周 芬，吳 東，陳 勝，李 楊

（安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所，畜禽產(chǎn)品安全工程安徽省重點實驗室，安徽合肥230031）

黃曲霉毒素B1（AFB1）是毒性最強的一種黃曲霉毒素，AFB1會破壞機體免疫機能，使動物的內(nèi)臟器官組織受損、病變，導(dǎo)致動物生產(chǎn)性能下降，高劑量的AFB1還可能引起動物的死亡 （易中華等，2010；Sahoo 等 ，2001）。 龔 阿 瓊 等 （2018、2017、2015、2015）連續(xù)四年對市場上收集的飼料原料和豬配合飼料進行AFB1含量檢測發(fā)現(xiàn)，飼料原料AFB1的檢出率分別為95.5%、100%、100%、95.4%，超標率分別為28.5%、6.7%、7.8%、9.2%；豬配合飼料 AFB1的檢出率分別為 97.9%、100%、100%、96.2%，超標率分別為 27.6%、25.0%、12.0%、3.8%，這表明AFB1在飼料中廣泛存在，且存在著一定的超標隱患。目前對AFB1的研究主要集中在其對斷奶仔豬、生長豬生理機能的影響上。即將上市的肥育豬，普遍認為其耐受性要好于小豬，然而面臨上市的肥育豬直接關(guān)聯(lián)人類餐桌上的食品安全，因此其生理狀態(tài)更需要多加關(guān)注。本試驗選擇在肥育豬上市前一個月左右進行純品AFB1的飼喂，旨在了解不同劑量的純品AFB1（衛(wèi)生標準限量，5倍限量，10倍限量）對肥育豬生長性能及血液、肝臟功能造成的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗材料 AFB1購自生工生物工程（上海）股份有限公司，純度＞99%。每日按前一日采食量確定濃度分裝于膠囊中定點投喂，對照組投喂空膠囊。

1.2 試驗動物與設(shè)計 選取體重為 （80±2）kg的“杜×長×大”三元雜交肥育豬28頭，隨機分為4個組，每組7頭，分別飼喂在基礎(chǔ)日糧中添加0、20、100、200 μg/kg 純品AFB1（對照組、低劑量組、中劑量組、高劑量組）的日糧。預(yù)飼期7 d，正式期28 d。

1.3 試驗日糧與飼養(yǎng)管理 試驗日糧為配合飼料，購自安徽省新康飼料有限公司，水分11.7%，粗蛋白質(zhì)16.0%，粗纖維4.7%，粗灰分6.0%，總磷0.60%，鈣1.0%，AFB1為未檢出。試驗豬為圈養(yǎng)方式，自由采食，試驗期間每天觀察豬只狀態(tài)并統(tǒng)計日采食量，正式試驗開始時，按照試驗豬的前一日采食量配制AFB1濃度，確保其濃度為20、100、200 μg/kg 飼料。

1.4 采樣及測定方法

1.4.1 采樣 試驗期第29天晨飼前用真空采血管前腔靜脈采血5 mL×2，一管加入EDTA抗凝劑，冷藏立即送檢血常規(guī)；另一管不加抗凝劑，靜置半小時，4 ℃離心（3000 r/min，15 min），分離血清，分裝于1.5 mL離心管中，-20℃冰箱內(nèi)保存，3 d之內(nèi)測定血清酶活指標。

試驗期結(jié)束后，禁食，自由飲水12 h后，每組選取3頭豬稱重并屠宰，取肝臟組織，冷藏送回實驗室，用生理鹽水制成10%肝勻漿，取上清液分裝于1.5 mL離心管中，-20℃冰箱內(nèi)保存，3 d之內(nèi)測定肝臟酶活指標；取背最長肌及肝臟同一部位，冷藏送回實驗室，測定AFB1含量。

1.4.2 生化指標的測定 血清及肝臟中堿性磷酸酶（AKP）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）均采用比色法測定，試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。測定儀器為北京普析通用1810-DSPC紫外可見光分光光度計。

1.4.3 血常規(guī)的測定 血常規(guī)指標：白細胞（WBC）、紅細胞（RBC）、血小板（PLT）和血紅蛋白（HGB），測定儀器為MEK-5216K全自動血液分析儀。

1.4.4 AFB1的測定 AFB1采用酶聯(lián)免疫分析法測定，試劑盒購自江蘇蘇微微生物研究有限公司，最低檢出濃度為 0.10 μg/kg。測定儀器為瑞士sunrise酶標儀。

1.5 統(tǒng)計分析 采用SPSS 20.0軟件ANOVA模塊進行數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計分析，用LSD進行多重比較，試驗結(jié)果以“平均值±標準差”表示。

2 結(jié)果

2.1 AFB1含量 肥育豬肌肉中AFB1含量4組均為未檢出，肝臟中AFB1僅高劑量組有檢出，為（0.40±0.05）μg/kg。

2.2 生長性能 整個試驗期間，試驗豬只表現(xiàn)正常，無發(fā)病死亡情況發(fā)生。從表1可知，日糧中添加AFB1肥育豬的平均日增重和平均日采食量均有所下降，其中高劑量組平均日增重比對照組下降9.1%（P＜0.01），而中、高劑量組的平均日采食量分別比對照組降低1.9%、3.3%（P＜0.01）。此外高劑量組的料重比比對照組上升7.1%（P＜0.05），低劑量組和中劑量組料重比雖有上升趨勢，但差異不顯著（P＞0.05）。

