湯雙齊，何希俊

（廣州中醫(yī)藥大學(xué)附屬中山市中醫(yī)院，廣東 中山 528400）

近年來(lái)，高尿酸血癥的發(fā)病率逐年上升，且發(fā)病年齡呈年輕化趨勢(shì)，但由于無(wú)明顯的臨床癥狀而常被忽視[1]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，高尿酸血癥形成的主因?yàn)闈駶?、熱毒、血瘀、痰凝，臨床多以祛濕通絡(luò)、泄?jié)峤舛緸橹饕委煼▌t[2]。高尿酸血癥不僅是急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎、慢性痛風(fēng)性疾病和尿酸性腎病最重要的生化基礎(chǔ)，而且可能是高血壓、血脂異常、脂肪肝、胰島素抵抗、慢性腎病等多種代謝相關(guān)性疾病和心血管疾病發(fā)生、發(fā)展的獨(dú)立危險(xiǎn)因素[3]。隨著對(duì)高尿酸血癥研究的不斷深入，發(fā)現(xiàn)其作為上述疾病的危險(xiǎn)因素，與其可造成血管內(nèi)皮細(xì)胞功能障礙相關(guān)[4]，血管內(nèi)皮細(xì)胞能合成和釋放有舒張或收縮功能的物質(zhì)，如一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素 -1（ET-1）和血栓烷素 B2（TXB2），以調(diào)控高尿酸血癥，故血管內(nèi)皮功能的保護(hù)不容忽視。本研究中通過(guò)建立濕熱質(zhì)高尿酸血癥大鼠模型，以加味四妙湯進(jìn)行干預(yù)，觀察模型大鼠血清中尿酸(UA)，NO，ET-1，TXB2含量的變化，探討加味四妙湯對(duì)模型大鼠UA及血管內(nèi)皮功能的影響?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物、儀器與試藥

動(dòng)物：健康SPF級(jí)SD大鼠80只，雄性，6～8周，體質(zhì)量80～100 g，購(gòu)自廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，動(dòng)物許可證號(hào)為SYXK（粵）2017-0179。飼養(yǎng)條件，室溫16～22℃，相對(duì)濕度65% ～70%，自由飲水、進(jìn)食，光照12 h(8：00-20：00)。

儀器：UV-7504型紫外-可見分光光度計(jì)（上海精密儀器儀表有限公司）；DNM-9606型酶標(biāo)分析儀（北京普朗新技術(shù)有限公司）。

試藥：加味四妙湯（醫(yī)院中藥制劑室自制）；苯溴馬隆片（江蘇昆山龍燈瑞迪制藥有限公司，批號(hào)為P20180718，規(guī)格為每片50 mg）；鹽酸乙胺丁醇片（上海信誼天平藥業(yè)有限公司，批號(hào)為P20101214，規(guī)格為每片250 mg）；氧嗪酸鉀（美國(guó)Sigma公司，純度為97%）；大腸桿菌內(nèi)毒素、UA測(cè)試盒（批號(hào)為12-2-1）、NO試劑盒（批號(hào)為12-1-2）均購(gòu)自南京建成生物工程研究所；ET-1酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（批號(hào)為R0925）、血 栓 素 B2（TXB2）ELISA 試 劑 盒 （批 號(hào) 為R0707)，均購(gòu)自北京華英生物技術(shù)研究所。

1.2 方法

分組、建模及給藥：80只SD大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d，按隨機(jī)數(shù)字表法分為空白（等體積蒸餾水）組(A組)、模型（等體積蒸餾水）組(B組)、苯溴馬?。?0 mg/kg）組(C組)、加味四妙湯（8.3 g/kg，按生藥計(jì)）組(D 組)，各 20只。參考文獻(xiàn)[5-6]，各組大鼠予以肥甘飲食（5%豬油、3%雞蛋黃、5%蜂蜜摻入普通飼料）及尾靜脈注射大腸桿菌內(nèi)毒素（2 μg/kg），每周 2次，連續(xù) 6周，以建立濕熱質(zhì)大鼠模型。除A組外，其余各組大鼠均在建立濕熱質(zhì)模型的同時(shí)皮下注射氧嗪酸鉀（200 mg/kg）及灌胃乙胺丁醇（250 mg/kg），每天1次，連續(xù)6周，以建立濕熱質(zhì)高尿酸血癥大鼠模型。建模成功后，各組大鼠灌胃給予相應(yīng)藥物，每天1次，連續(xù)14 d。

