劉 露 楊福兵 朱明建 徐有臨

(西南醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院神經(jīng)外科，瀘州646000)

神經(jīng)膠質(zhì)瘤是發(fā)生于神經(jīng)外胚層的惡性腫瘤，據(jù)最新統(tǒng)計(jì)，我國膠質(zhì)瘤的發(fā)病率從1973年的5.9/10萬上升到2016年的6.61/10萬[1]，目前研究表明，神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)病與抑癌基因的失活、氧化應(yīng)激損傷、遺傳基因突變和細(xì)胞自噬抑制有關(guān)，但具體發(fā)病原因及其機(jī)制尚不明確[2]，因此迫切需要闡明膠質(zhì)瘤的病因及其可能的機(jī)制，并找到更有效的診療策略。 近年來，全基因組轉(zhuǎn)錄研究發(fā)現(xiàn)，只有大約1%的人類基因組作為蛋白質(zhì)的藍(lán)圖，而更大比例的基因組被轉(zhuǎn)錄為非編碼RNA[3]。長非編碼RNA(Long non-coding RNA，LncRNA)是非蛋白質(zhì)編碼轉(zhuǎn)錄本長度超過200個(gè)核苷酸(nt)，已證實(shí)LncRNA在各種人類腫瘤的進(jìn)展中充當(dāng)關(guān)鍵分子[3]。如Cancer susceptibility candidate 2(CASC2)是位于染色體10q26的LncRNA，最初被鑒定為子宮內(nèi)膜癌的下調(diào)基因，并且也充當(dāng)腫瘤抑制基因[4]。越來越多的研究表明CASC2的上調(diào)，可明顯抑制惡性腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移[5]。Huang等[6]研究表明，CASC2在結(jié)腸癌中呈低表達(dá)狀態(tài)，增加CASC2的表達(dá)可以通過抑制miR-18a的表達(dá)，進(jìn)而抑制JAK2/STAT3通路的激活，從而抑制結(jié)腸癌細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，并且CASC2的表達(dá)與臨床分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)[6]?？梢奀ASC2可能是治愈惡性腫瘤的重要靶點(diǎn)，然而關(guān)于神經(jīng)膠質(zhì)瘤中CASC2的表達(dá)水平以及其是否參與膠質(zhì)瘤形成，知之甚少。因此我們研究CASC2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者體內(nèi)表達(dá)水平與疾病分期的關(guān)系，通過構(gòu)建CASC2過表達(dá)載體，研究CASC2對(duì)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的影響，并對(duì)其可能的機(jī)制進(jìn)行探討。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣本 收集2017年1月至2018年6月在我院行神經(jīng)膠質(zhì)瘤切除術(shù)患者的腫瘤組織18例及其病例資料，術(shù)后病檢均證實(shí)為神經(jīng)膠質(zhì)瘤，并且取同時(shí)期腦外傷及癲癇手術(shù)中切除的腦組織18例作為對(duì)照組，取材大小約0.5 cm×0.5 cm×0.5 cm，取材后立即將標(biāo)本放入液氮罐中保存，直至提取RNA。術(shù)前所有患者未經(jīng)放療及化療，術(shù)前患者均簽署研究知情同意書，本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)審批通過。

1.1.2 試劑 Lipofectamine-2000、RPMI1640細(xì)胞培養(yǎng)基、胎牛血清購于美國Invitrogen公司，Matrigel基質(zhì)膠購于美國B&D公司，雙熒光素酶實(shí)驗(yàn)試劑盒、逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、實(shí)時(shí)定量PCR試劑、熒光素酶報(bào)告基因載體psi-CHECK載體購于美國Promega公司，RNAiso Plus購于日本TaKaRa公司。CCK-8試劑盒、全蛋白提取試劑盒、BCA蛋白濃度檢測試劑盒、高靈敏ECL化學(xué)放光試劑盒購于上海碧云天公司。人膠質(zhì)瘤細(xì)胞A127、U251、U87、正常人星形膠質(zhì)細(xì)胞系HA及人腎上皮細(xì)胞HEK293細(xì)胞均購于中科院上海細(xì)胞庫。人表皮生長因子受體(Epi-dermal growth factor receptor，EGFR)、p-AKT、PI3K、GAPDH抗體均購于美國Abcam公司，IgG二抗購于上海碧云天，CASC2 mimics、CASC2-NC mimics、miR-634 mimics、miR-NC mimics 購于蘇州吉瑪制藥公司，miR-634啟動(dòng)子的野生型和突變序列由上海生工合成，并連接到pcDNA3.1質(zhì)粒上。突變質(zhì)粒構(gòu)建試劑量盒QuikChange Site-Directed Mutagenesis kit購于美國CA公司。Transwell小室購于美國康寧公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及轉(zhuǎn)染 A127、U251、U87和HA細(xì)胞在補(bǔ)充有10%胎牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中培養(yǎng)，溫度為37℃，并控制CO2濃度為5%。將細(xì)胞傳代培養(yǎng)至第3代，以70%～80%的密度接種于培養(yǎng)基中。根據(jù)轉(zhuǎn)染手冊(cè)，使用Lipofectamine-2000將miR-CASC2 mimics轉(zhuǎn)染至U87細(xì)胞，并將CASC2-NC mimics轉(zhuǎn)染至U87細(xì)胞中作為對(duì)照組1；再將miR-634 mimics轉(zhuǎn)染至U87細(xì)胞，并將miR-NC mimics轉(zhuǎn)染至U87細(xì)胞中作為另外對(duì)照組2。

