郁 樺,常 萍,陳蓓旖,韋 蓉,馬麗娜,牛詩(shī)捷,甘 露,毛宇航,程光宇,4,*

(1.江蘇天美健大自然生物工程有限公司,江蘇南京 210046;2.南京師范大學(xué)中北學(xué)院,江蘇南京 210046;3.南京師范大學(xué)泰州學(xué)院,江蘇泰州 225300;4.南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,江蘇南京 210023)

骨質(zhì)疏松癥是目前全球發(fā)病率、致殘率及醫(yī)療費(fèi)用較高的疾患之一,是以骨量減少、骨質(zhì)量受損及骨強(qiáng)度降低,導(dǎo)致骨脆性增加、易發(fā)生骨折為特征的全身性骨病,被世界衛(wèi)生組織列為三大老年疾病之一。隨著我國(guó)進(jìn)入老齡社會(huì),骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病率持續(xù)增高,全國(guó)大約有0.9億骨質(zhì)疏松癥患者[1],其中絕經(jīng)后婦女骨質(zhì)疏松的概率約為80%[2]。目前,對(duì)于骨質(zhì)疏松癥的防治多采用抗骨質(zhì)吸收藥物,如鈣劑、降鈣素、雌激素等和促進(jìn)骨形成藥物,如甲狀旁腺激素、類固醇等化學(xué)藥物進(jìn)行聯(lián)合防治[3]。但有些藥物價(jià)格高,作用單一,有毒副作用,長(zhǎng)期服用會(huì)對(duì)身體產(chǎn)生不利影響。近幾年,一些中藥及其復(fù)方制劑能促進(jìn)骨形成,提高骨密度,在治療骨質(zhì)疏松癥方面顯示了顯著療效[4]。我國(guó)動(dòng)植物藥資源豐富,從中篩選出安全、高效的預(yù)防骨質(zhì)疏松癥的天然制劑,是一種理想的防治方法。

大豆異黃酮是來(lái)自大豆的天然成分,具有雌激素樣作用,能有效預(yù)防婦女更年期的骨質(zhì)疏松癥,同時(shí)也是良好的抗氧化物質(zhì)。牛初乳凍干粉是奶牛分娩后7 d以內(nèi)乳汁的凍干制劑,不僅含有豐富的人體必需營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),還含有免疫球蛋白、生長(zhǎng)因子等多種生物活性物質(zhì)。研究表明牛初乳凍干粉具有抗氧化和自由基清除作用[5],能促進(jìn)胎鼠骨骼發(fā)育和成骨細(xì)胞增殖[6]。來(lái)源牛奶的一種抗氧化肽能預(yù)防氧化應(yīng)激所致的成骨細(xì)胞功能紊亂[7]。超細(xì)鮮骨粉是優(yōu)良的補(bǔ)鈣劑,生物吸收利用率高達(dá)60%～90%,其制劑對(duì)大鼠骨質(zhì)疏松有改善作用[8]。最近的研究顯示,大豆異黃酮和牛初乳凍干粉在體內(nèi)、外的實(shí)驗(yàn)中具有較好的抗氧化特性[5,9]。利用大豆異黃酮、牛初乳凍干粉和超細(xì)鮮骨粉制備成復(fù)合制劑,已經(jīng)初步顯示了能增加去卵巢大鼠的骨密度,對(duì)子宮有較好的抗氧化作用[10]。

研究表明,氧化應(yīng)激是絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥的重要發(fā)病機(jī)制[11],抗氧化劑能通過(guò)激活成骨細(xì)胞分化,抑制破骨細(xì)胞活性和骨細(xì)胞凋亡,誘導(dǎo)骨形成,預(yù)防去卵巢大鼠的骨質(zhì)丟失[12]。因此,可通過(guò)使用有抗氧化活性的物質(zhì)來(lái)提高機(jī)體抗氧化能力,達(dá)到防治骨質(zhì)疏松的目的?？寡趸冈跈C(jī)體的抗氧化系統(tǒng)中發(fā)揮著極其重要的作用,其在血漿和組織中的水平能反映機(jī)體氧化應(yīng)激狀態(tài)和抗氧化能力,為骨質(zhì)疏松的防治提供依據(jù)。但目前報(bào)道的主要是骨質(zhì)疏松患者或動(dòng)物血漿(液)的抗氧化能力,對(duì)其主要組織的抗氧化作用研究較少。

