陳建飛 周愛珠 程 萱 童文彬 劉玉柱 張海燕 胡玉梅 練明姿 周 晶 呂國英 張作法

赤芝、紫芝和鹿角靈芝醇提物的活性成分及生物活性研究

陳建飛1周愛珠2程 萱2童文彬2劉玉柱3張海燕2胡玉梅2練明姿1周 晶2呂國英4*張作法4

（1. 衢州菇樂農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司，浙江 衢州 324000；2. 衢州市衢江區(qū)農(nóng)業(yè)局，浙江 衢州 324000；3. 浙江方格藥業(yè)有限公司，浙江 慶元 323800；4. 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所，杭州 310021）

赤芝、紫芝和鹿角靈芝是三種常見的靈芝。對(duì)這三種靈芝的乙醇提取物所作的抗氧化活性比較結(jié)果，鹿角靈芝提取物中多酚含量最高，具有較強(qiáng)的抗氧化活性。在提取液0.5～2.0 mg/mL的濃度范圍內(nèi)，赤芝、紫芝和鹿角靈芝的醇提物顯示出一定的α-淀粉酶和α-葡萄糖苷酶的抑制活性，且未顯現(xiàn)濃度的依賴性。

靈芝；種類；活性成分；生物活性

靈芝屬藥用真菌，素有“神芝”和“仙草”之美譽(yù)，兩千多年前在我國漢代的《神農(nóng)本草經(jīng)》中就有記載。靈芝中富含多糖類、核苷類、呋喃類、三萜類、生物堿、氨基酸及微量元素等[1]。靈芝及提取物具有多種藥理活性，如抗腫瘤，降血糖，提高免疫力，保肝，抗衰老，抗炎等[2～5]。

赤芝、紫芝、鹿角靈芝是三種最常見的靈芝，對(duì)這三種靈芝的活性成分研究主要集中在多糖和三萜方面，對(duì)醇提物的研究很少。本文是對(duì)3種靈芝醇提物的抗氧化活性及降血糖作用的研究結(jié)果。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

赤芝、紫芝、鹿角靈芝子實(shí)體采自浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院園藝研究所食用菌實(shí)驗(yàn)基地。新鮮靈芝材料切碎后置于烘箱中烘干，粉碎并過40目篩后備用。1, 1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），福林-酚試劑、五倍子酸、丁基羥基茴香醚（BHA）和2, 2-聯(lián)氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽（ABTS）均購自Sigma公司，其他試劑為分析純。

1.2 靈芝有效成分的提取

靈芝粉用30倍量的50%乙醇，加入鹽酸（使溶液中鹽酸終濃度為1%）在搖床上振蕩提取4小時(shí)，抽濾獲得濾液，對(duì)濾渣重復(fù)提取一次，合并兩次濾液。濾液通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)干燥得到靈芝醇提物，在低溫下保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 總酚含量測定

總酚含量的測定按照鄢貴龍等的方法進(jìn)行[6]。取0.5 mL不同濃度的靈芝提取液，加入0.5 mL福林酚試劑，劇烈振蕩3 min后，加入1.5 mL 15%的NaCO3溶液，靜置30 min后于760 nm處測定吸光度值。

1.4 抗氧化活性測定

（1）DPPH清除率測定。靈芝提取液的DPPH

清除活性按照Zhang等的方法進(jìn)行[7]。取1 mL不同濃度的樣品溶液（0.031 25～2.0 mg/mL）加入0.01% DPPH 1 mL混勻，振蕩反應(yīng)90 min，于517 nm波長下測定吸光度值。

（2）ABTS+清除率測定[8]。配制2.45 mmol/L的過硫酸鉀溶液，將ABTS溶解于過硫酸鉀溶液中來制備ABTS儲(chǔ)備液，在室溫以及避光的條件下靜置12～16 h。將ABTS+儲(chǔ)備液加入10 mmol/L，pH 7.4的磷酸緩沖液稀釋，使其在734 nm下吸光度達(dá)到0.7±0.02。取0.5 mL靈芝提取液加入1.5 mL ABTS+測定液，準(zhǔn)確振蕩反應(yīng)30 s后在734 nm下測其吸光度值。

（3）α-淀粉酶抑制活性測定[9]。配制一系列濃度梯度的樣品溶液，取樣液0.2 mL加入α-淀粉酶（1∶5 000）0.05 mL，搖勻后加入0.1%淀粉溶液0.25 mL，混勻，于37 ℃水浴準(zhǔn)確反應(yīng)7.5 min，取出后立即放入冰水中，2 min后取出，加入0.25 mL碘應(yīng)用液與1.5 mL純化水。于660 nm處測吸光值。

（4）α-糖苷酶抑制活性測定[10]。配制一系列濃度梯度的樣品溶液，取樣液100 μL加糖苷酶100 μL，混勻后于37 ℃水浴10 min，加入100 μL 1.5 mmol/L對(duì)硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷溶液（PNPG），混勻，于37 ℃水浴20 min，加入0.2 mol/L NaOH溶液1.5 mL終止反應(yīng)。于400 nm下測吸光值。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同靈芝總酚的含量

