孫 燕，馮 峰，黃特輝，張旭帆，曹俊嶺,3*，張 峰*

1北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 100029；2中國檢驗檢疫科學(xué)研究院，食品安全研究所，北京 100176；3北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院，北京 100700

沙棘HippophaerhamnoidesL.,胡頹子科沙棘屬植物，含有豐富的營養(yǎng)物質(zhì)和功效成分，具有健脾消食，止咳祛痰，活血散瘀等功效[1-3]。對于沙棘中功效成分的研究，文獻(xiàn)中已有報導(dǎo)，發(fā)現(xiàn)的功效成分包括多糖類、黃酮類、維生素類、脂類以及三萜類和甾醇類等[4]。傳統(tǒng)檢測技術(shù)只能依據(jù)功效成分對照品對沙棘進行檢測，對于沒有對照品的功效成分，則無法識別[5,6]。由于對照品價格昂貴，每個實驗室的種類有限，所以目前對于沙棘中功效成分的研究還不夠全面。此外，由于《中國藥典》中僅以沙棘果實入藥，所以對于沙棘中功效成分的研究多集中在果實上面。隨著近些年沙棘資源受到了越來越廣泛的重視，沙棘的莖和葉中也被檢出含有大量的功效成分[7]。對于沙棘果、葉、莖中功效成分的差異研究，目前尚未見報道。

本研究建立了一種超高效液相色譜-四極桿/靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜(UPLC-Q-Exactive)進行沙棘中功效成分的非靶標(biāo)分析方法，在優(yōu)化樣品提取條件的基礎(chǔ)上，基于中藥成分高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫OTCML中存儲的1 200余種中藥化合物對照品的7 000多張一級和碎片質(zhì)譜圖庫及色譜保留時間信息，對沙棘樣品果、葉、莖中的功效成分進行了鑒定。本研究為全面表征沙棘中的功效成分及充分理解沙棘功效成分的構(gòu)效關(guān)系提供有力手段。

1 儀器與材料

超高效液相色譜系統(tǒng)(Dionex UltiMate 3000)串聯(lián)四極桿-靜電場軌道阱高分辨質(zhì)譜系統(tǒng)(Q-Exactive)(美國Thermo Fisher公司)；數(shù)據(jù)處理用Compound Discover 2.0軟件(美國Thermo Fisher公司)；中藥成分高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫(Orbitrap Traditional Chinese Medicine Library，OTCML)(美國Thermo Fisher 公司)，分析天平XP 105(瑞士Mettler公司)；Milli-Q Advantage A10超純水機(美國Millipore公司)；Centrifuge 5415D型離心機(德國Eppendorf公司)；KQ-500DE型超聲清洗機，超聲功率100 W(昆山市超聲儀器有限公司)。

對照品：羽扇烯酮(批號：1617-70-5)，齊墩果酮酸(批號：17990-42-0)，科羅索酸(批號：4547-24-4)，路路通酸(批號：4481-62-3)購自美國阿爾法公司；甘草次酸(批號：471-53-4)，熊果酸(批號：77-52-1)，雷公藤紅素(批號：34157-83-0)，山楂酸(批號：4373-41-5)購自美國西格瑪公司；熊果酮酸(批號：6246-46-4)，刺囊酸(批號：808769-54-2)，積雪草酸(批號：150821-16-2)，皂皮酸(批號：194027-11-7)購自云南西力生物技術(shù)有限公司；以上對照品純度≥98%。甲醇、乙腈、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷為色譜純(美國Fisher公司)，水為超純水，甲酸為優(yōu)級純(美國Fisher公司)。沙棘果、莖、葉等樣品采集于山西省呂梁市文水縣，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院藥學(xué)部曹俊嶺主任鑒定為胡頹子科沙棘屬植物中國沙棘H.rhamoidessubsp.sinensis。

2 實驗方法

2.1 對照品溶液制備

精密稱取對照品羽扇烯酮、齊墩果酮酸、科羅索酸、路路通酸、甘草次酸、熊果酸、雷公藤紅素、山楂酸、熊果酮酸、刺囊酸、積雪草酸和皂皮酸各10 mg，分別置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配成質(zhì)量濃度為1 000 mg/L的儲備液，于 4 ℃下避光保存，使用時稀釋。