1.2.2 RNA提取和實(shí)時(shí)定量PCR 根據(jù)RNAiso Plus操作說明書提取并擴(kuò)增總RNA，并使用RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，得到cDNA模板，將10 μl qPCR混合物及每種引物0.5 μl混合均勻，配制成最終的20 μl反應(yīng)混合物。用于擴(kuò)增的熱循環(huán)參數(shù)如下：94℃變性2 min；94℃ 20 s，58℃ 20 s，72℃ 30 s，40個(gè)循環(huán)；25℃ 5 min終止反應(yīng)，構(gòu)建熔解曲線并在62℃和95℃之間進(jìn)行分析，使用2-ΔΔCT法計(jì)算靶基因的相對(duì)表達(dá)水平。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。本研究中使用的引物如下：CASC2上游引物，5′-GAGGAGCCATCCGCACATCACAAT-3′,下游引物5′-AG-CTTAGACTGTAAGCTGGTCTCA-3′;U6內(nèi)參上游引物：5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′,下游引物5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′;miR-634上游引物：5′-CCUUCAAUUUGACCGUCCU-3′,下游引物：5′-AAU-AAAACCAGGUCGAAUAGGU-3′;β-actin上游引物：5′-CCACACCTTCTACAATGAG-3′,下游引物5′-ATAGCACAGCCTGGATAG-3′。

1.2.3 雙熒光素酶活性測定 為了確定CASC2與miR-634的調(diào)控關(guān)系，使用TargetScan(www.targetscan.org)和Starbase(starbase.sysu.edu.cn)數(shù)據(jù)庫預(yù)測其靶基因，并發(fā)現(xiàn)兩者具有互補(bǔ)的結(jié)合位點(diǎn)。從正常人基因組DNA擴(kuò)增含有CASC2互補(bǔ)位點(diǎn)的miR-634 3′UTR序列，并克隆到psi-CHECK載體中，將該結(jié)合位點(diǎn)作為野生型miR-634 3′UTR。使用QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit產(chǎn)生突變型miR-634 3′UTR重組質(zhì)粒。在轉(zhuǎn)染不同質(zhì)粒組合后48 h，根據(jù)說明使用雙熒光素酶測定試劑盒檢測熒光素酶活性，共轉(zhuǎn)染的海腎熒光素酶質(zhì)粒用作確定轉(zhuǎn)染效率的內(nèi)部對(duì)照，使用雙熒光素酶報(bào)告分析系統(tǒng)(Promega)檢測熒光強(qiáng)度。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.4 免疫蛋白印跡實(shí)驗(yàn) 根據(jù)說明使用總蛋白質(zhì)提取試劑盒提取總蛋白質(zhì)，并測定每個(gè)樣品中的蛋白質(zhì)濃度，通過SDS-PAGE分離后，將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜中，使用BSA封閉液封閉1 h，EGFR(1∶1 000)、p-AKT(1∶2 000)、PI3K(1∶1 200)、GAPDH(1∶2 000)4℃孵育過夜后，TBST溶液洗膜3次后，在室溫下孵育二抗(1∶10 000)1 h。使用ECL顯影液檢測EGFR、p-AKT和PI3K蛋白的表達(dá)水平，GAPDH作蛋白內(nèi)參對(duì)照。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.5 CCK-8細(xì)胞增殖活性測定 將指數(shù)生長的U87細(xì)胞(5×105個(gè)/ml)接種到96孔板，然后分別將細(xì)胞培養(yǎng)72 h，加入10 μl/ml CCK-8溶液，然后在37℃、5%CO2下孵育4 h。使用酶標(biāo)儀在490 nm波長下測量細(xì)胞在48 h的OD值，細(xì)胞活力(%)=[OD(實(shí)驗(yàn)組)-OD(空白)]/[OD(對(duì)照組)-OD(空白)]×100%。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.6 Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn) 將200 ml含細(xì)胞的培養(yǎng)基(1×104個(gè))接種到每個(gè)Transwell的上部隔室中，并在37℃下孵育24 h，使細(xì)胞通過多孔膜遷移。孵育24 h后，殘留在腔室上表面的細(xì)胞被完全去除，而膜的下表面用4%多聚甲醛固定20 min，然后在0.5%(w/v)結(jié)晶紫溶液中染色5 min，洗滌后，使用Image-Pro Plus 6.0軟件測定不同組別中的細(xì)胞數(shù)。侵襲實(shí)驗(yàn)前預(yù)先用40 ml Matrigel基質(zhì)膠在4℃條件下過夜融化,并與3倍體積的無血清培養(yǎng)基混合均勻后加入24孔Transwell小室(每孔50 μl)，其余實(shí)驗(yàn)步驟及方法同遷移實(shí)驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