本文以大豆異黃酮、牛初乳凍干粉和超細(xì)鮮骨粉為原料制成復(fù)合制劑,通過(guò)測(cè)定活性氧清除作用,利用建立去卵巢動(dòng)物模型模擬絕經(jīng)后女性的骨質(zhì)疏松,測(cè)定骨密度、礦質(zhì)元素和血液、肝、腎、脾組織的抗氧化作用,進(jìn)一步探討復(fù)合制劑對(duì)去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥的改善和抗氧化作用,旨在為具有增加骨密度功能的保健食品的開(kāi)發(fā)利用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

大豆異黃酮和牛初乳復(fù)合制劑[簡(jiǎn)稱復(fù)合制劑(SIBC)]組成成分為大豆異黃酮、牛初乳凍干粉和超細(xì)鮮骨粉,含量分析表明,SIBC中主要功能成分含量大豆苷為2.98%,大豆苷元為0.74%,染料木素為0.09%,染料木苷為0.7%,免疫球蛋白G為14.2%,蛋白質(zhì)為31.0%,鈣為9.25%。SIBC人體推薦攝入量為1.4 g/人/d,即23.3 mg/kg BW/d,該樣品不以補(bǔ)鈣為主;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康雌性SD大鼠60只,清潔級(jí),體重300 g左右,中國(guó)科學(xué)院上海實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心;飼料 參照AIN93飼料配方[13],配制成半成品飼料,用適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)替換飼料中來(lái)源于大豆的成分,以避免大豆異黃酮的植物雌激素樣作用對(duì)實(shí)驗(yàn)的影響(飼料的成分和含量如下:酪蛋白:23.0%;DL-蛋氨酸:0.3%;玉米淀粉:32.0%;蔗糖:30.0%;纖維素:5.0%;玉米油:5.0%;混合礦物鹽:3.5%;混合維生素:1.0%;二酒石酸膽堿:0.2%);四乙氧基丙烷、牛血清白蛋白、考馬斯亮藍(lán)G-250 美國(guó)Sigma公司;氯化硝基四氮唑藍(lán)(NBT)、水楊酸、硫代巴比妥酸、硝酸和高氯酸(優(yōu)級(jí)純) 國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;其他試劑 為國(guó)產(chǎn)分析純或生化試劑;AKP(堿性磷酸酶)試劑盒 南京建成生物工程研究所。

HG9620A型原子吸收分光光度計(jì) 沈陽(yáng)華光精密儀器有限公司;LUNAR EXPEERT #1117型雙能X線骨密度儀 美國(guó)LUNAR公司;Z36HK 型高速冷凍離心機(jī) 德國(guó)Hermle 公司;EV300型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì) 美國(guó)Thermo fisher公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 活性氧(ROS)清除作用的測(cè)定 取SIBC分別加入50 mmol/L的pH7.4和pH7.8的磷酸鹽緩沖液(PBS)及生理鹽水,混勻,超聲處理20 min,于8000×g冷凍離心10 min,取上清液配成一定濃度的系列樣品提取液,以VC為陽(yáng)性對(duì)照,按以下方法測(cè)定其ROS清除作用:

