毛江勝　李慧冬　陳子雷　張文君　郭長英　方麗萍　丁蕊艷

摘要：建立了QuEChERS -液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用（LC - MS/MS）同時測定韭菜中噻蟲胺和滅蠅胺殘留量的分析方法，并采用該方法研究了這2種農(nóng)藥在韭菜中的消解動態(tài)及最終殘留量。樣品經(jīng)乙腈提取，用N一丙基乙二胺（ PSA）、Cls和石墨化碳（PC）凈化，正離子電離，多反應(yīng)監(jiān)測模式，LC-MS/MS測定，外標(biāo)法定量。結(jié)果表明：在0. 005-1.000 mg/kg添加水平下，噻蟲胺在韭菜中的平均回收率為90.0%～95.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.7%～3.3%;滅蠅胺在韭菜中的平均回收率為94.7～98.7%，RSD為0.8%～3.0%。樣品中噻蟲胺和滅蠅胺的定量限（ LOQ）分別為0.010、0.005 mg/kg。噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中殘留量均未檢出。20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑按有效成分l800g/h㎡施藥2次，施藥間隔期為45d，安全間隔期20d，噻蟲胺在韭菜中的殘留量均<0.01 mg/kg，滅蠅胺在韭菜中的殘留量均<0.005mg/kg。

關(guān)鍵詞：噻蟲胺;滅蠅胺;韭菜;殘留;消解;膳食風(fēng)險評估

Dissipation Dynamics and Preliminary Dietary RiskAssessment of Clothianidin and Cyromazine in Chinese ChivesMao Jiangsheng， Li Huidong， Chen Zilei，Zhang Wenjun， Guo Changying， Fang Liping， Ding Ruiyan

Abstract In this study， a simple and practical QuEChERS - based liquid chromatography - tandemmass spectrometry （ LC - MS/MS） method was established to measure the residues of clothianidin and cyroma-zine in Chinese chives. The samples were extracted by acetonitrile and cleaned by primary secondary amine（ PSA） ， C18 and pesticarb （ PC） sorbent， and then were measured by LC - MS/MS operated in the positiveelectrospray ionization （ ESI） mode. The data were collected in multiple reaction monitoring （ MRM） mode.The results showed the average recoveries of clothianidin in Chinese chives were 90.0%～95.9% at the fourspiking levels from 0.005 to 1.0 mg/kg with the relative standard deviations （ RSDs） of l.7%～3.3% . Theaverage recoveries of cyromazine were 94.7～98.7% with the RSDs of 0.8%～3.0% . The limits of quantita-tion （ LOQs） of clothianidin and cyromazine were 0.01 mg/kg and 0.005 mg/kg， respectively. The dissipationdynamic studv showed that clothianidin and cyromazine in Chinese chives were not detected out. When 20%clothianidin - cyromazine SC was applied for 2 times at an interval of 45 days with the dose of 1800 g/h㎡ ，the residue of clothianidin was less than 0.01 mg/kg and that of cyromazine was below 0.005 mg/kg on the20th day after the last spray.

Keywords Clothianidin;Cyromazine; Chinese chives;Residue; Dissipation; Dietarv risk assessment

噻蟲胺（clothianidin），化學(xué)名稱：1-（2一氯-5-噻唑基甲基）-3 -甲基一2一硝基胍，是具有噻唑環(huán)的新煙堿類殺蟲劑，主要用于水稻、蔬菜、果樹及其他作物田防治薊馬、蚜蟲、飛虱等半翅目、鞘翅目、雙翅目和一些鱗翅目害蟲。滅蠅胺（cyromazine），又名環(huán)丙氨嗪，化學(xué)名稱為N-環(huán)丙基-1，3，5-三嗪一2，4，6三胺，屬三嗪類昆蟲生長調(diào)節(jié)劑，在動植物體內(nèi)可通過脫烷基作用代謝為三聚氰胺。滅蠅胺已在許多國家獲準(zhǔn)登記作為衣藥使用，在我國主要用于防治菜豆、黃瓜、韭菜等蔬菜上的美洲斑潛蠅和潛葉蠅[1，2]。噻蟲胺和滅蠅胺被分別推薦用于防治韭菜韭蛆，但缺乏兩者在韭菜中的最大殘留限量（MRL）標(biāo)準(zhǔn)，不僅為韭菜質(zhì)量安全的監(jiān)管帶來困難，也可能對人體健康存在潛在的風(fēng)險。

關(guān)于噻蟲胺和滅蠅胺在基質(zhì)中殘留的分析方法主要包括高效液相色譜法[3-5，11，12]和液相色譜一質(zhì)譜法[6-10，13，14]。但目前尚未見采用高效液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用方法同時檢測噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜上殘留及消解動態(tài)并進(jìn)行膳食風(fēng)險評估的研究報道。

