黃穗翔?羅月葵?魏星?吳秋韻?湯達(dá)承

【摘要】目的 研究不同能量體外沖擊波對慢性非細(xì)菌性前列腺炎（CAP）的作用。方法 選取健康SD大鼠24只，隨機(jī)分成對照組、模型組、低能量密度組（低劑量組）、中能量密度組（中劑量組），每組各6只，另取10只SD大鼠制備前列腺蛋白乳化混懸液，予模型組、低劑量組、中劑量組多點(diǎn)注射大鼠前列腺蛋白乳化混懸液以誘導(dǎo)CAP動物模型，45 d造模成功后，低劑量組及中劑量組分別給予1.5 bar 10 Hz 1000次或3.5 bar 10 Hz 1000次沖擊波治療，每周1次，連續(xù)4周。然后安樂處死大鼠，迅速取前列腺組織，稱量前列腺濕重，計(jì)算前列腺指數(shù)，檢測前列腺白細(xì)胞數(shù)量和卵磷脂小體密度變化;蘇木素-伊紅（HE）染色觀察腺體、導(dǎo)管區(qū)和間質(zhì)的病理變化;ELISA法檢測血清、前列腺組織中的神經(jīng)生長因子（NGF）、IL-1β和TNF-α蛋白表達(dá)，免疫組織化學(xué)染色（免疫組化）檢測前列腺組織中IL-6蛋白表達(dá)。結(jié)果 與對照組比較，低、中劑量組及模型組大鼠的前列腺濕重、前列腺指數(shù)增加，白細(xì)胞增多，卵磷脂小體密度下降（P均< 0.05）。與模型組及低劑量組比較，中劑量組前列腺指數(shù)降低、白細(xì)胞減少、卵磷脂小體密度升高（P均< 0.05）。HE染色顯示低劑量組及中劑量組未見前列腺增生，炎癥細(xì)胞聚集相對較少。低劑量組和中劑量組血清和前列腺組織中的炎癥相關(guān)因子NGF、IL-1β和TNF-α水平均低于模型組（P均< 0.05）。中劑量組大鼠血清中TNF-α、NGF和前列腺組織中NGF水平均低于低劑量組（P均< 0.05）。免疫組化顯示，IL-6在對照組中呈陰性表達(dá)、在模型組中呈陽性表達(dá)、在低劑量組和中劑量組中呈弱陽性表達(dá)。結(jié)論 低、中能量密度沖擊波可能通過調(diào)節(jié)前列腺指數(shù)、減少白細(xì)胞、增加卵磷脂小體密度以及降低腺體、導(dǎo)管和間質(zhì)炎癥細(xì)胞聚集，降低血清、前列腺組織中炎癥因子NGF、IL-1β和TNF-α表達(dá)，減輕CAP大鼠模型前列腺炎癥反應(yīng)，中能量密度沖擊波對CAP大鼠模型的治療效果優(yōu)于低能量密度沖擊波。

【關(guān)鍵詞】慢性非細(xì)菌性前列腺炎;體外沖擊波;大鼠;神經(jīng)生長因子;白介素-1β;

腫瘤壞死因子-α

Effect of extracorporeal shock wave with different energy on chronic abacterial prostatitis in rats Huang Suixiang， Luo Yuekui， Wei Xing， Wu Qiuyun， Tang Dacheng. Department of Pain Management， Guangzhou Red Cross Hospital， Guangzhou 510220， China

Corresponding author， Huang Suixiang， E-mail： 13609789599@139.com

【Abstract】Objective To evaluate the effect of extracorporeal shock wave （ESW） with different energy on chronic abacterial prostatitis （CAP）. ?Methods Twenty-four healthy SD rats were randomly divided into the control group （n = 6）， model group （n = 6）， low-dose group （n = 6） and medium-dose group （n = 6）. In the model， low-dose and medium-dose groups， CAP rat models were established by injection of the prostate protein emulsion suspension from another 10 SD rats into the prostate. At 45 d after model establishment， 1000 times of 1.5 bar 10 Hz and 3.5 bar 10 Hz ESW were delivered once weekly for 4 consecutive weeks in the low- and medium-dose groups. All rats were euthanasized， the prostate tissues were rapidly collected and weighted. The prostate index was calculated. The changes of the white cell count and the density of lecithin corpuscle were detected. The pathological changes of the glands， duct area and stroma were observed by H.E. staining. The expression levels of nerve growth factor （NGF）， IL-1β and tumor necrosis factor （TNF）-α protein were quantitatively detected by ELISA. The expression of IL-6 protein was detected by immunohistochemistry. ?Results Compared with those in the control group，wet prostate weight， prostate index and white cell count were significantly increased， whereas the density of lecithin corpuscle was remarkably decreased in the model， low- and medium-dose groups （all P < 0.05）. Compared with those in the model and low-dose groups， the prostate index and white cell count were significantly decreased， whereas the density of lecithin corpuscle was considerably increased in the medium-dose group （all P < 0.05）. H.E. staining demonstrated no prostate hyperplasia and relatively slight inflammatory cell aggregation in the low- and medium-dose groups. The expression levels of NGF， IL-1β and TNF-α in the serum and prostate tissues in the low- and medium-dose groups were significantly down-regulated than those in the model group （all P < 0.05）. The expression levels of TNF-α and NGF in the serum samples and NGF in the prostate tissues in the middle-dose group were significantly lower than those in the low-dose group （all P < 0.05）. Immunohistochemistry showed that IL-6 was negatively expressed in the control group， positively expressed in the model group， and weakly positively expressed in the low- and medium-dose groups. ?Conclusions ESW with low and medium energy and density can mitigate the inflammatory reaction of prostate in CAP rat models by regulating the prostate index， reducing the white blood cells， increasing the density of lecithin corpuscle， decreasing the aggregation of inflammatory cells in glands， ducts and stroma， and down-regulating the expression levels of NGF， IL-1β and TNF-α in the serum and prostate tissues. The therapeutic effect of medium-energy ESW is better than that of low-energy ESW in the CAP rat models.