H2O2清除率(%)=(A0-A1+A2)/A0×100

1.2.2 大鼠骨質(zhì)疏松模型的建立 按文獻(xiàn)[13]建立大鼠骨質(zhì)疏松模型如下:大鼠經(jīng)用30 mg/kg BW戊巴比妥鈉溶液麻醉后仰臥位固定,距劍突下約3 cm處剪毛,碘伏消毒,正中切開(kāi)皮膚和腹肌,找到子宮,結(jié)扎輸卵管后依次切除雙側(cè)卵巢,分層縫合切口,最后經(jīng)肌肉注射2萬(wàn)U青霉素預(yù)防感染。大鼠去卵巢后逐只進(jìn)行陰道涂片(1次/d),連續(xù)7 d,檢查去卵巢是否完全。取去卵巢手術(shù)的成功大鼠用于實(shí)驗(yàn)。假手術(shù)組按同法進(jìn)行手術(shù),但僅切除一小塊脂肪,不切除卵巢。大鼠卵巢切除后恢復(fù)一周,進(jìn)行分組和處理。實(shí)驗(yàn)分為假手術(shù)組(對(duì)照組)、去卵巢組(模型組)、去卵巢加低劑量組(117 mg/kg,低劑量組)、去卵巢加中劑量組(233 mg/kg,中劑量組)和去卵巢加高劑量組(467 mg/kg,高劑量組),每組10只動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)樣品用雙蒸水配制,每天經(jīng)口灌胃給予(對(duì)照組和模型組給予與樣品體積相等的雙蒸水),連續(xù)灌胃90 d。實(shí)驗(yàn)期間所有動(dòng)物均飼喂配制飼料,自由攝食飲水,并定期測(cè)量體重。試驗(yàn)結(jié)束時(shí),尾部采血,4 ℃冰箱放置過(guò)夜,2500×g離心5 min,收集血清備用。處死動(dòng)物后取其股骨,并分離組織分別進(jìn)行骨骼和生化指標(biāo)分析。

1.2.3 骨密度測(cè)定 動(dòng)物處死后分離出左側(cè)股骨,用生理鹽水浸泡的紗布包裹,用雙能X線骨密度儀測(cè)定左側(cè)股骨中點(diǎn)和股骨遠(yuǎn)心端骨密度。

1.2.4 骨和血清中礦物元素含量的測(cè)定 取大鼠右側(cè)股骨,剔去肌肉等軟組織后于105 ℃干燥至恒重,用分析天平稱量骨干重,用游標(biāo)卡尺測(cè)量骨長(zhǎng)度。樣品中骨Ca含量測(cè)定采用混合酸(硝酸∶高氯酸=4∶1)消化法,按GB/T 5009.92-2003原子吸收分光光度法進(jìn)行。血清磷含量測(cè)定采用磷鉬藍(lán)比色法,參考張龍翔等[17]方法。血清Ca、Zn含量測(cè)定同樣采用混合酸消化法,分別按GB/T 5009.92-2003和GB/T 5009.14-2003進(jìn)行。

1.2.5 AKP 活性測(cè)定 血清AKP 活性測(cè)定按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,結(jié)果以U/100 mL表示。

1.2.6 SOD活性測(cè)定 采用Stewert等[18]方法測(cè)定SOD活性。血液SOD測(cè)定時(shí),取20 μL血液于1 mL含肝素的生理鹽水中混勻,3000×g離心5 min,棄上清液,保留沉淀的紅細(xì)胞,加蒸餾水0.2 mL 充分溶血,加入95%乙醇0.1 mL,振蕩30 s,加入三氯甲烷0.1 mL,再振蕩30 s,6000×g離心5 min,上清液用于SOD活性測(cè)定。組織SOD測(cè)定時(shí),取組織剪碎后加入預(yù)冷50 mmol/L的磷酸緩沖液(pH7.8),于冰浴中進(jìn)行超聲波破碎(400 W,20 s×2),制備成10%勻漿,12000×g離心10 min,取上清液測(cè)定SOD活性。

1.2.7 MDA含量測(cè)定 取血和組織用0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液(pH7.4)分別制備10%溶血液和10%組織勻漿,2000×g離心10 min,取上清液用TBA比色法[13],以四乙氧基丙烷為標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定MDA含量。

1.2.8 血脂含量測(cè)定 血清總脂、總膽固醇(TC)及高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)測(cè)定分別按崔福生的香草醛微量法、鄰苯二甲醛測(cè)定法和鄰苯二甲醛顯色法[19]進(jìn)行。

1.2.9 蛋白質(zhì)含量測(cè)定 蛋白質(zhì)含量測(cè)定采用Breadford法[20],以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)蛋白。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 SIBC對(duì)ROS清除作用的影響