2.2 供試品制備

將干燥的沙棘果、葉、莖樣品粉碎過50目篩。分別準(zhǔn)確稱取各粉末1 g后置于50 mL離心管中，向每個供試品中分別加水、甲醇、乙腈、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷各10 mL，蓋上蓋后超聲提取30 min，5 000 rpm離心10 min后取上層清液，過0.22 μm 濾膜，待上機檢測。

2.3 色譜條件

色譜分離采用Thermo Hypersil GOLD aQ 色譜柱(2.1 mm×100 mm，1.9 μm，美國Thermo公司)。流動相A為含0.1% 甲酸乙腈，B為0.1% 甲酸水溶液。梯度洗脫程序：0～2 min，5% A；2～42 min，5%～95% A；42～47 min，95% A；47.1～50 min，5% A。流速0.3 mL/min，柱溫40 ℃，進樣量 5 μL。

2.4 質(zhì)譜條件

質(zhì)譜系統(tǒng)采用電噴霧離子源(ESI)，正、負(fù)離子模式同時掃描：掃描范圍 (m/z) 100～1 500；數(shù)據(jù)采集使用一級母離子全掃描和數(shù)據(jù)依賴的二級子離子掃描模式(Full MS /dd-MS2)；噴霧電壓:3.2 kV(-)/ 3.5 kV(+)；離子源溫度:320 ℃；傳輸金屬毛細(xì)管溫度:350 ℃；鞘氣壓力:35 arb；輔助氣壓力:10 arb；一級質(zhì)譜全掃描(full scan)分辨率:R=70 000；自動增益控制進入軌道阱中的離子數(shù)(AGC target):1e6；最大注入時間:100 ms。

3 結(jié)果與分析

3.1 樣品提取條件的優(yōu)化

由于沙棘提取物中功效成分復(fù)雜，不同功效成分極性差異大，為全面識別和表征沙棘中各類成分，本實驗對沙棘樣品的提取溶劑進行了優(yōu)化，并對每種提取溶劑在正、負(fù)離子模式下進行了分析。在分別選用了水、甲醇、乙腈、乙醇、異丙醇、乙酸乙酯、二氯甲烷7種提取溶劑對樣品進行提取和凈化后(提取方式如2.2節(jié)所述)，通過UPLC-Q-Exactive 系統(tǒng)進行了分析，得到了不同提取溶劑正、負(fù)離子模式下的總離子色譜圖。典型提取溶劑的色譜圖見圖1。通過對不同提取條件下的總離子色譜圖進行積分處理，并對所有的色譜峰進行歸一化處理及多維統(tǒng)計分析，表明使用7種溶劑提取的化合物種類和含量均有差別(見圖2a)，通過對所有的色譜峰進行主成分分析(圖2b)，表明水、甲醇和二氯甲烷三種提取溶劑提取的化合物差異最大，用這三種提取溶劑就可以涵蓋沙棘中功效成分最全面的信息。

圖1 正負(fù)離子模式下沙棘果莖葉水(a)，甲醇(b)，二氯甲烷(c)提取液的總離子流圖Fig.1 Total ion flow diagram of Hippophae rhamnoides fruit stem and leaf extracts from water (a), methanol (b) and dichloromethane (c) with positive and negative mode

3.2 樣品OTCML譜庫檢索條件的優(yōu)化

為了鑒定出沙棘中盡可能多的功效成分，需要對上述總離子色譜圖中的所有分子離子質(zhì)量數(shù)進行提取，然后將提取到的分子離子色譜峰、保留時間、對應(yīng)的碎片離子色譜峰及同位素峰強度等信息與OTCML中藥成分高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫中的相應(yīng)信息進行檢索，然后根據(jù)給出的匹配度分值對樣品中的功效成分進行鑒定。本研究使用Thermo 公司開發(fā)的CD軟件完成上述譜庫檢索操作。在此過程中，為了避免基質(zhì)的干擾及噪音的影響，需要定義分子離子提取峰的規(guī)則如質(zhì)量偏差、信噪比、目標(biāo)峰的強度閾值等。因aq柱更有利于分離極性物質(zhì)，且能用全水相，為此，本研究選擇實驗室訂購的12個極性化合物五環(huán)三萜類對照品對峰提取條件和譜庫匹配度參數(shù)進行了驗證。12個五環(huán)三萜類對照品采用空白溶劑的方式進行進樣分析，選用的進樣濃度為1 mg/L，色譜條件同供試品分析條件。結(jié)果表明在此條件下，所有12種化合物的分子離子峰面積都在1×105以上，信噪比均大于100，分子離子及其二級碎片離子質(zhì)量精度均小于5 ppm。鑒于此，為保證檢索出盡可能多的化合物，同時提高準(zhǔn)確性，本研究設(shè)定的峰提取條件定為：峰面積閾值設(shè)置為80 000，信噪比閾值設(shè)置為10，一級及其二級質(zhì)量精度閾值設(shè)置為5 ppm，只有高于上述閾值的化合物才通過OTCML進行檢索。