指標(biāo)檢測(cè)：末次給藥2 h后，腹腔注射7%水合氯醛（0.5 mL/100 g），麻醉大鼠，腹主動(dòng)脈取血，3 000 r/min離心5 min，分離血清，采用比色法測(cè)定UA及NO的含量；采用ELISA法測(cè)定ET-1及TXB2的含量。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS20.0軟件學(xué)軟件分析。計(jì)量資料以表示，當(dāng)數(shù)據(jù)滿足正態(tài)分布且組間方差齊時(shí)，以ANOVA分析，如不滿足上述條件則行秩和檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 大鼠血清UA及NO含量

與A組比較，B組大鼠UA含量顯著增加，NO含量顯著減少（P<0.05）；與B組比較，C組及D組大鼠UA含量顯著減少，NO含量顯著增加（P<0.05）。詳見表1。

表1 各組大鼠血清UA和NO含量比較（±s，n=20）

表1 各組大鼠血清UA和NO含量比較（±s，n=20）

注：與A組比較，#P<0.05；與B組比較，*P<0.05。

組別 劑量（g/k g）U A(μ m o l/L)N O(μ m o l/L)E T-1(p g/m L)T X B 2(p g/m L)A組B組C組D組0.0 1 8.3 1 4 3.5 6±1 5.3 8 1 9 3.3 4±1 8.3 9#1 0 3.4 6±1 3.5 4*1 1 1.8 9±1 2.9 4*3 3.4 1±1.6 8 2 6.3 2±1.3 9#3 8.4 5±2.5 4*3 6.1 2±2.1 9*1 0 4.3 2±9.5 6 1 3 6.3 4±1 0.3 8#8 2.2 5±6.6 4*8 6.3 8±5.5 6*1 1 6.6 4±1 3.5 6 1 4 3.7 8±1 0.3 6#1 0 3.4 5±9.3 4*9 6.6 7±8.9 4*?

2.2 大鼠血清ET-1及TXB2含量

與A組比較，B組大鼠ET-1和TXB2含量均顯著增加（P<0.05）；與B組比較，C組及D組大鼠ET-1和TXB2含量均顯著減少（P<0.05）。詳見表1。

3 討論

中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，中醫(yī)體質(zhì)與健康狀態(tài)密切相關(guān)，體質(zhì)類型決定對(duì)某些致病因子的易感性及所產(chǎn)生疾病類型的傾向性。多數(shù)中醫(yī)學(xué)者認(rèn)同高尿酸血癥的病機(jī)為肝腎不足，脾胃損傷，濕熱痰濁內(nèi)蘊(yùn)、痰瘀互阻，久之形成濕熱痰濁內(nèi)蘊(yùn)（血中UA生成過(guò)多）或痰濁濕熱排泄減緩減少（血中UA排泄減少），以致濕熱痰濁內(nèi)蘊(yùn)加重[7]。既往研究發(fā)現(xiàn)，濕熱體質(zhì)類型人群是該病的多發(fā)人群。隨著對(duì)高UA血癥研究的深入，發(fā)現(xiàn)高UA引起的病理生理變化并不完全由尿酸鹽結(jié)晶引起，UA還可通過(guò)其他途徑影響內(nèi)皮細(xì)胞功能，從而參與心血管疾病及腎臟病的發(fā)生[8]。KARBOWSKA等[9]對(duì)腎移植術(shù)后患者的研究發(fā)現(xiàn)，與正常UA水平人群相比，高UA患者血清中血管內(nèi)皮功能標(biāo)志物（血漿抵抗素和可溶性血漿黏附分子1）濃度顯著升高。STAKHOVA等[10]研究發(fā)現(xiàn)，和正常血UA水平人群相比，血管內(nèi)皮功能障礙標(biāo)記物（尿蛋白、血漿內(nèi)皮素原及頸動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度等）在高UA患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)。高UA可通過(guò)影響血管內(nèi)皮功能障礙和炎性反應(yīng)的發(fā)生，參與心血管疾病及腎臟病發(fā)生。因此，深入研究濕熱質(zhì)高尿酸血癥發(fā)病機(jī)制及防治方案具有重要臨床意義。