圖1 SIBC的和H2O2(C)的清除活性

2.2 SIBC對(duì)去卵巢大鼠體重的影響

實(shí)驗(yàn)期間,各組大鼠體重隨時(shí)間逐漸增加(表1),在實(shí)驗(yàn)第30、60、90 d時(shí),各去卵巢大鼠組體重顯著高于對(duì)照組(p<0.05);各去卵巢大鼠組在給予實(shí)驗(yàn)樣品后,組間動(dòng)物體重差異無(wú)顯著性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明SIBC對(duì)去卵巢大鼠體重的變化無(wú)顯著影響。

表1 SIBC對(duì)去卵巢大鼠體重的影響Table 1 Effects of SIBC on body weight of OVX

2.3 SIBC對(duì)去卵巢大鼠股骨Ca含量和骨密度的影響

造模后的模型組骨Ca含量和骨密度顯著低于對(duì)照組(p<0.05),表明去卵巢大鼠的骨質(zhì)疏松模型成立。在給予SIBC后,低、中、高劑量組骨Ca含量分別比模型組提高4.4%、10.3%、11.6%,且中、高劑量組骨Ca含量與模型組相比有顯著性差異(p<0.05)。去卵巢大鼠的股骨中點(diǎn)及遠(yuǎn)心端骨密度分別比對(duì)照組分別下降12.1%和16.6%,給予中、高劑量SIBC后,股骨中點(diǎn)及遠(yuǎn)心端骨密度分別比模型組提高10.0%、10.9%和9.1%、9.4%,均有顯著性差異(p<0.05)。各組大鼠的骨干重和骨長(zhǎng)測(cè)定無(wú)顯著性差異(見(jiàn)表2)。骨密度是評(píng)價(jià)骨質(zhì)疏松的直接指標(biāo),骨密度降低反映了骨Ca量丟失,以上結(jié)果表明,SIBC對(duì)去卵巢大鼠的骨Ca丟失和骨密度降低有較好緩解作用。

表2 SIBC對(duì)去卵巢大鼠股骨Ca含量和骨密度的影響Table 2 Effects of SIBC on femur calcium content and bone density of OVX

2.4 SIBC對(duì)去卵巢大鼠血清礦質(zhì)元素含量和AKP活力的影響

表3結(jié)果顯示,模型組血清Ca、Zn含量與對(duì)照組相比顯著下降(p<0.05),在給予SIBC后,與模型組相比,低劑量組血清Ca含量顯著增加(p<0.05),中劑量組血清Ca含量極顯著增加(p<0.01);中、高劑量組血清Zn含量均顯著增加(p<0.05)。造模后的模型組AKP活力極顯著高于對(duì)照組(p<0.01),在給予低、中、高劑量SIBC后,其AKP活力分別比模型組下降了34.2%、49.2%、35.7%,且與模型組相比,差異均有顯著性(p<0.05或p<0.01)。P含量在造模后低于對(duì)照組,但無(wú)顯著性差異,在給予SIBC后與模型組相比,未觀察到顯著性提高?？梢?jiàn),SIBC對(duì)去卵巢大鼠血清礦質(zhì)元素的增加和AKP活力降低有一定的改善作用。

表3 SIBC對(duì)去卵巢大鼠血清Ca、Zn、P含量及AKP活力的影響Table 3 Effects of SIBC on content of serum Ca,Zn,P and AKP activity of OVX

2.5 SIBC對(duì)去卵巢大鼠SOD活性的影響

大鼠血液和組織SOD活性測(cè)定見(jiàn)表4。造模后模型組大鼠血液、肝、腎SOD活性與對(duì)照組相比顯著降低(p<0.05或p<0.01),提示大鼠去卵巢后抗氧化酶活性下降,自由基代謝平衡失調(diào)。當(dāng)給予低、中、高劑量SIBC后,隨劑量的增加,SOD活性提高,且具有明顯的劑量依賴性,與模型組相比,中劑量組血液、腎SOD活性和高劑量組脾SOD活性分別提高了17.3%、8.0%和24.4%,差異顯著(p<0.05);高劑量組血液、肝、腎SOD活性分別提高了19.3%、12.5%和15.7%,差異極顯著(p<0.01)。說(shuō)明SIBC能通過(guò)提高血液和主要組織的抗氧化酶活性,有效清除自由基,降低氧化應(yīng)激反應(yīng),緩解去卵巢大鼠體內(nèi)自由基代謝平衡的失調(diào)。