圖2 7種提取溶液下沙棘中功效成分種類以及提取量差異比較Fig.2 Comparison of functional components and extraction amount of Hippophae rhamnoides in seven extraction solutions

通過使用CD軟件對上述12種對照品的一級分子離子色譜峰和二級碎片離子色譜峰與OTCML中的對照化合物譜圖庫進行比對，結(jié)果表明12種化合物都得到了識別，其中羽扇烯酮、雷公藤紅素、山楂酸、熊果酮酸、熊果酸、科羅索酸、齊墩果酮酸7種化合物的譜圖匹配高達(dá)90以上；其余甘草次酸、刺囊酸、路路通酸、積雪草酸、皂皮酸5種化合物的譜圖匹配度在80～90。CD軟件還提供了一些匹配度在80分以下的化合物，經(jīng)結(jié)構(gòu)分析表明，這些化合物是OTCML中存儲的與上述化合物結(jié)構(gòu)類似的化合物，如與齊墩果酮酸互為同分異構(gòu)體的雷公藤內(nèi)酯甲也被檢索出來，但匹配度低于80分(詳見圖3)且OTCML譜庫中存儲的雷公藤內(nèi)酯甲二級質(zhì)譜圖與實際譜圖比較相差較大。鑒于此，本研究設(shè)定匹配度達(dá)80分以上的化合物為樣品中包含的功效成分。

3.3 樣品中功效成分的鑒定

基于上述確定的峰提取條件和譜庫匹配度參數(shù)，本研究利用CD軟件對沙棘果、莖、葉中的功效成分進行了分析，每個部位的樣品均平行分析3個樣品，以3個樣品中均有檢出的確定為檢出。此外，對于鑒定出的沙棘中的功效成分本研究也與文獻(xiàn)報導(dǎo)的進行了比對和驗證，以進一步排除假陽性結(jié)果。結(jié)果表明，在沙棘中，共有102個功效成分，包括苷類18個，黃酮類21個，萜類18個，苯丙素類13個，生物堿類6個，揮發(fā)成分14個，多酚12個；其中有17個化合物是在沙棘中首次發(fā)現(xiàn)，詳見表1。

3.4 沙棘果莖葉的功效成分差異分析

3.4.1 苷類的差異

研究表明，苷類化合物是沙棘抗氧化增強免疫的主要有效成分[8，9]，其中多為黃酮苷類?；贠TCML中藥成分高分辨液質(zhì)數(shù)據(jù)庫的檢索結(jié)果，本研究在沙棘果、莖、葉中共識別出18個苷類化合物，除了文獻(xiàn)中已經(jīng)報導(dǎo)的13個黃酮苷類之外，還識別出5個松脂醇苷(刺五加苷E、刺五加苷B、松脂醇二葡萄糖苷、丁香樹脂醇雙葡萄糖苷、松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷)類糖苷化合物。上述新發(fā)現(xiàn)的功效成分僅在沙棘果中有檢出外，剩余化合物在果、莖、葉中均有檢出，但是果中含量明顯高于莖和葉中的含量。

圖3 CD軟件中實際對照品的二級質(zhì)譜圖與OTCML中的對照化合物譜圖庫的匹配圖Fig.3 Matching charts between secondary mass spectrogram of actual reference material and spectrogram library of contrast compounds of OTCML in CD Software注：a.m/z 455.352 0的分子離子色譜峰； b.齊墩果酮酸標(biāo)品(上半部分)與OTCML譜庫中齊墩果酮酸二級質(zhì)譜圖(下半部分)； c.OTCML譜庫中雷公藤內(nèi)酯甲二級質(zhì)譜圖與實際譜圖。Note:a.m/z 455.352 0 ion chromatographic peak;b.Oleanolic acid standard(upper half) compared with oleanolic acid secondary mass spectrogram in the OTCML library (lower part);c.Comparison of triptolide A secondary mass spectrogram in the OTCML with the actual spectrum.