表1 AFB1對肥育豬生長性能的影響

2.3 生理指標

2.3.1 血常規(guī)指標 由表2可以看出，攝入AFB1后，肥育豬血清中RBC、HGB呈上升趨勢，其中高劑量組RBC比對照組提高14.6%（P＜0.05），低、中、高劑量組HGB含量分別比對照組提高14.4%、13.6%、18.7%（P＜0.01）；WBC和 PLT均呈下降趨勢，高劑量組WBC比對照組降低了22.9%（P＜0.05），低、中、高劑量組PLT分別比對照組降低36.5%、45.0%、51.2%（P ＜ 0.01）。

2.3.2 血清和肝臟生化指標 從表3可以得知，日糧中添加AFB1顯著提高了肥育豬血清中AKP、GOT、GPT 活性，與對照組相比，低、中、高劑量組AKP活性分別提高33.8%、65.5%、93.2%（P＜0.01），GOT 活 性 分 別 提 高 24.1% （P ＜ 0.05）、137.7%、195.5%（P ＜ 0.01），GPT 活性分別提高25.8%（P ＜ 0.05）、62.2%、131.0%（P ＜ 0.01）。 而肥育豬肝臟中AKP、GOT、GPT活性隨AFB1添加量增加呈下降趨勢，與對照組相比，低、中、高劑量組AKP 活性分別降低 19.1%（P ＜ 0.05）、42.2%、43.9%（P ＜ 0.01），GOT活性分別降低 16.9%、23.1%、25.1%（P ＜ 0.01），中、高劑量組GPT活性分別比對照組降低5.0%、6.8%（P＜0.05）。

3 討論

3.1 AFB1對肥育豬生長性能的影響 AFB1屬于倉儲性毒素，農(nóng)作物在生長期的時候就有可能附著霉菌，條件適合的時候霉菌生長繁殖，釋放毒素。我國飼料衛(wèi)生標準（2017）規(guī)定肥育豬飼料中AFB1含量不得超過20 μg/kg，在實際生產(chǎn)中，AFB1高劑量的急性中毒比較罕見，大多數(shù)是低劑量的慢性中毒。然而大多數(shù)AFB1超標不嚴重的飼料，僅憑肉眼無法判斷是否已經(jīng)發(fā)生霉變，肥育豬也有誤食毒素超標飼料的可能。由本次試驗的結(jié)果可以看出，飼喂不同劑量AFB128 d后，高劑量組豬只的平均日增重、平均日采食量以及料重比和對照組相比都有明顯差異（P＜0.05），這表明長期飼喂 200 μg/kg AFB1影響了肥育豬的生長速度，飼料轉(zhuǎn)化率降低，這和前人的試驗結(jié)果一致 （姚麗欣等，2011；Rustemeyer等，2010；史瑩華等，2007）。而低劑量組和中劑量組的平均日增重和平均日采食量雖然也有所下降，但和對照組相比差異不顯著，這可能和飼喂劑量有關(guān)，也有可能是肥育豬的耐受性比較高。

本次試驗中，高劑量組肝臟中AFB1檢出量為 （0.40±0.05）μg/kg。其余各組及肌肉中均未檢出，這可能是因為肝臟是AFB1作用于動物體的靶器官，動物攝入的AFB1在肝臟中代謝，當AFB1量超過了肝臟的代謝能力，就會在肝臟中聚集并對肝臟功能造成一定影響。

3.2 AFB1對肥育豬血液及肝臟功能的影響血液中的白細胞在機體免疫等方面起著重要的作用，血小板的主要功能是凝血和止血，以及保護血管外皮，參與內(nèi)皮修復(fù)，防止動脈粥樣硬化。本試驗結(jié)果表明，飼喂AFB128 d之后，試驗豬血清中WBC和PLT有下降趨勢，且中、高劑量組與對照組相比差異顯著（P＜0.05），這表明肥育豬的免疫力、機體的凝血功能等都受到一定程度的影響，同時試驗豬血清中RBC和HGB含量隨AFB1的添加量增加而呈上升趨勢，表明試驗組豬血氧飽和度減低，機體缺氧，也可能是因為肝臟和腎臟受到損傷造成紅細胞生成素非代償性增加。

肝臟是AFB1的靶器官，畜禽攝入AFB1后，毒素在肝臟中聚集，會影響肝臟的正常功能，GOT、GPT和AKP主要存在于肝臟細胞中，當肝臟功能受到損害時，會導(dǎo)致肝臟細胞破裂，胞內(nèi)酶大量釋放入血液中，血清中GOT、GPT和AKP活性明顯增高，所以，血清中GOT、GPT和AKP等活性的異常升高可以反映肝臟功能受損。史瑩華等 （2007）在生長豬的日糧中添加0.1mg/kg AFB1后發(fā)現(xiàn)，血清中 GOT、GPT和AKP活性顯著上升，而肝臟中GOT、GPT和AKP活性顯著降低。李思遠等（2015）也發(fā)現(xiàn)，飼料中黃曲霉毒素超標，會導(dǎo)致試驗豬不同程度的中毒，血清中GOT、GPT和AKP活性極顯著升高，且酶活性隨中毒程度的加深而上升。本試驗中，試驗組血清中GOT、GPT和AKP活性升高，肝臟中GOT、GPT和AKP活性降低，表明長期采食含有AFB1的飼料，誘發(fā)了試驗豬慢性黃曲霉毒素中毒，導(dǎo)致肝臟受到損傷，肝臟正常生理功能受到影響，且傷害隨中毒劑量加深而增加。

表3 AFB1對肥育豬血清和肝臟AKP、GOT、GPT活性的影響