表4 SIBC對(duì)去卵巢大鼠血液和主要組織SOD活性的影響Table 4 Effects of SIBC on blood and main tissue SOD activity of OVX

2.6 SIBC對(duì)去卵巢大鼠丙二醛(MDA)含量的影響

模型組大鼠的血液及組織MDA含量升高,其中血液、肝MDA含量與對(duì)照組相比,有顯著性差異(p<0.05)。在給予SIBC后,中劑量組的血液和肝MDA水平分別比模型組下降了31.2%、30.6%,有顯著性差異(p<0.05),接近對(duì)照組水平;中劑量組的脾和高劑量組的肝、腎MDA也分別比模型組下降了19.8%、26.5%、18.6%,有顯著性差異(p<0.05)(見(jiàn)表5)。提示SIBC能降低MDA含量,對(duì)骨質(zhì)疏松癥大鼠體內(nèi)氧化應(yīng)激所致的脂質(zhì)過(guò)氧損傷有較好的抑制作用。

表5 SIBC對(duì)去卵巢大鼠血液和主要組織MDA含量的影響Table 5 Effects of SIBC on blood and main tissue MDA content of OVX

2.7 SIBC對(duì)去卵巢大鼠血脂的影響

SIBC對(duì)去卵巢大鼠血脂的影響結(jié)果見(jiàn)表6。造模后的模型組大鼠血清TC含量比對(duì)照組升高,HDL-C含量比對(duì)照組降低,有顯著性差異(p<0.05或p<0.01),提示造模后動(dòng)物的血脂代謝異常。在給予SIBC后,中、高劑量組的TC含量比模型組分別降低了14.0%和15.8%,且差異顯著(p<0.05);低、中、高劑量組能極顯著地提高HDL-C水平(p<0.01),分別比模型組提高了23.3%、21.2%、17.2%。SIBC對(duì)總脂含量變化無(wú)顯著影響,但隨劑量增加有降低的趨勢(shì)。說(shuō)明SIBC對(duì)去卵巢大鼠血脂水平有一定的調(diào)節(jié)作用,有利于骨質(zhì)疏松病癥的改善。

表6 SIBC對(duì)去卵巢大鼠血脂的影響Table 6 Effects of SIBC on blood lipid of OVX

3 討論

3.1 SIBC能增加去卵巢大鼠的骨密度,抑制骨丟失,預(yù)防骨質(zhì)疏松的發(fā)生

骨密度作為診斷骨質(zhì)疏松和骨折危險(xiǎn)程度的重要指標(biāo),目前被認(rèn)為是反映骨質(zhì)疏松的金標(biāo)準(zhǔn)[21],已經(jīng)被廣泛應(yīng)用在臨床診斷和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的研究中。血清Ca、P及AKP等是骨轉(zhuǎn)換的一些指標(biāo)[22],當(dāng)血清Ca、P偏低、AKP升高時(shí)可預(yù)測(cè)骨丟失,間接反映骨質(zhì)疏松的一些病癥。本研究中大鼠去卵巢后骨密度和骨Ca及血清Ca、P下降,AKP活性升高。表明去卵巢后由于雌激素代謝失調(diào),造成成骨細(xì)胞和破骨細(xì)胞的活性增強(qiáng),骨吸收大于骨形成,骨代謝的平衡被破壞導(dǎo)致骨量丟失,形成骨高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松[23]。給予去卵巢大鼠SIBC后,能提高骨密度、骨和血清Ca水平,并能使升高的AKP活性恢復(fù)到正常值。補(bǔ)腎中藥方劑可預(yù)防去勢(shì)小鼠骨丟失,降低AKP水平[24],番茄紅素能提高去卵巢大鼠骨密度,升高血清Ca、P含量,降低AKP活性[25],橄欖油能有效緩解去卵巢大鼠的骨質(zhì)疏松,提高血清Ca濃度,降低AKP活性,但對(duì)血清P含量無(wú)影響[26],與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果是一致的。說(shuō)明SIBC不僅能增加骨密度,還可以通過(guò)調(diào)節(jié)骨轉(zhuǎn)換的一些指標(biāo),減弱去卵巢大鼠骨吸收強(qiáng)度,增強(qiáng)骨形成,對(duì)高轉(zhuǎn)換型骨質(zhì)疏松有明顯抑制作用。