表1 沙棘不同部位識別出的化學(xué)成分Table 1 Chemical constituents identified from different parts of Hippophae rhamnoides

續(xù)表1(Continued Tab.1)

分類Classify保留時間tR序號No.化合物名稱Compound 分子式 Formula準(zhǔn)分子離子峰Ion peak碎片離子Fragment ion 部位Position10.259槲皮甙 QuercitrinC21 H20 O11449.108 8[M+H]+151.003 5,287.054 9果,葉10.2510紫云英苷 AstragalinC21 H20 O11447.093 7[M-H]-107.013 8,151.003 5,301.035 2果,葉12.5211田基黃苷 Quercetin 7-rh-amnosideC21 H20 O11447.093 7[M-H]-107.013 8,151.003 5,301.035 2果,葉14.3012蘆丁 RutinC27 H30 O16609.145 8[M-H]-151.003 5,255.029 8,271.024 7,300.027 3果8.2113異夏佛塔苷 IsoschaftosideC26 H28 O14565.155 2[M+H]+121.028 5,295.059 7,325.070 1,379.080 5,427.102 3,511.123 8果7.7114刺五加苷E Eleutheroside EC34 H46 O18741.260 4[M-H]-161.024 0,179.034 6,194.058 2,209.081 7果5.8315刺五加苷B Eleutheroside BC17 H24 O9371.142 0[M-H]-166.026 9,181.050 5,387.108 1,417.155 6果29.0016松脂醇二葡萄糖苷Pinoresinol diglucosideC32 H42 O16681.239 7[M-H]-136.016 4,151.039 9,357.134 1果9.7117丁香樹脂醇雙葡萄糖苷Syringaresinol di-O-gluco-sideC34 H46 O18741.260 4[M-H]-166.026 9,181.050 5,387.108 1,417.155 6果10.2118松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷Pinoresinol 4-O-glucosideC26H32O11519.187 0[M-H]-136.016 4,151.039 8,177.019 1,357.134 4果黃酮醇類 Flavonols13.7719異鼠李素 IsorhamnetinC16 H12 O7315.051 1[M-H]-151.003 5,300.027 3果,莖,葉15.4320楊梅素 MyricetinC15 H10 O8317.031 5[M-H]-107.014 1,137.024 8,151.004 0,178.999 1葉15.5221山奈酚 KaempferolC15 H10 O6287.055 4[M+H]+121.028 7,153.018 3,287.055 0葉17.0722桑黃素 MorinC15 H10 O7301.036 5[M-H]-151.004 0,229.014 9葉18.0723槲皮素 QuercetinC15 H10 O7301.036 4[M-H]-151.004 0葉15.7124松屬素 PinocembrinC15 H12 O4255.066 8[M-H]-145.066 0,213.056 0果,莖,葉20.8225柚皮素 NaringeninC15 H12 O5271.061 8[M-H]-119.050 3,151.003 8莖16.5726橙皮素 HesperetinC16 H14 O6301.072 4[M-H]-134.037 5,151.003 8莖26.4827二氫楊梅素DihydromyricetinC15 H12 O8319.046 9[M-H]-125.024 7,175.004 0,193.01 4,301.036 0莖32.2628圣草酚 EriodictyolC15 H12 O6287.057 2[M-H]-135.045 6,151.004 1莖18.7829二氫槲皮素 TaxifolinC15 H12 O7303.051 7[M-H]-125.024 6,175.040 3,285.041 0葉18.1730木犀草素 LuteolinC15 H10 O6285.041 6[M-H]-133.029 9,151.004 1莖18.9531芹菜素ApigeninC15 H10 O5269.045 6[M-H]-117.034 5,151.003 5果3.0632兒茶素 Catechin hydrateC15 H14 O6289.072 9[M-H]-109.029 8,123.045 5,203.072 0,245.082 6葉6.6933表兒茶素EpicatechinC15 H14 O6291.089 1[M-H]-109.029 8,123.045 5,203.072 0,245.082 6葉6.2834表沒食子兒茶素Epigallo-catechinC15 H14 O7305.067 8[M-H]-125.024 0,137.024 8,165.019 0,219.066 9葉