2 結(jié)果

2.1 CASC2的表達(dá)與神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者病理分期相關(guān)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān) 我們收集整理18例神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者相關(guān)臨床資料進(jìn)行對(duì)比分析，見表1。結(jié)果發(fā)現(xiàn)CASC2的表達(dá)與年齡、性別(P>0.05)。CASC2的表達(dá)與神經(jīng)膠質(zhì)瘤的病理分期相關(guān)以及與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)，神經(jīng)膠質(zhì)瘤病理分期越高，CASC2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)水平越低(P<0.05)，并且在發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者中CASC2的表達(dá)水平明顯降低(P<0.05)。

2.2 CASC2在膠質(zhì)瘤組織及A127、U251、U87、HA細(xì)胞系中表達(dá)降低 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)膠質(zhì)瘤中CASC2的表達(dá)較外傷及癲癇組織降低(P<0.05，圖1A)。CASC2在A127、U251、U87細(xì)胞系中表達(dá)降低，并且在U87細(xì)胞系中降低最為顯著(P<0.05,圖1B)。因此選取U87進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。

2.3 CASC2可靶向下調(diào)U87細(xì)胞系中miR-634的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中的miR-634的表達(dá)含量較對(duì)照組織降低(P<0.05，圖2A)。miR-634在A127、U251、U87細(xì)胞系中表達(dá)同樣降低(P<0.05,圖2B)。雙熒光素酶報(bào)告基因結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，CASC2 mimics與miR-634 3′UTR Wt共轉(zhuǎn)染的HEK293細(xì)胞中miR-634的表達(dá)活性明顯降低(P<0.05，圖2D)。

表1 CASC2表達(dá)與神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者臨床病理特征的關(guān)系

Tab.1 Correlation between expression of CASC2 and clinicopathological features of Glioma

Clinicopathological datanCASC2 relative expressionP valueAge(year)0.642≤40100.62±0.18>4080.59±0.14Gender0.315Male90.60±0.17Female90.68±0.16Pathological stage0.001Ⅰ-Ⅱ61.28±0.25Ⅲ-Ⅳ120.32±0.11Lymphatic metastasis0.002-130.80±0.15+50.22±0.10

圖1 CASC2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中及A127、U251、U87細(xì)胞系中的表達(dá)水平Fig.1 Expression level of CASC2 in glioma tissues and A127，U251，U87 cell linesNote: *.P<0.05 vs HA group.

圖2 CASC2與miR-634在U87細(xì)胞系中的調(diào)控關(guān)系Fig.2 Regulation of CASC2 and miR-634 in U87 cell lineNote: *.P<0.05 vs HA group;#.P<0.05 vs CASC2-NC mimics group.

圖3 過表達(dá)CASC2可抑制U87細(xì)胞系增殖、遷移和侵襲的影響Fig.3 Overexpression of CASC2 can inhibit the prolifera-tion,migration and invasion of U87 cell lineNote: *.P<0.05 vs CASC2-NC mimics.