鋅參與骨骼的代謝,影響成骨形成[27],缺鋅可導(dǎo)致骨代謝障礙。同時(shí),鋅也是CuZn-SOD的催化輔基。去卵巢大鼠血清Zn含量顯著下降(p<0.05),可能是導(dǎo)致SOD活性下降的原因之一。SIBC能顯著提高血清Zn含量,有助于維持正常骨代謝和抗氧化酶水平。

SIBC能降低骨質(zhì)疏松的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)與其組分中的生物活性成分密切相關(guān)。染料木素是大豆提取物中具有雌激素樣活性最強(qiáng)異黃酮成分之一,在SIBC中它的含量為0.1%。染料木素在濃度1～100 nmol/L 時(shí)就可以表現(xiàn)出刺激ERα、β轉(zhuǎn)錄活性的作用,并且主要與骨骼ERβ結(jié)合,染料木素作用于ERβ產(chǎn)生的相對(duì)雌激素樣效應(yīng)為作用于ERα?xí)r的30倍,能明顯改善去勢(shì)雄性大鼠血和尿的骨代謝生化指標(biāo)[23],對(duì)去卵巢大鼠的骨密度、骨生物力學(xué)及相關(guān)生化指標(biāo)都有改善作用[28],能有效預(yù)防絕經(jīng)后婦女骨丟失[29]。牛初乳凍干粉含有多種調(diào)節(jié)骨代謝的生長(zhǎng)因子,其中胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)含量最高,檢測(cè)含量為1146 ng/g,其中80%以上是以游離態(tài)存在[5]。IGF-1是骨源性生長(zhǎng)因子成分之一,能夠促進(jìn)細(xì)胞的增殖分化,增強(qiáng)成骨細(xì)胞活性及其對(duì)鈣磷的吸收[1]。補(bǔ)充外源性骨生長(zhǎng)因子可促進(jìn)成骨代謝、改善骨結(jié)構(gòu)、提高骨密度[30]。牛初乳提取物對(duì)成骨細(xì)胞增殖及胎鼠骨骼發(fā)育有促進(jìn)作用,在促進(jìn)骨骼發(fā)育方面的效果優(yōu)于活性鈣,與其含有的IGF-1密切相關(guān)[6]。同時(shí),SIBC含較高的免疫球蛋白(14.2%),能增強(qiáng)老年患者的免疫功能低下,減輕骨質(zhì)疏松發(fā)生[31]?？梢?jiàn),SIBC中這些生物活性物質(zhì)對(duì)預(yù)防骨質(zhì)疏松起到了積極作用。

