí)別及防治[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2011（17）：164.

[3] 席亞東，向運(yùn)佳，彭化賢，等.四川省蔬菜病蟲害發(fā)生特點(diǎn)及防控對(duì)策[J].中國(guó)蔬菜，2014（6）：7881.

[4] 蔣桂芳，宋力.辣椒炭疽病生物防治技術(shù)的研究與展望[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014（11）：24812485.

[5] 周傳波，謝圣華，吉訓(xùn)聰，等.海南省辣椒炭疽病病原菌鑒定與防治試驗(yàn)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2008（1）：6364.

[6] 李小霞，肖仲久.貴州省辣椒炭疽病病原菌鑒定及室內(nèi)毒力測(cè)定[J].廣東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，38（17）：5557.

[7] THAN P P， JEEWON R， HYDE K D， et al.Characterization and pathogenicity of Colletotrichum species associated with anthracnose infection on chilli （Capsicum spp.） in Thailand [J].Plant Pathology， 2010， 57（3）：562572.

[8] SHARMA P N， KAUR M O P， SHARMA P， et al.Morphological， pathological and molecular variability in Colletotrichum capsici， the cause of fruit rot of chillies in the subtropical region of North-western India[J].Journal of Phytopathology， 2010， 153（4）：232237.

[9] LIU Fang， CAI Lei， CROUS P W， et al.Circumscription of the anthracnose pathogens Colletotrichum lindemuthianum and C.nigrum [J].Mycologia， 2013， 105（4）： 844860.

[10]孫春英， 毛勝利， 張正海，等. 辣椒抗炭疽病遺傳與育種研究進(jìn)展[J]. 園藝學(xué)報(bào)， 2013， 40（3）：579590.

[11]PERES N A R， SOUZA N L， ZITKO S E， et al. Activity of benomyl for control of postbloom fruit drop of citrus caused by Colletotrichum acutatum [J]. Plant Disease，2002，86（6）：620624.

[12]李紅霞，劉照云，王建新，等.辣椒炭疽病菌對(duì)嘧菌酯的敏感性測(cè)定[J].植物病理學(xué)報(bào)，2005，35（1）：7377.

[13]方中達(dá).植病研究方法[M].北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1998.

[14]高楊楊， 禾麗菲， 李北興， 等. 山東省辣椒炭疽病病原菌的鑒定及高效防治藥劑的篩選[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，50（8）：14521464.

[15]馬瑞，徐剛，鄭樊，等.海南省溫郁金炭疽病的病原鑒定[J].植物保護(hù)，2018，44（4）： 8186.

[16]CANNON P F， DAMM U， JOHNSTON P R， et al. Colletotrichum-current status and future directions [J]. Studies in Mycology， 2012， 73：181213.

[17]何寧祖，梁育喆，黃樹生，等.甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽與殺蟲雙對(duì)斜紋夜蛾毒力最佳配比篩選[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2012，43（3）：322325.

[18]SUN Yunpei， JOHNSON E R. Analysis of joint action of insecticides against house flies [J]. Journal of Economic Entomology， 1960， 53（5）： 887892.

[19]魏景超. 真菌鑒定手冊(cè)[M]. 上海： 科學(xué)技術(shù)出版社， 1979.

[20]陸家云. 植物病原真菌學(xué)[M]. 北京： 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社， 2001.

[21]SMITH B J， BLACK L L. Morphological， cultural， and pathogenic variation among Colletotrichum species isolated from strawberry [J]. Plant Disease， 1990， 74（1）：6976.

[22]MORIWAKI J， TSUKIBOSHI T， SATO T. Grouping of Colletotrichum species in Japan based on rDNA sequences [J]. Journal of General Plant Pathology， 2002， 68（4）：307320.

[23]DAMM U， CANNON P F， WOUDENBERG J H C， et al. The Colletotrichum acutatum species complex [J]. Studies in Mycology， 2012， 73：37113.

[24]張世才，李怡斐，黃任中，等.重慶加工型辣椒炭疽病病原鑒定及防治藥劑室內(nèi)毒力測(cè)定[J].分子植物育種，2017，15（5）：19331937.

[25]夏花，朱宏建，周倩，等.湖南芷江辣椒上一種新炭疽病的病原鑒定[J].植物病理學(xué)報(bào)，2012，42（2）：120125.

[26]劉冰，王連英，黃新根，等.1種辣椒新炭疽病的初步鑒定及室內(nèi)藥劑篩選[J].生物災(zāi)害科學(xué)，2013（3）：262264.

[27]楊佳文，趙尊練，張管曲，等.陜西線辣椒炭疽病原菌的鑒定及生物學(xué)特性研究[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017（11）：131141.

[28]陳國(guó)慶.中國(guó)柑橘炭疽病病原種類及種群遺傳多樣性研究[D].杭州：浙江大學(xué)，2010.

[29]林琳，高同春，高智謀，等.多菌靈和吡唑醚菌酯對(duì)2種辣椒炭疽病菌聯(lián)合毒力的測(cè)定[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（14）：85178519.

[30]任璐，周建波，劉慧平，等.辣椒炭疽病菌Colletotrichum gloeosporioides對(duì)啶氧菌酯的敏感基線及抗性突變體生物學(xué)性狀[J].植物保護(hù)，2017，43（6）：2937.

[31]彭好翌.常用殺菌劑及其組合劑對(duì)辣椒兩種炭疽病菌的離體抑制效果研究[D].長(zhǎng)沙：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，2010.

[32]劉秀香.不同殺菌劑防治蘋果炭疽病對(duì)比試驗(yàn)[J].河北果樹，2015（3）：4849.

[33]石玉星，曹俊宇，任璐，等.辣椒炭疽病菌抗啶氧菌酯突變體滲透壓敏感性及交互抗性[J].山西農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（6）：10021005.

（責(zé)任編輯：楊明麗）