本研究擬建立韭菜中噻蟲胺和滅蠅胺殘留量的液相色譜一質(zhì)譜聯(lián)用（LC - MS/MS）檢測方法，研究20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑在設(shè)施栽培韭菜中的消解規(guī)律和殘留量并進(jìn)行初步的膳食風(fēng)險評估，旨在為2種農(nóng)藥在韭菜上的合理使用及制定2種農(nóng)藥在韭菜上的最大殘留限量（ MRL）標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器及試劑

ABSciex QTRAP5500質(zhì)譜儀（美國AB公司）;Acquity UPLC超高效液相色譜儀（美國Wa-ters公司）;色譜柱：Symmetry300 C18 4.6 mm×75mm，3.5μm;T25高速勻漿機(jī)（德國IKA公司）;2K高速離心機(jī)（美國SIGMA公司）;Laborota4000旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國Heidolph公司）;超聲波儀（江蘇昆山）;渦流混合器、電子天平、精密移液槍、氮吹儀以及其它實驗室常用儀器設(shè)備。

噻蟲胺（clothianidin）和滅蠅胺（cyromazine）標(biāo)準(zhǔn)品：100μg/mL（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測所）;20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑（河南金田地農(nóng)化有限責(zé)任公司）。甲醇、乙腈（色譜純，美國Thermofisher）。

1.2 試驗方法

按照《農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則》[15]和《農(nóng)藥登記殘留田間試驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程》[16]，于2016年7月至11月在山東濟(jì)南和黑龍江哈爾濱進(jìn)行田間試驗。山東、黑龍江韭菜品種分別為雪韭、平韭。供試藥劑為20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑，試驗設(shè)置低劑量區(qū)、高劑量區(qū)、空白對照區(qū)，每小區(qū)面積約20㎡，重復(fù)3次。施藥方法：灌根;施藥適期：韭菜生長至10—15cm左右時。

1.2.1 消解動態(tài)試驗 消解動態(tài)試驗的施藥時間為2016年7月19日。施藥劑量為有效成分2700 g/hm2，施藥1次。分別于施藥后2h及1、2、3、5、7、10、14、21、30 d取樣。每處理重復(fù)3次。隨機(jī)在試驗小區(qū)采集1kg生長正常無病害的韭菜樣品，剪成1 cm以下的小段，混勻后四分法留樣2009，于-20℃保存，待測。

1.2.2 最終殘留試驗施藥劑量分高、低兩個劑量。低劑量為推薦劑量，有效成分1800 g/h㎡;高劑量為推薦劑量的1.5倍，即有效成分2700g/h㎡。分別施藥2次和3次，每處理重復(fù)3次，施藥間隔期45d。分別于最后一次施藥20、30d后采樣。取樣方法同1.2.1。

1.3 分析方法

1.3.1 樣品前處理 稱取樣品20g于100mL廣口瓶中，加入乙腈40mL，高速勻漿機(jī)勻漿1min，3000r/min離心5min，將上清液過濾人Agi-lent Bond Elut樣品處理管（C18 50 mg，PSA 50mg，PC 8 mg，MgS04 150 mg），將有機(jī)相收集于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶，減壓濃縮至近干，2.5 mL甲醇定容，過0. 22μm有機(jī)濾膜，待進(jìn)樣檢測。

1.3.2 儀器測定條件 WatersSymmetry300色譜柱（Cl8 4.6 mm×75 mm，3.5μm）;流動相：V（0.1%甲酸水溶液）：V（甲醇）=3070;流速：0.80mL/min;柱溫400C;進(jìn)樣體積1.0μL。正離子方式掃描;霧化氣體為氫氣;霧化器壓力55379.2kPa。噻蟲胺和滅蠅胺的測定參數(shù)見表1。在此條件下，噻蟲胺和滅蠅胺的保留時間分別為1.17、1.65 min（圖1）。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制及標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 將100 μg/mL的噻蟲胺標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋配制0.5、0.2、0.1、0.05、0.01、0.005 μg/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液;將100 μg/mL的滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)溶液用甲醇稀釋配制0.2、0. 02、0.01、0.005、0.001、0. 000 5μg/mL系列。按1.3.2的條件測定，以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)、對應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。外標(biāo)法定量。

1.3.4 添加回收試驗 在韭菜中分別添加噻蟲胺和滅蠅胺標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，添加水平分別為0.01、0.5、1.0 mg/kg，滅蠅胺為0.005、0.05、0.5、1.0mg/kg，每個水平重復(fù)5次，按本研究建立的方法進(jìn)行樣品前處理和測定，分別計算平均添加回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差。