續(xù)表1(Continued Tab.1)

分類Classify保留時間tR序號No.化合物名稱Compound 分子式 Formula準(zhǔn)分子離子峰Ion peak碎片離子Fragment ion 部位Position2.0635沒食子兒茶素Gallocate-chinC15 H14 O7307.081 7[M+H]+125.024 0,137.024 8,165.019 0,219.066 9葉5.9236原花青素B2 Procyanidin B2C30 H26 O12577.136 1[M-H]-125.024 5,289.072 3,407.077 6,425.088 9莖5.9237原花青素B1 Procyanidin B1C30 H26 O12579.150 8[M+H]+125.024 5,289.072 3,407.077 6,425.088 9莖31.1838柚皮苷查爾酮Naringenin chalconeC15 H12 O5271.061 8[M-H]-119.050 3,151.003 8,253.051 1莖33.5139根皮素 PhloretinC15 H14 O5273.077 9[M-H]-81.034 8,123.045 5,167.035 4,273.077 8莖四環(huán)二萜類 Tetracyclic diterpenes33.7640熊果酸Ursolic acidC30 H48 O3457.368 2[M+H]+107.086 0,121.101 5,163.148 1,189.163 8,203.179 7,411.362 3莖,葉27.2941熊果酮酸 Ursonic acidC30 H46 O3455.352 8[M+H]+107.085 9,121.101 3,175.148 3,187.148 2,205.158 6,409.346 3莖,葉27.2542科羅索酸Corosolic acidC30 H48 O4473.363 5[M+H]+107.085 9,121.101 3,189.163 8,205.158 7,409.346 7,427.356 4莖,葉22.5543積雪草酸 Asiatic acidC30 H48 O5489.368 3[M+H]+107.085 9,133.101 3,159.116 6,203.179 5,407.330 6,453.334 4葉30.7544刺囊酸Echinocystic acidC30 H48 O4473.363 5[M+H]+189.163 8,471.347 0果,莖,葉25.2545山楂酸 Maslinic acidC30 H48 O4473.362 6[M+H]+175.148 4,189.163 9,203.179 7,231.175 7,409.346 9,427.362 4莖,葉26.2946齊墩果酮酸 Oleanonic acidC30 H46 O3455.352 6[M+H]+95.086 0,107.085 9,177.163 8,203.179 5,409.346 5莖,葉24.6047甘草次酸 Glycyrrhetintic cidC30 H46 O4471.347 3[M+H]+107.085 9,119.085 7,189.163 6,425.340 9莖,葉22.8348皂皮酸 Quillaic acidC30 H46 O5487.342 6[M+H]+119.085 7,175.148 0,187.148 1,451.320 5葉30.8549羽扇烯酮 LupenoneC30 H48 O425.378 2[M+H]+69.070 7,95.086 1,109.101 5,137.132 5果,莖,葉26.2950路路通酸Liquidambaric acidC30 H46 O3455.352 5[M+H]+107.085 9,119.085 7,177.163 7,205.158 8,409.346 4莖,葉28.1951櫟櫻酸 3beta-hydroxyC30 H48 O2441.373 3[M+H]+95.086 1,107.086 0,423.362 3莖,葉9.9452樟腦 CamphorC10 H16 O153.127 4[M+H]+93.070 3,107.085 8,135.116 7果,莖,葉0.3453紫蘇烯 PerilleneC10 H14 O151.112 0[M+H]+93.070 5,133.101 3莖,葉15.7654莪術(shù)烯醇 CurcumenolC15 H22 O2235.169 4[M+H]+79.055 0,93.070 4,121.101 4莖,葉25.9755青蒿酸 Artemisinic acidC15 H22 O2235.169 5[M+H]+79.055 0,93.070 4,121.101 4莖,葉15.6556異甜菊醇 IsosteviolC20 H30 O3319.227 3[M+H]+105.070 4,255.210 8,273.221 3莖

續(xù)表1(Continued Tab.1)