【Key words】Chronic abacterial prostatitis;Extracorporeal shock wave;Rat;Nerve growth factor;

Interleukin-1β;Tumor necrosis factor-α

慢性非細(xì)菌性前列腺炎（CAP）是50歲以下成年男性常見的泌尿系統(tǒng)疾病，是50歲以上男性的第3位泌尿系統(tǒng)常見病[1]。CAP的病因和發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜，任何單一機(jī)制均不能對其眾多復(fù)雜的臨床表現(xiàn)作出滿意的解釋[2]。目前，臨床上對于CAP仍以藥物治療為主，雖然能在一定程度上改善患者癥狀，但是長期用藥容易增加并發(fā)癥發(fā)生率，影響患者治療耐受性及預(yù)后。沖擊波治療作為一種新型治療手段，具有周期短、頻譜廣等特點(diǎn)，已經(jīng)廣泛用于泌尿系結(jié)石、痙攣性疾病的治療，而近年其在慢性骨盆疼痛綜合征（CPPS）中的治療作用也備受關(guān)注[3]。沖擊波治療在CAP患者中的作用研究較少[4]。本研究采用隨機(jī)對照方式，探討不同能量體外沖擊波對CAP大鼠的前列腺組織及相關(guān)細(xì)胞因子表達(dá)的作用與影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)動物

健康雄性SD大鼠（8周齡，200 g）34只，購于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心，合格證號：SCXK（粵）2013-0034，實(shí)驗(yàn)期間自由飲食（消毒自來水，普通大鼠飼料），自然采光。

二、主要試劑及儀器

主要試劑包括：完全弗氏佐劑（FAC），含0.5% Triton X-100（內(nèi)皮細(xì)胞裂解液）的生理鹽水（自配），Trizol RNA 抽提劑（美國Invitrogen 公司），大鼠IL-1β ELISA試劑盒、大鼠TNF-α ELISA試劑盒、大鼠神經(jīng)生長因子（NGF）ELISA試劑盒（武漢純度生物科技有限公司），即用型兔UItraSensitive SP超敏試劑盒（邁新生物技術(shù)有限公司），IL-6（武漢賽維爾生物科技有限公司）。主要儀器包括：電動勻漿器（上海凈信），實(shí)時(shí)定量PCR擴(kuò)增儀（Roche 公司），沖擊波治療儀（BTL-5000SWT），酶標(biāo)儀（ThermoFisher），漩渦混合器（其林貝爾儀器制造有限公司），純水機(jī)（廈門銳思捷水純化技術(shù)有限公司），冰箱（青島海爾股份有限公司），脫水機(jī)、石蠟包埋機(jī)（武漢俊杰電子有限公司），切片機(jī)（上海萊卡儀器有限公司）。

三、方 法

1. SD大鼠前列腺蛋白乳化混懸液的制備

取10只健康雄性SD大鼠，斷脊處死，局部皮膚消毒，下腹正中切口，用剪刀剪開大鼠腹部皮膚和肌肉，提起膀胱，暴露前列腺及精囊腺，剝離前列腺，剪除多余的脂肪組織，將精囊腺與前列腺分離，剪下的前列腺組織于生理鹽水中洗凈3 ～ 5遍待用。用眼科剪剪碎前列腺組織，分批加入預(yù)先高溫滅菌的0.5% Triton X-100生理鹽水溶液40 ml，用電動勻漿器制成勻漿。燒杯放置在冰塊中，保持低溫。把勻漿充分的前列腺組織用吸管吸入離心管中，天平配平后置入高速離心機(jī)中以4 ℃、12 000轉(zhuǎn)/分離心30 min，用吸管吸去上層脂肪組織，取上清液，放入冷凍管-20℃保存?zhèn)溆?。取余下的上清?.2 ml，等比稀釋后依次放入孔板，在酶標(biāo)儀上讀取光密度（OD）值。然后采用紫外法測定蛋白含量，蛋白含量（mg/ml）=（1.45×OD280-0.74×OD260） ×稀釋倍數(shù)，測定上清液的蛋白含量（所計(jì)算標(biāo)本為稀釋250倍的溶液）。用生理鹽水將紫外法測定蛋白濃度的原液稀釋至40 mg/ml。用FAC按1∶1的比例加入稀釋好的前列腺蛋白液中，將試管放置于冰塊內(nèi)保持低溫，用乳化勻漿機(jī)進(jìn)行乳化，當(dāng)?shù)?滴至水面上長時(shí)間保持圓珠狀而不散開時(shí)即可。