1.4 農(nóng)藥殘留膳食攝入風(fēng)險評估

膳食攝人評估是在毒理學(xué)和殘留化學(xué)評估的基礎(chǔ)上，對居民因膳食攝人帶來的農(nóng)藥殘留對人體健康造成的風(fēng)險進(jìn)行定量評價，為提出農(nóng)藥最大殘留限量建議值提供依據(jù)。本研究中膳食的來源包括韭菜、已登記作物及食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)（GB 2763-2016）[17]中有殘留限量值的作物。

2 結(jié)果與分析

2.1 方法的線性范圍及檢出限

噻蟲胺在0.005～0.5 mg/L和滅蠅胺在0.0005—0.2 mg/L范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與對應(yīng)的峰面積間線性關(guān)系良好。經(jīng)最小二乘法擬合得標(biāo)準(zhǔn)曲線，噻蟲胺回歸方程為Y=2×106X一3241.4（R=0.995），滅蠅胺回歸方程為Y=2×107X一12604（R=0.995）。典型色譜圖見圖2。

2.2 方法的準(zhǔn)確度及精密度

添加回收試驗結(jié)果（表2）表明：在0. 01、0.5、1.0 mg/kg 3個添加水平下，基質(zhì)為韭菜時，噻蟲胺平均回收率為90.0%～95.9%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.7%～3.3%;在0. 005，0.05、0.5、1.0 mg/kg 4個添加水平下，基質(zhì)為韭菜時，滅蠅胺平均回收率為94.7- 98.7%，RSD為0.8%～3.0%。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線最低檔濃度和進(jìn)樣體積，計算得到滅蠅胺和噻蟲胺的檢出限（ LOD）均為0.5 ng;根據(jù)添加回收最低檔添加濃度，噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的定量限（LOQ）分別為 0.01mg/kg和0.005mg/kg。

2.3 噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜上的消解動態(tài)

噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中殘留量均未檢出，故無法計算農(nóng)藥消解半衰期。這可能與施藥方式有關(guān)，由于施藥方式是灌根，藥劑并未立即被韭菜植株吸收，而采樣是韭菜植株，所以韭菜中均沒有檢出農(nóng)藥殘留。

2.4 噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜上的最終殘留量

由表3可知，20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑以高、低2個劑量施藥2～3次，施藥間隔期為45d，距末次施藥后20d和30d采樣測定，韭菜中噻蟲胺和滅蠅胺的殘留量均為未檢出。

2.5 膳食攝入風(fēng)險評估結(jié)果

根據(jù)噻蟲胺日允許攝人量（ADI）0.1 mg/kgbw及中國人平均體重63 kg[18，19]，計算得到中國成人的日允許攝人量為6.3mg。依據(jù)食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)（GB 2763-2016）中膳食風(fēng)險評估要求，通過已有的殘留限量標(biāo)準(zhǔn)、試驗中得到的20d所對應(yīng)的規(guī)范殘留試驗中值（STMR）以及中國成人的日允許攝人量，計算得出膳食風(fēng)險概率為5.63%。結(jié)合中國農(nóng)藥登記情況和居民人均膳食結(jié)構(gòu)，計算得到普通人群噻蟲胺的理論最大日攝人量（ TMDI）為0.35 mg，占ADI的5.63%，表明通常不會對一般人群健康發(fā)生不可接受的風(fēng)險（表4）。

根據(jù)滅蠅胺日允許攝人量（ ADI）0.06 mg/kgbw及中國人平均體重63 kg[19]，計算得到中國成人的日允許攝人量為3.78 mg。依據(jù)食品中農(nóng)藥最大殘留限量標(biāo)準(zhǔn)（GB 2763-2016）中膳食風(fēng)險評估要求，通過試驗中得到的20 d所對應(yīng)的STMR（0.005 mg/kg）以及中國成人的日允許攝人量，計算得出膳食風(fēng)險概率為3.86%。結(jié)合中國農(nóng)藥登記情況和居民人均膳食結(jié)構(gòu)，計算得到普通人群滅蠅胺的理論最大日攝人量（ TMDI）是0.15mg，占ADI的3.86%，表明不會對一般人群健康發(fā)生不可接受的風(fēng)險（表5）。

3 結(jié)論

建立了基于QuEChERS - LC - MS/MS同時測定韭菜中噻蟲胺和滅蠅胺殘留量的分析方法。在0. 005～1.0 mg/kg范圍內(nèi)，噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的平均添加回收率為90.0%～98.7%、RSD為0.8%～3.3%。利用建立的殘留分析方法，進(jìn)行動態(tài)消解試驗結(jié)果表明，噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的殘留量均未檢出。

噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜上均未獲得登記。擬推薦20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑按有效成分1800 g/h㎡施藥2次，施藥間隔期為45d，安全間隔期20d。噻蟲胺在韭菜中的殘留量均<0.01mg/kg，滅蠅胺在韭菜中的殘留量均<0.005mg/kg。在此基礎(chǔ)上，結(jié)合膳食攝人結(jié)構(gòu)模型分析，對噻蟲胺和滅蠅胺的膳食風(fēng)險進(jìn)行初步評估，其風(fēng)險概率<1，分別為5.63%和3.86%。表明栽培韭菜，按照推薦劑量和施藥次數(shù)，施用20%噻蟲胺·滅蠅胺懸浮劑，通常不會對一般人群健康產(chǎn)生不可接受的風(fēng)險。目前，中國尚未制定噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的最大殘留限量值（MRL），本研究結(jié)果為制定噻蟲胺和滅蠅胺在韭菜中的MRL值提供了數(shù)據(jù)支撐。

參考文獻(xiàn)：

[1] 張明媚，孫克，吳鴻飛，等.噻蟲胺的合成[J].農(nóng)藥，2010，49（2）：94 -96.

[2] 王忠燕，苑士濤，李夢瑤，等.20%滅蠅胺·噻蟲胺懸浮劑不同劑量防治韭菜遲眼蕈蚊幼蟲的田間藥效試驗[J].農(nóng)藥，2017，56（1）：76 -78.

[3] 侯如燕，蔡薈梅，張正竹，等.液相色譜法檢測水果蔬菜中的煙堿類農(nóng)藥殘留[J].分析試驗室，2010，29（2）：59 -63.

[4] 楊慶喜，劉娜，程功，等.噻蟲胺在水稻和土壤中的殘留及消解動態(tài)[J].農(nóng)藥，2018，57（5）：343 -346，358.

[5] 李廣領(lǐng)，谷珊山，劉博，等.基質(zhì)分散萃取一高效液相色譜法對菠菜中噻蟲胺殘留的檢測[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2016，55（2）：465 -468.

[6] 張鵬，金芬，楊莉莉，等.噻蟲胺在番茄和土壤中的殘留及消解動態(tài)[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2016，18（4）：490 -496.

[7] 劉艷萍，王思威，孫海濱，等.噻蟲嗪及其代謝物噻蟲胺在節(jié)瓜中的消解動態(tài)及初步膳食風(fēng)險評估[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2018，20（2）：211 -216.

[8] 張春榮，何紅梅，徐玲英，等.噻蟲胺在水稻中的殘留分析方法及其消解動態(tài)[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報，2014，26（5）：1263 -1267。

[9] 徐軍，張盈，董豐收，等.超高效液相色譜一串聯(lián)質(zhì)譜法快速檢測菜豆及土壤中的滅蠅胺殘留[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2012，14（6）：654 -658.

[10]樊苑牧，俞雪鈞，顧曉俊，等.高效液相色譜法測定含脂羊毛中滅蠅胺和環(huán)蟲腈[J].分析化學(xué)，2010，38（1）：113 -116.

[11] 郭筠，莫漢宏，安鳳春，等.HPLC法檢測滅蠅胺在黃瓜和土壤中的殘留[J].環(huán)境化學(xué)，2004，23（6）：700 -703.

[12] 王冉，劉鐵錚，柳偉榮.SPE - HPLC法測定雞蛋中滅蠅胺一環(huán)丙氨嗪[J].浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報，2005，17 （6）：376 - 379.

[13] 錢鳴蓉，章虎，何紅梅，等.親水作用色譜一串聯(lián)質(zhì)譜測定蔬菜中滅蠅胺及其代謝物三聚氰胺[J].分析化學(xué)，2009，37（6）：902 -906.

[14] 王京文，周航，卜惠斐，等.滅蠅胺及其代謝物三聚氰胺在大棚黃瓜上的殘留降解動態(tài)[J].農(nóng)藥，2011，50（2）：130 -140.

[15] NY/T 7882004，農(nóng)藥殘留試驗準(zhǔn)則[s].北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2004.

[16] 農(nóng)業(yè)部農(nóng)藥檢定所.農(nóng)藥登記殘留田間試驗標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程[M].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2007：143 - 147，320 -324.

[17] GB 27632016，食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中農(nóng)藥晟大殘留限量[s].北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2017.

[18] 中國農(nóng)藥信息網(wǎng).農(nóng)藥登記信息[EB/OL].http：//www.chinapesticide. gov. cn/2017 - 11 - 20.

[19] 中華人民共和國衛(wèi)生部，中華人民共和國科學(xué)技術(shù)部，中華人民共和國國家統(tǒng)計局.中國居民營養(yǎng)與健康狀況2002[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2005.