3.2 SIBC能清除ROS,降低體內(nèi)氧化應(yīng)激水平,有利于改善骨質(zhì)疏松

SOD和MDA通常被作為用于評(píng)估氧化應(yīng)激狀態(tài)的可靠指標(biāo)[33]。當(dāng)體內(nèi)氧化應(yīng)激水平增高,抗氧化酶活性降低,ROS清除能力下降,過(guò)多ROS導(dǎo)致體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)加劇,產(chǎn)生MDA增多,引起骨組織氧化損傷。SOD是細(xì)胞內(nèi)主要的酶性抗氧化劑,能清除ROS,保護(hù)機(jī)體免受氧化損傷,在氧化與抗氧化平衡中起著重要作用[34]。MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的終產(chǎn)物,已被廣泛作為ROS損傷脂質(zhì)分子的一個(gè)標(biāo)記物[35],間接地反映出細(xì)胞受損情況。本研究表明,去卵巢大鼠血液和組織SOD活性下降,MDA水平上升,說(shuō)明去卵巢后導(dǎo)致了機(jī)體氧化應(yīng)激反應(yīng)發(fā)生。中、高劑量SIBC能提高去卵巢大鼠血液、肝、腎、脾SOD活性,降低血液、肝、腎、脾MDA含量?？梢?jiàn)SIBC不僅在體外具有ROS清除活性,而且能清除體內(nèi)自由基,減輕氧化應(yīng)激所致的血液和組織氧化損傷,降低骨質(zhì)疏松發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。Ozgocmen等[36]研究顯示,骨質(zhì)疏松患者紅細(xì)胞MDA含量顯著高于正常組。番茄紅素能增加去卵巢大鼠血清SOD活性,降低MDA含量[25]。Yalin等[37]發(fā)現(xiàn),去卵巢鼠導(dǎo)致肝臟和腎臟中SOD活性下降,MDA水平上升。一些臨床研究顯示,骨質(zhì)疏松患者血清MDA含量升高,而SOD等抗氧化劑的含量降低,提示骨質(zhì)疏松發(fā)生時(shí)存在氧化損傷,體內(nèi)氧化和抗氧化平衡被打破[38]。SIBC也同樣顯示了提高SOD活性、降低MDA含量,減輕去卵巢所致的氧化應(yīng)激水平的作用。

研究表明,牛初乳提取物能提高老年人血清總SOD和Mn-SOD活性、降低脂質(zhì)過(guò)氧化物水平[39],能提高血液SOD活性、降低心肌脂褐質(zhì)合量[40],對(duì)吸收O3的小鼠具有抗自由基損傷作用[41]。最近研究顯示,牛初乳凍干粉具有清除自由基作用[5]。牛奶抗氧化肽能通過(guò)增加成骨細(xì)胞基因表達(dá)和抗氧化酶活性來(lái)促進(jìn)成骨細(xì)胞分化[7]。SIBC中的牛初乳成分無(wú)疑增強(qiáng)了ROS清除能力,對(duì)改善去卵巢大鼠的自由基平衡失調(diào)和骨細(xì)胞的氧化損傷有積極的改善作用。

3.3 SIBC對(duì)脂代謝紊亂有一定的調(diào)節(jié)作用,能減輕骨質(zhì)疏松發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)

近年來(lái)研究顯示,骨代謝和脂代謝存在著巨大關(guān)聯(lián),當(dāng)脂代謝平衡被打破時(shí),會(huì)導(dǎo)致骨代謝紊亂,繼而引起骨質(zhì)疏松、骨質(zhì)流失和骨關(guān)節(jié)炎等骨代謝相關(guān)疾病發(fā)生[42]。本研究中去卵巢大鼠血清TC含量升高,HDL-C含量降低,提示造模后動(dòng)物脂代謝異常。在給予SIBC后,能降低去卵巢大鼠血清TC含量,提高HDL-C水平。崔洪斌等[43]和史琳娜等[44]研究表明,大豆異黃酮能升高去卵巢大鼠血清HDL-C水平,降低血清TC水平。Potter等[45]對(duì)高膽固醇血癥絕經(jīng)婦女的干預(yù)實(shí)驗(yàn)顯示,大豆蛋白可使血漿TC下降,而HDL-C水平上升。Kim等[46]研究表明,牛初乳能降低2型糖尿病患者的TC和TG水平,Davis等[47]和王小軍等[5]在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中也顯示了牛初乳的降TC作用?？梢?jiàn),SIBC中的組分不僅對(duì)去卵巢大鼠的脂代謝紊亂能起到了一定的調(diào)節(jié)作用而且有利于降低骨質(zhì)疏松發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)。

綜上所述,復(fù)合制劑在體外具有ROS清除作用,是一種理想的抗氧化劑。在去卵巢大鼠骨質(zhì)疏松癥模型中,復(fù)合制劑能增加去卵巢所致的骨密度降低、提高血液和骨Ca水平,能增加血液和主要組織的抗氧化酶活性、降低脂質(zhì)過(guò)氧化物含量,提高機(jī)體整體的抗氧化水平,同時(shí),也能調(diào)節(jié)血脂代謝水平,對(duì)去卵巢大鼠所致骨質(zhì)疏松癥起到積極的改善和抗氧化作用。