分類Classify保留時間tR序號No.化合物名稱Compound 分子式 Formula準(zhǔn)分子離子峰Ion peak碎片離子Fragment ion 部位Position16.6557甜菊醇 SteviolC20 H30 O3319.227 3[M+H]+105.070 4,119.085 9,199.147 9,255.210 8,273.221 3莖苷型生物堿類 Glycoside alkaloids1.2158腺苷 AdenosineC10 H13 N5 O4268.104 4[M+H]+136.061 8,268.103 9果,莖,葉1.8559鳥苷 GuanosineC10 H13 N5 O5284.099 5[M+H]+135.030 5,152.056 9果,莖1.2660巴豆苷 IsoguanosineC10 H13 N5 O5284.098 8[M+H]+152.056 5果2.2761煙酰胺 NicotinamideC6 H6 N2 O123.055 7[M+H]+80.050 2,95.045 0果,莖,葉0.9262鹽酸胡蘆巴堿 Trigonelline HClC7 H7 N O2138.055 2[M+H]+94.065 8,110.060 4莖,葉3.2763蟲草素 CordycepinC10 H13 N5 O3252.109 3[M+H]+136.061 7莖香豆素類 Coumarins7.3764香豆素 CoumarinC9 H6 O2147.044 2[M+H]+91.054 8,119.049 4莖,葉32.6165甲氧基香豆素 Methoxy-coumarinC10 H8 O3177.054 7[M+H]+121.064 9,133.06 4莖6.0966東莨菪內(nèi)酯 ScopoletinC10 H8 O4193.049 9[M+H]+150.031 3,178.026 2莖25.7167異莨菪亭 IsoscopoletinC10 H8 O4193.049 7[M+H]+150.031 1,178.026 0莖34.7668松柏醛FerulaldehydeC10 H10 O3179.070 5[M+H]+91.054 8,119.049 4,133.064 8,147.044 0,161.059 7果,莖,葉28.5669甲基丁香酚 Methyl euge-nolC11 H14 O2179.070 3[M+H]+91.054 8,119.049 3,147.043 9,161.059 6果33.8770肉桂醛 CinnamaldehydeC9 H8 O133.064 8[M+H]+105.070 1莖21.50716-姜酚 6-GingerolC17 H26 O4293.176 8[M-H]-221.155 1,236.105 9果,莖,葉22.8972芥子酸 Sinapic acidC11 H12 O5225.076 3[M-H]-91.055 0,119.049 6,147.044 3,175.039 3,207.065 5莖,葉24.5973阿魏酸 Ferulic acidC10 H10 O4195.065 5[M-H]-89.039 2,117.033 8,145.028 5,149.059 8,177.054 7莖,葉24.5974異阿魏酸 Isoferulic acidC10 H10 O4195.065 6[M-H]-89.039 2,117.033 8,145.028 5,149.059 8,177.054 7莖,葉26.9975肉桂酸 Cinnamic acidC9 H8 O2149.059 7[M-H]-65.039 4,121.028 5莖31.4276對羥基肉桂酸 Coumaric acidC9 H8 O3165.054 6[M-H]-91.054 7,119.049 2,123.044 1,136.075 5莖脂肪族類Fat42.9777亞麻酸乙酯Linolenic acid ethyl esterC20 H34 O2307.263 5[M+H]+67.055 1,81.070 6,95.086 1,109.101 6果,莖,葉22.3178脫落酸 Abscisic acidC15 H20 O4263.129 8[M-H]-204.116 0,219.139 5果,莖,葉21.0479檸檬酸 Citric acidC6 H8 O7191.020 6[M-H]-85.029 8,87.009 1,111.009 2果,莖,葉25.5480α-亞麻酸 α-Linolenic acidC18 H30 O2279.231 8[M+H]+67.055 0,81.070 5,95.086 0,149.023 2果,莖,葉

續(xù)表1(Continued Tab.1)

