田 莉， 賀 元， 李 勇， 烏莉婭·沙依提

(1新疆醫(yī)科大學中醫(yī)學院， 烏魯木齊 830011； 2邢臺醫(yī)學高等?？茖W校中醫(yī)系， 河北 邢臺 054000)

腎性高血壓是由腎臟實質性或腎動脈病變引起的一種繼發(fā)性高血壓，血壓升高使腎功能進行性加重，不斷惡化的腎功能使血壓控制困難，導致患者預后極差[1]。左心室肥厚(left ventricular hyperbrophy，LVH)是高血壓患者心臟為適應壓力超負荷而發(fā)生的代償性、適應性反應，采取措施逆轉LVH，可減少患者猝死、充血性心力衰竭、冠心病等心血管疾病的發(fā)生[2-3]。臨床上主要采用血管緊張素(Ang)轉化酶抑制劑、AngⅡ受體阻斷劑、β受體阻斷劑、鈣通道阻滯劑和利尿劑等藥物治療左室心肌肥厚，由于參與左室心肌肥厚的信號通路之間調節(jié)網絡復雜，因此西藥的單靶點治療效果并不理想[4]。中藥具有多成分、多靶點優(yōu)勢，如人參總皂苷、醋柳黃酮、川芎嗪等中藥提取物或活性成分對心肌肥厚疾病均有較好的預防和逆轉作用[5-7]。新疆芹菜根為傘形科植物旱芹(ApiumgraveolensL.)的干燥根，主要含有黃酮、萜烯、倍半萜烯、苯酞、酚類、糖類和鞣質等化學成分[8]，具有護肝、降壓及調脂作用，常用于高血壓、頭暈頭痛、風濕、四肢麻木等癥的治療[9-11]。本研究采用大鼠腎性高血壓模型，探究新疆芹菜根提取物(AGRE)對大鼠的血壓、左心室肥厚和腎臟組織的作用，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器DRT-SX型恒溫電熱套(鄭州長城科工貿有限公司)，RE-52型旋轉式蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)，Spectrumlab 22型可見分光光度計(上海棱光技術有限公司制造)，B-260型恒溫水浴鍋(上海亞榮生化儀器廠)，BP-6 型動物無創(chuàng)血壓測試儀系統(tǒng)(成都泰盟科技有限公司)，XP-500型偏光顯微鏡(上海比目儀器有限公司)。

1.2 試藥卡托普利片(華北制藥股份有限公司，批號20150702)，水合氯醛(上海山浦化工有限公司，批號20150420)，血管緊張素Ⅱ(Ang-Ⅱ)試劑盒(北京普爾偉業(yè)生物有限公司，批號20160909)，內皮素(ET)試劑盒(北京普爾偉業(yè)生物有限公司，批號20160312)；丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20160917)，超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(南京建成生物工程研究所，批號20160916)。

1.3 實驗動物Wistar大鼠(SPF級)60只，雄性，體質量(200±20)g，由新疆醫(yī)科大學動物實驗中心提供，實驗動物質量合格證號：SCXK(新)2003-0001。

1.4 藥材新疆芹菜根2018年6月購于新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)院藥房，經新疆醫(yī)科大學烏莉婭·沙依提教授鑒定為旱芹(ApiumgraveolensL.)的干燥根。

1.5 方法

1.5.1 新疆芹菜根提取物(AGRE)供試液的制備 取新疆芹菜根干燥粗粉過40目篩，加入10倍量70%乙醇回流提取2次，每次1 h，合并提取液，過濾，濾液濃縮，冷凍干燥，即得AGRE(1 g干燥粉末相當于8 g原藥材)。稱取AGRE適量用0.5% CMC-Na配制成高、中、低(0.4 、0.2、0.1 g/mL)劑量供試液，備用。

1.5.2 卡托普利混懸液的制備 將卡托普利片研成細末，稱取適量，用蒸餾水制成濃度30 mg/mL的溶液，備用。

1.5.3 腎性高血壓大鼠模型的建立[12-13]取健康雄性wistar大鼠50只，測定基礎血壓，以10%水合氯醛(3.5 mL/kg體質量)腹腔麻醉，大鼠仰臥位固定，剪去腹部野毛，消毒，于劍突下1. 5 cm沿腹中線切開，無鉤直頭眼科鑷左腎門處分離左腎動脈，在近主動脈端放置內徑0.25 mmU型銀夾，血流通暢，造成單側腎動脈狹窄。常規(guī)縫合切口，術后連續(xù)3 d腹腔注射青霉素鈉預防感染。取健康雄性Wistar大鼠10只，按上述方法操作，不上銀夾，作為假手術組。術后 6 周測定大鼠尾動脈收縮壓，收縮壓>140 mmHg視為造模成功。

1.5.4 分組與給藥 將建模成功的50只大鼠隨機分為模型組(生理鹽水，10 mL/kg體質量)、卡托普利組(卡托普利，10 mL/ kg體質量)、AGRE高、中、低劑量組(4、2、1 g/kg體質量)，假手術組(生理鹽水，10 mL/kg體質量)，每組10只，各組大鼠飼養(yǎng)于恒溫(24±2)℃ 室內通風柜內，標準飼料，自由飲水，每天灌胃1次，連續(xù)灌胃11周。

