舒柯 申璀 廖敏

【摘要】目的：建立以綠原酸為內(nèi)參物，測(cè)定降脂寧顆粒中君藥山楂所含的3個(gè)有機(jī)酸類成分（新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸）含量的一測(cè)多評(píng)（QAMS）方法。方法：采用ThermoUltimate3000液相色譜儀，以WatersX-bridgeC18色譜柱，流動(dòng)相乙腈-1%磷酸溶液梯度洗脫，檢測(cè)波長326nm，體積流量1.0mL/min，柱溫30℃進(jìn)行測(cè)定。以綠原酸作為內(nèi)參物，建立制劑中其他2種指標(biāo)性成分的相對(duì)校正因子，從而計(jì)算各待測(cè)成分的量，并與外標(biāo)法的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行比較，對(duì)該方法進(jìn)行可行性驗(yàn)證。結(jié)果：在各待測(cè)成分的線性范圍內(nèi)，降脂寧顆粒中的綠原酸與新綠原酸、隱綠原酸2種有效成分的校正因子重現(xiàn)性良好，分別為1.07、0.99;采用一測(cè)多評(píng)法測(cè)定有機(jī)酸類成分含量與外標(biāo)法的含量測(cè)定結(jié)果無顯著性差異。結(jié)論：以綠原酸為內(nèi)參物，建立的一測(cè)多評(píng)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于降脂寧顆粒多指標(biāo)成分的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】一測(cè)多評(píng);降脂寧顆粒;相對(duì)校正因子;新綠原酸;綠原酸;隱綠原酸

【中圖分類號(hào)】R284【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A【文章編號(hào)】1007-8517（2019）8-0049-05

降脂寧顆粒最早收載于吉林省藥品標(biāo)準(zhǔn)（1986年版），原名“血脂寧沖劑”。處方由山楂（去核）、制何首烏、決明子、荷葉4味藥材組成，具有降血脂、軟化血管的作用。從國家食品藥品監(jiān)督管理總局?jǐn)?shù)據(jù)庫中查詢到，目前其執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)共11份，尚未對(duì)方中君藥山楂進(jìn)行含量控制，而山楂質(zhì)量的優(yōu)劣直接影響降脂寧顆粒的藥效。山楂的化學(xué)成分主要包括黃酮及黃酮苷類、有機(jī)酸類、黃烷類及其聚合物等，有機(jī)酸類是山楂健胃消食的有效成分[1-7]。研究選取山楂中的有機(jī)酸類成分新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸作為指標(biāo)性成分進(jìn)行含量測(cè)定。

復(fù)方中藥制劑中藥效的發(fā)揮是多組分共同作用的結(jié)果，其成分具有多樣性、復(fù)雜性特點(diǎn)。因此，中藥制劑較單味藥材更需要強(qiáng)調(diào)其多成分、多靶點(diǎn)特征。為了更好的控制降脂寧顆粒中山楂的含量，實(shí)驗(yàn)采用多指標(biāo)質(zhì)量控制的“一測(cè)多評(píng)”方法首次對(duì)降脂寧顆粒山楂含量進(jìn)行全面的控制，通過對(duì)一個(gè)對(duì)照品易得成分的測(cè)定，實(shí)現(xiàn)多個(gè)成分的同步監(jiān)控，本文以綠原酸為內(nèi)參物，采用高效液相色譜法測(cè)3個(gè)有機(jī)酸類成分含量，改善目前中檢院尚無新綠原酸、隱綠原酸等對(duì)照品供應(yīng)情況，尤其是完善了現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無君藥山楂含量控制問題[8-15]。

1儀器與材料

1.1儀器Ultimate3000液相色譜儀及配套工作站（PDA檢測(cè)器，賽默飛世爾科技有限公司）;色譜柱：依利特ODS2C18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;AgilentZORBAXSBC18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;WatersX-bridgeC18，（4.6mm×250mm，5.0μm）;百萬分之一電子天平（梅特勒-托利多儀器有限公司）;超聲波清洗儀（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2材料新綠原酸（批號(hào)：MUST-15011413，成都曼斯特生物科技有限公司，含量：93.37%）、綠原酸（批號(hào)：110753-201415，中國食品藥品檢定研究院，含量：96.2%）、隱綠原酸（批號(hào)：MUST-15011413，成都曼斯特生物科技有限公司，含量：99.07%）;降脂寧顆粒（生產(chǎn)企業(yè)：A公司，批號(hào)：a-1，a-2，a-3，a-4，a-5，a-6，a-7，a-8，a-9，a-10）。色譜乙腈（美國TEDIA，LOT17080656）、甲醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，10014118），超純水。

2方法與結(jié)果

2.1色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈為流動(dòng)相A，0.1%磷酸為流動(dòng)相B，按下表1規(guī)定進(jìn)行梯度洗脫;流速為1.0mL/min;新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸檢測(cè)波長為326nm;理論塔板數(shù)按綠原酸峰計(jì)算應(yīng)不低于10000。圖譜見圖1。

2.2混合對(duì)照品溶液的制備稱取新綠原酸、綠原酸、隱綠原酸對(duì)照品適量，置量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，制成每1mL分別含35μg、45μg、34μg溶液，搖勻，作為混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。精密量上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，置10mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品混合溶液。

2.3供試品溶液的制備取裝量差異項(xiàng)下的本品，混勻，取適量，研細(xì)，取約3g，精密稱定，置具塞錐瓶中，精密加入50%甲醇100mL，稱定重量，超聲（功率250w，頻率100kHz）處理45min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4陰性樣品的制備取不含山楂藥材的樣品，按照降脂寧顆粒配方（刪除山楂藥材），模擬工藝制備陰性樣品，照供試品溶液制備項(xiàng)下方法制得陰性樣品溶液。

2.5方法考察

2.5.1線性關(guān)系考察精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，進(jìn)樣量分別為2、3、5、10、15μL分別注入液相色譜儀，以峰面積A對(duì)質(zhì)量數(shù)μg進(jìn)行線性回歸計(jì)算，得到綠原酸的線性回歸方程為：y=32060x+69.71，r=0.9996，線性范圍0.0090μg～0.0672μg;隱綠原酸線性回歸方程為：y=2335x+94.32，r=0.9993，線性范圍0.0066μg～0.03867μg;新綠原酸線性回歸方程為：y=3455x+45.28，r=0.9991，線性范圍0.0077～0.0525μg;結(jié)果表明3種成分線性范圍內(nèi)關(guān)系良好。

2.5.2精密度試驗(yàn)精密量取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液的制備項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄色譜圖，其RSD值分別為新綠原酸1.7%、綠原酸0.6%、隱綠原酸1.5%，表明儀器精密度良好。

2.5.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一批（批號(hào)：a-1）的樣品，按“2.1”項(xiàng)下含量測(cè)定方法，重復(fù)測(cè)定6次，記錄色譜圖，以綠原酸為S峰，其余2個(gè)成分的實(shí)際保留時(shí)間均在以S峰與相對(duì)保留時(shí)間所計(jì)算的時(shí)間范圍內(nèi)，故可通過校正因子計(jì)算出新綠原酸、隱綠原酸的含量，其RSD值分別為1.6%、1.0%、2.4%，表明方法重復(fù)性良好。結(jié)果見表2。