分類Classify保留時間tR序號No.化合物名稱Compound 分子式 Formula準(zhǔn)分子離子峰Ion peak碎片離子Fragment ion 部位Position21.48 81壬二酸 Azelaic acidC9 H16 O4187.098 0[M-H]-97.066 1,125.097 5果,莖,葉4.6182水楊酸 Salicylic acidC7 H6 O3137.024 8[M-H]-93.034 8果,莖,葉3.59834-甲氧基水楊酸 4-Methoxysalicylic acidC8 H8 O4167.035 4[M-H]-79.055 5,123.045 4果,莖,葉5.4584對羥基苯甲酸4-Hydroxybenzoic acidC7 H6 O3137.024 4[M-H]-93.034 5果,莖,葉2.5185龍膽酸 Gentisic acidC7 H6 O4153.019 9[M-H]-108.022 0,109.029 8果,莖,葉35.8486丁香醛 3,5-Dimethoxy-4-hydroxybenzaldehydeC9 H10 O4183.065 4[M+H]+56.943 1,113.963 9,131.974 2,159.969 1果,莖,葉37.9687香蘭素 VanillinC8 H8 O3153.054 6[M+H]+65.039 4,70.942 6,93.034 0,111.044 4,125.059 8,129.979 0果,莖,葉39.9688異香蘭素 IsovanillinC8 H8 O3153.054 7[M+H]+65.039 4,93.034 0,111.044 4,125.059 8果,莖,葉24.4889對羥基安息香醛 p-HydroxybenzaldehydeC7 H6 O2121.029 8[M-H]-92.027 0果,莖,葉30.96904-甲氧基水楊醛Hydroxy-4-methoxybenzaldehydeC8 H8 O3153.054 7[M+H]+65.039 4,93.034 0,111.044 4,125.059 8果,莖,葉鞣質(zhì)類多酚Tannins polyphenols2.5191原兒茶酸Protocatechuic acidC7 H6 O4153.019 3[M-H]-109.029 3莖,葉1.4792沒食子酸 Gallic acidC7 H6 O5169.014 6[M-H]-125.024 6莖,葉29.1293鞣花酸 Ellagic acidC14 H6 O8301.000 0[M-H]-185.024 9,229.992 1莖,葉30.6594沒食子酸甲酯 Methyl gal-lateC8 H8 O5183.030 4[M-H]-124.016 9莖,葉31.4795焦性沒食子酸 PyrogallolC6 H6 O3127.039 2[M-H]-81.034 1,109.028 7莖,葉33.6896咖啡酸苯乙酯 Phenethyl caffeateC17 H16 O4283.098 5[M-H]-135.045 6,161.024 9,179.035 4,203.144 7果5.6197咖啡?？鼘幩酑af-feoylquinic acidC16 H18 O9353.087 8[M-H]-85.029 4,191.056 0果0.7698右旋奎寧酸Quinic acidC7 H12 O6191.056 9[M-H]-85.029 8,87.009 1,111.009 2果5.4299新綠原酸Neochlorogenic acidC16 H18 O9355.102 4[M+H]+117.033 7,135.044 0,163.038 8果6.61100隱綠原酸 Cryptochlorogen-ic acidC16 H18 O9353.087 8[M-H]-135.045 1,191.056 0果7.24101綠原酸 Chlorogenic acidC16 H18 O9353.087 8[M-H]-85.029 4,191.055 9果25.76102咖啡酸 Caffeic acidC9 H8 O4179.035 8[M-H]-135.045 7果

3.4.2 黃酮類的差異

黃酮類化合物是沙棘中研究最多的一類功效成分[10,11]?；贠TCML的譜庫信息，本研究識別出21個黃酮類化合物，包括5個黃酮醇類(異鼠李素、楊梅素、山奈酚、桑黃素、槲皮素)，4個黃烷醇類(兒茶素、表兒茶素、表沒食子兒茶素、沒食子兒茶素)，6個二氫黃酮類(松屬素、柚皮素、橙皮素、二氫楊梅素、圣草酚、二氫槲皮素)，2個原花青素類和2個查爾酮類；其余2個為2-苯基色原酮類。對這些化合物的分布研究表明，黃酮醇類主要集中在沙棘果中(其他部位也有微量檢出)，黃烷醇類僅存在于沙棘葉中，二氫黃酮類、原花青素類和查爾酮類則集中在沙棘莖中。當(dāng)前對于沙棘中黃酮類化合物的利用，還是集中在沙棘果的利用[12]，本研究對于沙棘葉和沙棘莖中黃酮類化合物的檢出，對于今后指導(dǎo)沙棘產(chǎn)品的充分和全面利用，將起到積極的推動作用。

3.4.3 萜類的差異

目前文獻(xiàn)中關(guān)于沙棘中萜類的研究還較少[13,14]。本研究基于OTCML的譜庫信息，識別出沙棘中18個萜類化合物，包括12個五環(huán)三萜類(見表1),2個四環(huán)二萜類(甜菊醇、異甜菊醇)，2個雙環(huán)單萜類(樟腦、紫蘇烯)和2個倍半萜類(莪術(shù)烯醇、青蒿酸)。對這些化合物的分布研究表明，五環(huán)三萜類多在沙棘葉莖中富集，而四環(huán)二萜類、雙環(huán)單萜類和倍半萜類僅存在于沙棘莖中。除了五環(huán)三萜類外，其余6種萜類為沙棘中首次發(fā)現(xiàn)。