1.5.5 大鼠血壓的測定 術后每周測定各組大鼠尾動脈收縮壓和舒張壓，重復測定3次，取平均值，連續(xù)測定11周。

1.5.6 大鼠血清中SOD、MDA血漿中Ang Ⅱ、ET含量的測定 術后10周末稱取各組大鼠體質量，處死，腹主動脈采血2份分別置于A、B 管。A管：不加抗凝劑，分離血清，按照試劑盒說明書方法測定SOD、MDA含量；B管：置肝素化離心管中，冰浴低溫分離血漿，按照試劑盒說明書方法測定Ang Ⅱ、ET含量。

1.5.7 大鼠左心室質量指數(shù)的測定 稱取各組大鼠心臟質量，用4℃生理鹽水漂洗數(shù)次，濾紙吸干，去除主動脈殘根、心房、右心室和結締組織，稱取左心室質量，計算心臟質量指數(shù)(心臟質量/體質量，mg/g)和左心室質量指數(shù)(左心室質量/體質量，mg/g)。

1.5.8 大鼠心腎組織切片的觀察 取大鼠左心室壁和腎臟組織，用10%甲醛溶液固定，石蠟包埋，切片，HE染色，樹脂封片，顯微鏡下觀察各組大鼠左心室組織和腎臟組織的病理切片。

2 結果

2.1 新疆芹菜根提取物對各組大鼠血壓的影響與假手術組比較，模型組大鼠血壓升高(P<0.05)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與模型組比較，灌胃4 周后卡托普利組和AGRE各劑量組大鼠血壓降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表1。

表1 新疆芹菜根提取物對各組大鼠血壓的影響

注：與假手術組比較，△P<0.05； 與模型組比較，#P<0.05。

2.2 新疆芹菜根提取物對各組大鼠左心室質量指數(shù)的影響與假手術組比較，模型組大鼠左心室質量指數(shù)升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與模型組比較，卡托普利組和AGRE各劑量組大鼠左心室質量指數(shù)下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。與卡托普利組比較，AGRE各劑量組大鼠左心室質量指數(shù)下降，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，見表2。

2.3 新疆芹菜根提取物對各組大鼠血清中SOD、MDA血漿中Ang Ⅱ、ET含量的影響與假手術組比較，模型組大鼠血清中SOD含量降低，MDA含量升高，血漿中Ang-Ⅱ、ET含量升高，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；與模型組比較，卡托普利組、AGRE各劑量組大鼠血清中SOD含量升高，MDA含量降低，血漿中Ang-Ⅱ、ET含量降低，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05),見表3。

表2 新疆芹菜根提取物對各組大鼠左心室質量指數(shù)的影響

注：與假手術組比較，△P<0.05； 與模型組比較，#P<0.05。

表3 新疆芹菜根提取物對各組大鼠血清中SOD、MDA血漿中Ang Ⅱ、ET含量的結果

注：與假手術組比較,△P<0.05； 與模型組比較,#P<0.05。

2.4 新疆芹菜根提取物對各組大鼠左心室組織病理學改變與假手術組相比，模型組大鼠心肌細胞變性，排列散亂，出現(xiàn)片狀、局灶性壞死；卡托普利組大鼠心肌細胞腫脹，變性，偶見點狀壞死，有炎癥反應；AGRE低劑量組大鼠心肌細胞肥大，形狀不整，變性；AGRE中劑量組大鼠心肌細胞肥大、水腫情況有改善；AGRE高劑量組大鼠心肌細胞肥大、水腫不明顯，接近假手術組，見圖1。

假手術組

模型組

卡托普利組

AGRE 低劑量組

AGRE中劑量組

AGRE高劑量組

圖1 各組大鼠左心室組織切片圖(HE×40)

2.5 新疆芹菜根提取物對各組大鼠腎臟組織病理學改變與假手術組相比，模型組腎小球系膜細胞增殖、基質增生、部分腎小球出現(xiàn)纖維化及腎小球萎縮，并有一定的炎癥反應；與模型組相比，卡托普利組明顯減輕了上述病變；隨用藥劑量的增加，AGRE各劑量組逐漸緩解上述病變，AGRE高劑量組病變改善最為明顯，見圖2。

假手術組

模型組

卡托普利組

AGRE低劑量組

AGRE中劑量組

AGRE高劑量組

圖2 各組大鼠腎臟組織切片圖(HE×40)

3 討論

腎性高血壓大鼠模型中以兩腎一夾造模最為經典，采用0.2 mm銀夾環(huán)繞大鼠左腎動脈僅造成一側腎動脈狹窄，使該側腎臟缺血，右腎不觸及，其血壓升高主要是由于腎臟缺血造成腎素分泌增多，激活了腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)所致，而RAS與高血壓病左室肥厚(LVH)的發(fā)病密切相關，AngⅡ是RAS系統(tǒng)中具有縮血管作用的關鍵物質[14-16]。中藥具有生物活性成分豐富、靶點多的治療優(yōu)勢，對中藥成分防治及逆轉左室心肌肥厚的作用與機制成為研究熱點，以期探索具有更多治療靶點的新活性物質，為開發(fā)抗心肌肥厚藥物奠定良好基礎[17]。本研究發(fā)現(xiàn)AGRE能夠抑制腎性高血壓大鼠的左心室肥厚，減輕腎臟病理改變，其作用機制與調節(jié)血清MDA、SOD水平，改善內皮細胞分泌功能，促進血管內皮功能，抑制血管活性物質血管緊張素Ⅱ、內皮素釋放等有關，其活性成分的確定及其作用機制有待進一步深入研究。