2.4 過表達(dá)CASC2可抑制U87細(xì)胞系增殖、遷移和侵襲 CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明過表達(dá)CASC2后，在24、48、72 h時(shí)間點(diǎn)，U87細(xì)胞增殖數(shù)量較對(duì)照組明顯減少[(0.20±0.06)vs(0.26±0.08)、(0.31±0.10)vs(0.47±0.19)、(0.53±0.21)vs(0.82±0.28)，(P<0.05，圖3A)]；過表達(dá)CASC2表達(dá)后，Transwell實(shí)驗(yàn)表明U87細(xì)胞遷移及侵襲數(shù)量明顯低于對(duì)照組[(228.79±29.65)vs(358.13±47.02)、(158.77±22.51)vs(262.33±31.40)，P<0.05，圖3B]。

2.5 過表達(dá)miR-634可促進(jìn)U87細(xì)胞系增殖、遷移和侵襲的影響 CCK-8實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明過表達(dá)miR-634后，在24、48、72 h時(shí)間點(diǎn)，U87細(xì)胞增殖數(shù)量較對(duì)照組明顯增加[(0.23±0.05)vs(0.18±0.03)、(0.43±0.08)vs(0.32±0.06)、(0.75±0.08)vs(0.44±0.09)，(P<0.05，圖4A)]，Transwell實(shí)驗(yàn)表明U87細(xì)胞遷移及侵襲數(shù)目明顯多于對(duì)照組[(258.47±30.69)vs(162.13±21.58)、(222.82±27.10)vs(164.25±23.79)，P<0.05，圖4B]。

2.6 過表達(dá)miR-634負(fù)向調(diào)控EGFR、PI3K、p-AKT蛋白的表達(dá) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明過表達(dá)miR-634后，與對(duì)照組相比，EGFR、PI3K、p-AKT蛋白表達(dá)均不同程度降低，與miR-634的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)(P<0.05，圖5)。

圖4 過表達(dá)miR-634可促進(jìn)U87細(xì)胞系增殖、遷移和侵襲Fig.4 Overexpression of miR-634 can enhance the proliferation,migration and invasion of U87 cell line

圖5 過表達(dá)miR-634對(duì)EGFR、PI3K和p-AKT蛋白表達(dá)影響Fig.5 Effect of miR-634 overexpression on EGFR,PI3K and p-AKT protein expression

3 討論

由于腫瘤呈浸潤性生長，因而神經(jīng)膠質(zhì)瘤復(fù)發(fā)率高，預(yù)后極差[7]，目前放療及化療等輔助治療手段對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療起到一定的作用，但是效果并不顯著，5年生存率尚不足5%,平均生存期僅14個(gè)月[8]，因此迫切需要尋找治療神經(jīng)膠質(zhì)瘤的新方法。研究發(fā)現(xiàn)除蛋白質(zhì)編碼基因發(fā)生突變或異常表達(dá)外，非編碼RNA，尤其是LncRNA的突變和調(diào)節(jié)在癌癥中起主要作用[9]。正常情況下LncRNA可能表現(xiàn)出腫瘤抑制和促癌功能，其表達(dá)異常可直接影響腫瘤細(xì)胞的惡性生物學(xué)行為，并且LncRNA與腫瘤細(xì)胞耐藥性、腫瘤診斷及預(yù)后具有顯著相關(guān)性[10]。Nie等[11]研究表明LncRNA-UCA1可以通過作用于下游微小RNA(miR-193a-3p)，上調(diào)ERBB4蛋白的表達(dá)，影響非小細(xì)胞肺癌的增殖和轉(zhuǎn)移，沉默LncRNA-UCA1表達(dá)后，非小細(xì)胞肺癌的增殖和轉(zhuǎn)移能力明顯增加，同時(shí)多種LncRNAs包括CRNDE、MEG3和HOTAIR，已經(jīng)被鑒定為神經(jīng)膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中的新調(diào)節(jié)劑，可作為潛在的治療靶標(biāo)[12]。因此LncRNA在腫瘤發(fā)病機(jī)制中的作用是確切的，但其是否具有特異性及敏感性，與在體神經(jīng)膠質(zhì)瘤的診斷及預(yù)后關(guān)系仍不能明了。

CASC2 最初在子宮內(nèi)膜癌患者中被發(fā)現(xiàn)為潛在的腫瘤抑制因子，已被證明具有調(diào)節(jié)胃癌細(xì)胞增殖的能力并與胃癌患者的預(yù)后相關(guān)[13]。 Gan等[14]對(duì)80例原發(fā)性肝癌患者的組織進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，62%的患者組織中CASC2出現(xiàn)了明顯下降，并通過過表達(dá)CASC2，發(fā)現(xiàn)原發(fā)性肝癌細(xì)胞在小鼠體內(nèi)成瘤能力明顯增加，因此CASC2可能是惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展的共同關(guān)鍵因子，然而，CASC2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中的作用仍不清楚。因此本研究通過實(shí)時(shí)定量PCR檢測，發(fā)現(xiàn)CASC2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞中表達(dá)明顯降低，進(jìn)一步增強(qiáng)CASC2的表達(dá)后，細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移受到明顯抑制，這與CASC2在乳腺癌、結(jié)腸癌和胃癌中的表達(dá)趨勢一致。同時(shí)我們收集整理18例神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者相關(guān)臨床資料進(jìn)行對(duì)比分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)神經(jīng)膠質(zhì)瘤病理分期越低，CASC2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織中表達(dá)水平越高，并且在發(fā)生轉(zhuǎn)移的患者中CASC2的表達(dá)水平明顯降低，可見CASC2在神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演者抑癌基因的角色，可作為治療時(shí)增強(qiáng)療效的潛在靶標(biāo)。