3.4.4 苯丙素類的差異

目前文獻(xiàn)中有關(guān)沙棘中苯丙素類的研究也較少[15]，本研究基于OTCML的譜庫信息，識別出沙棘中13個苯丙素類，包括3個苯丙烯類，6個苯丙酸類(詳細(xì)名稱見表1)，4個香豆素類(香豆素、甲氧基香豆素、東莨菪內(nèi)酯、異莨菪亭)。這類化合物在沙棘的果莖葉均有分布，但香豆素類化合物在沙棘莖葉中為首次檢出。

3.4.5 生物堿類的差異

關(guān)于沙棘中生物堿類功效成分的研究，文獻(xiàn)中僅對總量有所報道[16]，具體種類則尚無研究。本研究基于OTCML的譜庫信息，鑒定出沙棘中6個生物堿類化合物：生物堿煙酰胺、鹽酸胡蘆巴堿、蟲草素和3個苷型生物堿(巴豆苷、鳥苷、腺苷)，這6種生物堿類化合物為沙棘中首次報道，且其在沙棘果、莖、葉中均有檢出。

3.4.6 揮發(fā)成分的差異

文獻(xiàn)對于沙棘中的揮發(fā)成分研究多在沙棘果[17,18]。本研究基于OTCML的譜庫信息，識別出沙棘中14個揮發(fā)油類：包括5個脂肪族類和9個芳香族類，這些功效成分含量較低，但在沙棘的果、莖、葉中均有分布，為今后沙棘揮發(fā)油的全面提取，起到積極的推動作用。

3.4.7 多酚類的差異

文獻(xiàn)對于沙棘中的揮發(fā)成分研究多提取總量[19,20]，具體種類則尚不全面。本研究基于OTCML的譜庫信息，識別出沙棘中12個多酚類。包括5個鞣質(zhì)類(原兒茶酸、鞣花酸、沒食子酸、沒食子酸甲酯、焦性沒食子酸)和7個苯丙素類多酚(咖啡酸苯乙酯、咖啡酰奎寧酸、右旋奎寧酸、新綠原酸、隱綠原酸、綠原酸、咖啡酸)。鞣質(zhì)類多酚僅存在于沙棘莖葉中，苯丙素類多酚僅在沙棘果中有檢出。

4 結(jié)論

本研究運用UPLC-Q-Exactive技術(shù)結(jié)合OTCML中藥成分高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)庫對沙棘果、莖、葉中的功效成分進行了快速和精準(zhǔn)的鑒定?；贠TCML數(shù)據(jù)庫中所包含的1 200余種中藥化合物的質(zhì)譜信息，本研究在不需標(biāo)準(zhǔn)品的情況下，共鑒定出沙棘中102個功效成分，其中17種功效成分為沙棘中首次發(fā)現(xiàn)。對于在沙棘果、莖、葉中檢出的功效成分分布表明，沙棘果中主要含有苷類(結(jié)構(gòu)類型為黃酮苷類、松脂醇苷類、苷類生物堿類)，黃酮類(結(jié)構(gòu)類型為黃酮醇類)及苯丙素類多酚；沙棘莖中主要含有黃酮類(結(jié)構(gòu)類型為二氫黃酮類、花青素類、查爾酮類)，萜類(結(jié)構(gòu)類型為雙環(huán)單萜類、倍半萜類、四環(huán)二萜類)，苯丙素類(結(jié)構(gòu)類型為香豆素類、苯丙烯類、苯丙酸類)及游離生物堿；沙棘葉中主要含有黃酮類(結(jié)構(gòu)類型為黃烷醇類)，萜類(結(jié)構(gòu)類型為五環(huán)三萜：熊果烷、齊墩果烷、羽扇豆烷)及鞣質(zhì)類。本研究對今后科學(xué)開發(fā)沙棘資源有重要意義。另外，該方法有望在別的中藥及天然產(chǎn)物成分的快速鑒定中發(fā)揮重要作用。