四妙方源于清代張秉成《成方便讀》，該方以黃柏為君藥，蒼術(shù)為臣藥，薏苡仁、牛膝為佐藥，有清熱除濕、宣痹通絡(luò)功效，為臨床治療高尿酸血癥的基礎(chǔ)方。四妙方雖有清熱利濕之功效，但活血化瘀作用稍弱。本試驗(yàn)中加味四妙湯（蒼術(shù)、黃柏、薏苡仁、牛膝、地龍、丹參）以現(xiàn)代中醫(yī)理論為基礎(chǔ)，結(jié)合現(xiàn)代中藥藥理研究組方。現(xiàn)代藥理研究證明，黃柏具有抗氧化、保護(hù)腎臟、抗炎、細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，蒼術(shù)酮可強(qiáng)烈抑制Na+，K+-ATP酶活性，利尿同時(shí)降低了UA水平；牛膝能減少脂質(zhì)吸收，阻止類脂質(zhì)在血清滯留或滲透到動(dòng)脈內(nèi)膜，從而改變脂質(zhì)及嘌呤的代謝，最終達(dá)到調(diào)脂、降血UA、消除尿蛋白的目的。丹參能抗血栓形成，提高纖溶酶活性；延長(zhǎng)出血、凝血時(shí)間；抑制血小板聚集，改善血液流變學(xué)特性。地龍?zhí)崛∥锟商岣咝∈蠹t細(xì)胞變形能力，從而改善血液流變學(xué)特性和微循環(huán)障礙。研究表明，UA生成增多，氧自由基同時(shí)生成增多，NO濃度降低，損害了血管內(nèi)皮依賴的舒張功能；ET-l可客觀反映血管功能，靜脈注射ET-1后模型狗的外周血管阻力、肺血管阻力和冠狀血管阻力增加，肺毛細(xì)血管楔壓上升；TXB2是由TXA2在體內(nèi)轉(zhuǎn)變而來(lái)，后者是主要由血小板微粒體合成并釋放的具有強(qiáng)烈收縮血管和促進(jìn)血小板聚集作用的生物活性物質(zhì)，通過(guò)檢測(cè)血漿TXB2可間接判斷體內(nèi)TXA2的水平[11]。四妙湯具有降低高尿酸血癥患者血清UA水平的作用。程新等[12]的研究表明，桃紅四物湯合四妙丸可明顯降低高尿酸血癥患者血清中UA水平；其在改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能方面，能顯著增加NO和NOS含量，減少ET和TXB2含量；在抗氧化應(yīng)激和炎性反應(yīng)方面，可明顯增強(qiáng)血清中SOD活性及減少腫瘤壞死因子-α、白細(xì)胞介素18的含量。劉文毅等[13]研究發(fā)現(xiàn)，活血四妙湯可減少高尿酸血癥模型大鼠血UA含量，其作用機(jī)制與調(diào)節(jié)黃嘌呤氧化酶活性有關(guān)。

綜上所述，加味四妙湯能減少濕熱質(zhì)高尿酸血癥模型大鼠血清UA，ET-1，TXB2的含量，增加NO的含量。