miRNA是由長度為20～22個(gè)核苷酸組成的短鏈非編碼RNA，miRNA通過轉(zhuǎn)錄后水平與3′-UTR結(jié)合來調(diào)節(jié)靶基因的表達(dá)[15,16]。越來越多的研究表明，miRNA在腫瘤的發(fā)生發(fā)展過程中扮演著重要角色，通過與靶基因的3′-UTR結(jié)合，形成RNA誘導(dǎo)或沉默復(fù)合體，在轉(zhuǎn)錄或翻譯水平對(duì)靶基因表達(dá)進(jìn)行上調(diào)或下調(diào)，從而對(duì)腫瘤細(xì)胞生物學(xué)行為產(chǎn)生影響[17]。例如miR-634可增強(qiáng)神經(jīng)膠質(zhì)瘤CNE-1/Taxol細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，加速神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞DNA的損傷[18]。miR-634通過下調(diào)mTOR基因的表達(dá)，促進(jìn)宮頸癌細(xì)胞凋亡，抑制其惡性生物學(xué)行為，并且與宮頸癌的分級(jí)分期存在密切的關(guān)系[19]。然而神經(jīng)膠質(zhì)瘤中CASC2是否與miR-634有相互作用尚不清楚。因此我們進(jìn)一步對(duì)CASC2與miR-634的相互作用機(jī)制進(jìn)一步探究，我們發(fā)現(xiàn)miR-634的表達(dá)水平在神經(jīng)膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞中明顯降低，進(jìn)一步增強(qiáng)miR-634的表達(dá)后，細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移明顯增強(qiáng)，這也驗(yàn)證miR-634在神經(jīng)膠質(zhì)瘤進(jìn)展過程中起著促癌基因的作用，同時(shí)我們使用TargetScan、Starbase數(shù)據(jù)庫預(yù)測CASC2的靶基因，發(fā)現(xiàn)CASC2與miR-634具有互補(bǔ)結(jié)合序列，推測miR-634為CASC2的下游靶基因，熒光光素酶基因報(bào)告顯示CASC2 mimics與野生型載體miR-634 3′UTR Wt共轉(zhuǎn)染后，miR-634的熒光素酶活性顯著降低，表明miR-634是CASC2的靶基因，靶向調(diào)控miR-634表達(dá)水平，可抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移。EGF于1962年在新生鼠中被首次發(fā)現(xiàn)[20]。約20年后EGFR被分離純化[21]。EGFR主要是通過二聚化后刺激Ras蛋白,導(dǎo)致磷酸化級(jí)聯(lián)反應(yīng)而激活PI3K/Akt信號(hào)通路,從而引起腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[22]。研究表明EGFR和PI3K的表達(dá)水平隨神經(jīng)膠質(zhì)瘤級(jí)別上升而增高，EGFR的表達(dá)與PI3K的表達(dá)呈正相關(guān),可以表明EGFR過表達(dá)可能通過激活PI3K信號(hào)通路在膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展中起作用[23]。并且本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明促進(jìn)miR-634表達(dá)后，EGFR、PI3K、P-AKT蛋白表達(dá)均不同程度降低，與miR-634的表達(dá)呈明顯負(fù)相關(guān)，這也表明CASC2可通過下調(diào)miR-634的表達(dá)抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移，其有效作用機(jī)制可能是通過抑制EGFR/PI3K/AKT通路實(shí)現(xiàn)。但遺憾的是本研究并沒有直徑證據(jù)證明CASC2是調(diào)控EGFR/PI3K/AKT直接證據(jù)，也未進(jìn)行相關(guān)臨床研究，后續(xù)還將進(jìn)一步探討。

綜上所述，本研究證明CASC2可靶向調(diào)控miR-634基因的表達(dá)，通過EGFR/PI3K/AKT通路，從而抑制神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移，可為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的靶向治療及臨床藥物的研制提供新的思路。