梁鵬志 吳佳遙 李留安 焦小麗

天津農學院動物科學與動物醫(yī)學學院/天津市農業(yè)動物繁育與健康養(yǎng)殖重點實驗室，天津300384

黃曲霉毒素（aflatoxin，AFT）是一類主要由黃曲霉和寄生曲霉產生的真菌次級代謝產物，是二氫呋喃香豆素的衍生物。具有極強致畸、致癌性，其中玉米黃曲霉毒素B1（AFB1）是最廣泛也是毒性最強的一種[1]。當動物食用被黃曲霉毒素污染的飼料后，會引起消化系統(tǒng)紊亂、全身出血、腹腔積液等癥狀，并導致肝臟變性壞死以及肝細胞增生等[2]，亦可引起懷孕動物流產[3]。玉米黃曲霉毒素B1 對人或動物均具有肝毒性及生長抑制作用，且在24～35 ℃、相對濕度高出7%時最容易產生[4]。

酵母是一類單細胞真菌的總稱，隸屬于真菌界的子囊菌門。在無氧環(huán)境下則將葡萄糖分解為二氧化碳和乙醇。利用該特性，酵母菌被廣泛用于食品工業(yè)和釀造產業(yè)。此外已有利用酵母細胞壁加水合硅酸鈉鹽制成的AFB1 吸附劑的研究[5]。亦有研究使用產朊假絲酵母進行AFB1 發(fā)酵脫毒[6]，都取得了良好的效果，但釀酒酵母對AFB1 的脫毒作用目前鮮見研究。本研究采用3 種不同來源的釀酒酵母，對霉變玉米進行發(fā)酵處理，研究3 種不同釀酒酵母不同濃度對玉米AFB1 的脫毒效果，以期為AFB1 脫毒提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1）霉變玉米。由天津郊區(qū)某農戶提供，粉碎霉變玉米并混合均勻，使95%以上的玉米粉過孔徑830 μm 篩，ELISA 試劑盒測定其AFB1 含量為(40.65±2.89) μg/kg。

2）主要試劑。面包酵母為圣家食品產品；果酒酵母為安琪酵母股份有限公司產品；啤酒酵母為SAFALE（法國）公司產品；AgraQuant R AFB1 檢測試劑盒為Romer Labs 產品；分析純級甲醇購自天津永大有限公司。

3）儀器和設備。CMax Plus 酶標儀, 型號為SpectraMax R Absorbance Reader，Molecular Devices 公司；Eppendorf 移液槍, 型號為20～200 μL，電磁攪拌器，EMS-18C；生化培養(yǎng)箱購自上海一恒科學儀器有限公司；Whatman#1 濾紙、紗布、封口膜等購自天津晟佰昊生物技術有限公司。

1.2 試驗設計

采用單因素設計，設3 個試驗組、1 個空白組，3個試驗組分別為面包酵母、啤酒酵母、葡萄酵母組，每個試驗組設3 個用量處理組，分別為每10.0 g 玉米中添加0.5、1.5、2.5 g，共計9 個處理組，每個處理4 個重復。所有處理組均放置于33 ℃恒溫生化培養(yǎng)箱，發(fā)酵14 d。

1.3 試驗方法

采用GB/T 17480—2008《飼料中黃曲霉毒素B1 的測定酶聯(lián)免疫法》測定玉米中AFB1 的含量，參照AgraQuant R AFB1 試劑盒說明書進行樣品前處理及AFB1 檢測，最低檢出含量為2 μg/kg。精確稱取10.000 0 g 玉米粉樣品于250 mL 錐形瓶中，做好記號。分別準確稱量0.5、1.5、2.5 g 酵母于燒杯中，加水配置10∶1 的酵母菌液，按處理分別加入菌液于對應樣品中，加水至75 mL，放置于33 ℃恒溫箱中，試驗期間每天定時混合玉米粉，以使玉米粉和酵母充分接觸，確保玉米粉發(fā)酵良好。試驗處理結束后移除上層液體并烘干，再加入50 mL 70%甲醇，振蕩或均質3 min 后靜置，用Whatman#1 濾紙過濾獲得上清液，收集濾液待檢。

1.4 脫毒率

1.5 數據分析

采用SPSS 20.0 軟件統(tǒng)計分析各組試驗數據，試驗結果以“平均數±標準差”表示，采用單因素ANOVA 方差分析和Duncan's 檢驗各組間差異顯著性，＜0.05 表示差異顯著。

2 結果與分析

2.1 3 種酵母不同添加量對AFB1 的脫毒率

分別使用3 種酵母（葡萄酵母、面包酵母、啤酒酵母）不同處理（0.5、1.5、2.5 g/10.0 g）對發(fā)霉玉米樣品進行發(fā)酵處理14 d，其對AFB1的脫毒率如表1所示。由表1可以看出，不同含量的葡萄酵母均對AFB1 有一定的脫毒作用，1.5 g 組脫毒率最高，但組間差異不顯著（P＞0.05）。面包酵母對AFB1 有一定的脫毒作用，并可見隨著濃度遞增脫毒率有上升趨勢，2.5 g 組脫毒率最高，但組間差異不顯著（P＞0. 05）。啤酒酵母均對AFB1 有一定的脫毒作用，但脫毒率均較低，各組間差異不顯著（P＞0.05）。添加1.5 g 葡萄酵母時脫毒率最高，顯著高于添加0.5 g 面包酵母組（P＜0.05），其余各組間差異不顯著（P＞0.05）。綜合分析3 種不同來源釀酒酵母對AFB1 的脫毒率均較低，啤酒酵母的脫毒率效果較差。

表1 3 種酵母不同添加量對AFB1 的脫毒率 %

3 討 論

本研究主要考察3 種不同來源的釀酒酵母對玉米AFB1 的脫毒效果，結果顯示，3 種釀酒酵母均對玉米粉AFB1 有一定的脫毒作用，且添加葡萄酵母1.5 g/10 g 時效果較好，脫毒率為22.25%，啤酒酵母脫毒效果較差。同種酵母不同添加量組間差異不顯著（P＞0.05），這可能是由于發(fā)酵早期由于酵母菌的繁殖，從而使?jié)舛忍荻乳g差異降低。李素琴等[7]對汾酒釀造過程中AFT 的測定得知，黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2 均可隨著酵母發(fā)酵而降解，少量殘留于酒糟中，推測其脫毒機制在于酵母菌自身新陳代謝的酶解反應。在酵母菌內含有葡萄糖氧化酶，AFT的分子結構中含有能被其破壞的二呋喃環(huán)和香豆素基團，該基團決定了AFT 的毒性[8]。酵母菌完成發(fā)酵過程氧化葡萄糖時，可將AFB1 氧化，破壞其二呋喃環(huán)和香豆素基團，從而起到脫毒作用[8]。目前已發(fā)現很多可通過類似機制脫毒的微生物[1]。研究發(fā)現，脫毒物質及方法在低水平毒素下能發(fā)揮更好的脫毒效果[9]，本試驗酵母發(fā)酵脫毒率為22%左右，本研究中玉米樣品AFB1 質量濃度為40.65 μg/L，超過國家標準20 μg/L[10]。因此,釀酒酵母脫毒作用可能僅適合于輕微AFT 污染的飼料原料，從而降低由于AFT 輕微污染造成的浪費。