測定結(jié)果顯示，赤芝、紫芝和鹿角靈芝的總酚含量，以鹿角靈芝最高，為0.72%；紫芝次之，為0.65%；赤芝最低，僅0.53%。

2.2 不同靈芝的DPPH自由基清除活性

DPPH是一種自由基，在517 nm處有一強(qiáng)吸收，被廣泛用于生物試樣、食品等的抗氧化能力[11]。赤芝、紫芝和鹿角靈芝提取液的DPPH清除能力有濃度依賴性，鹿角靈芝DPPH清除活性較強(qiáng)，赤芝和紫芝DPPH的清除活性差別不大（圖1）。赤芝、紫芝和鹿角靈芝提取液的半抑制濃度分別為0.38、0.33和0.22 mg/mL，而BHA的半抑制濃度為0.06 mg/mL。

圖1 不同靈芝提取物的DPPH自由基清除活性比較

2.3 不同靈芝的ABTS自由基清除活性

如圖2所示，赤芝、紫芝和鹿角靈芝提取液的ABTS清除能力隨著濃度增加而增加。紫芝和鹿角靈芝的ABTS清除能力較強(qiáng)，赤芝的能力最弱。在0.03～2 mg/mL的濃度范圍內(nèi)，赤芝的ABTS 清除率為19.4%～88.40%；紫芝的ABTS清除率為7.10%～93.30%；鹿角靈芝的ABTS清除率為14.5%～93.90%，而在此濃度范圍內(nèi)，BHA的清除率為35.9%～99.69%。

圖2 不同靈芝提取物的ABTS自由基清除活性比較

2.4 不同靈芝提取液的α-淀粉酶抑制作用

從圖3可見，不同靈芝醇提液α-淀粉酶抑制活性與樣品濃度無明顯關(guān)系，在低濃度時(shí)（0.5和1.0 mg/mL）時(shí)，赤芝的α-淀粉酶抑制活性較高，但濃度為2 mg/mL時(shí)，α-淀粉酶抑制活性的大小順序依次為鹿角靈芝、赤芝、紫芝。

圖3 不同靈芝提取物的α-淀粉酶抑制活性比較

2.5 不同靈芝提取液的α-葡萄糖苷酶抑制作用

圖4表明，不同靈芝醇提液的α-糖苷酶抑制作用隨著濃度增大稍有提高但不明顯。其中，鹿角靈芝的α-糖苷酶抑制活性較強(qiáng)。在低濃度時(shí)（0.5和1.0 mg/mL）時(shí)，紫芝的α-葡萄糖苷酶抑制活性高于赤芝，而在高濃度時(shí)，赤芝的活性反高于紫芝。

圖4 不同靈芝提取物的α-葡萄糖苷酶抑制活性比較

3 討 論

本研究使用2種評(píng)價(jià)體系比較赤芝、紫芝和鹿角靈芝的體外抗氧化活性。DPPH法和ABTS法的評(píng)價(jià)體系的結(jié)果有所不同，原因可能在于提取物中成分復(fù)雜，造成3種靈芝的活性成分抗氧化能力的差異。其中，鹿角靈芝的抗氧化活性較強(qiáng)，這與總酚含量的測定結(jié)果基本一致。多酚類化合物由于其苯環(huán)上的羥基極易失去氫電子，故酚類物質(zhì)有較強(qiáng)的抗氧化能力。目前，多酚含量與其抗氧化活性的相關(guān)性已有很多報(bào)道[12,13]。前期研究發(fā)現(xiàn)，靈芝中的酚類物質(zhì)主要有4-羥基苯甲酸、肉桂酸、香豆酸等[14]，而這些酚酸類物質(zhì)的抗氧化活性已經(jīng)得到了證實(shí)[15]?？梢娺@些酚酸類物質(zhì)在靈芝的抗氧化活性中有著重要作用。不同靈芝的多酚類物質(zhì)與其抗氧化活性的不同，為以靈芝為原料的功能性食品開發(fā)提供科學(xué)依據(jù)。

糖尿病是一種常見的多病因并有遺傳傾向的內(nèi)分泌紊亂性疾病，其發(fā)病率有逐年增長趨勢，已成為當(dāng)今威脅人類健康的第三大疾病。通過抑制糖苷酶和淀粉酶的活性是一種預(yù)防糖尿病的重要手段[16]。α-淀粉酶抑制劑屬于糖苷水解酶抑制劑的一種，其能有效阻止體內(nèi)食物中碳水化合物的消化和水解，減少糖分的攝取量，可明顯降低血脂和血糖含量[17]。本研究表明，不同靈芝的提取液顯示了一定的淀粉酶抑制活性，這對(duì)于控制餐后血糖水平和保護(hù)身體機(jī)能有較大的應(yīng)用價(jià)值。α-葡萄糖苷酶是治療2型糖尿病的靶點(diǎn)之一，此酶是碳水化合物水解的關(guān)鍵酶[18]。而此酶的抑制劑能夠降低多糖水解，延緩腸道對(duì)碳水化合物的吸收，達(dá)到抑制高血糖的效果。本研究表明，鹿角靈芝的α-糖苷酶抑制活性較強(qiáng)，具有較強(qiáng)的抑制高血糖的效果。

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浙江省食用菌新品種選育專項(xiàng)（2016C02057）

呂國英，博士，浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院副研究員，主要從事食藥用菌研究工作，E-mail：bdzlgy@sohu.com。

S567.3+1

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2095-0934（2019）04-264-04