2. 動物分組及CAP模型制備

余24只SD大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、低能量密度組（低劑量組）、中能量密度組（中劑量組），每組6只。除對照組外，其他3組大鼠采用下述方法造模：將實(shí)驗(yàn)大鼠采用水合氯醛麻醉，多點(diǎn)皮下注射大鼠前列腺蛋白乳化混懸液1.0 ml，劑量為15 mg/ml，30 d再注射1次。對照組大鼠在0、30 d皮下多點(diǎn)注射磷酸鹽緩沖液1.0 ml。45 d

后，出現(xiàn)特異性的形態(tài)學(xué)與分子生物學(xué)改變即模型制作成功。本實(shí)驗(yàn)中動物的飼養(yǎng)與處死均符合動物倫理學(xué)要求。

3. 沖擊波治療

造模成功后，對大鼠進(jìn)行水合醛麻醉，將沖擊波的第二焦斑定于大鼠的前列腺組織上，進(jìn)行沖擊波治療。低劑量組予1.5 bar 10 Hz 1000次電擊、中劑量組予3.5 bar 10 Hz 1000次電擊，每周1 次，連續(xù)治療4周。

4. 大鼠前列腺指數(shù)檢測

沖擊波治療4周后，稱量大鼠體質(zhì)量，尾靜脈取血，然后處死，迅速取出前列腺組織，并稱量大鼠前列腺濕重，計(jì)算對照組、模型組、低劑量組、中劑量組的大鼠前列腺指數(shù)，前列腺指數(shù)=前列腺濕重（mg）/大鼠體質(zhì)量（g）。

5. 大鼠白細(xì)胞數(shù)量和卵磷脂小體密度變化

取各組大鼠前列腺組織，收集前列腺按摩液1滴于顯微鏡下觀察白細(xì)胞數(shù)目及卵磷脂小體密度的變化，觀察并記錄卵磷脂小體密度，評分標(biāo)準(zhǔn)為：滿視野4分，3/4 視野3分，1/2視野2分，1/4視野1分。

6. 大鼠前列腺組織的病理學(xué)檢查

采用蘇木素-伊紅（HE）染色：將大鼠前列腺組織經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、3 μm厚切片。水浴、烤片，37 ℃過夜靜置。依次進(jìn)行脫蠟、水化、HE染色和中性樹膠封片，顯微鏡下觀察腺體、導(dǎo)管區(qū)和間質(zhì)的變化，并采集圖片。每張切片分別在200倍及400 倍光鏡下拍10個視野。

7. 血清、組織勻漿上清液中NGF、IL-1β、TNF-α水平的檢測

治療 4 周后，大鼠尾靜脈取血，而后取前列腺組織，眼科剪剪碎，倒入勻漿器中，移液管加入生理鹽水1 ml，進(jìn)行勻漿（勻漿器下端浸入干冰中）。隨后將組織勻漿在低溫下以3000轉(zhuǎn)/分離心10 min。采用雙抗體夾心ELISA法檢測各組大鼠血清、組織勻漿上清液中NGF、IL-1β、TNF-α水平，操作嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行。

8. 前列腺組織中IL-6蛋白表達(dá)強(qiáng)度檢測

采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)（SP）染色：將大鼠前列腺組織經(jīng)梯度乙醇脫水、二甲苯透明、石蠟包埋、3 μm厚切片，水浴、抗原修復(fù)，切片上劃蠟滴加非免疫性動物血清，室溫封閉 30 min。最后切片經(jīng)一抗（IL-6）處理，4 ℃過夜，磷酸鹽吐溫緩沖液洗滌5次，每次3 min，以生物素標(biāo)記的第二抗體室溫下孵育40 min。SP溶液室溫孵育15 min，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）-過氧化氫顯色。每張切片分別在100及400 倍光鏡下拍10個視野。IL-6陽性表達(dá)為細(xì)胞和（或）胞漿中見棕黃色的顆粒，分別對鏡下陽性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度進(jìn)行評分，陽性細(xì)胞比例0% ～ 5%為0分、5% ～ 25%為1分、26% ～ 50%為2分、51% ～ 75%為3分、75% ～ 100%為4分，染色強(qiáng)度無著色為0分、淡黃色為1分、棕黃色為2分、棕褐色為3分。陽性細(xì)胞比例和染色強(qiáng)度計(jì)分乘積為陽性等級，0分為陰性、1 ～ 4分為弱陽性、5 ～ 8分為陽性、9 ～ 12分為強(qiáng)陽性。

四、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

使用SPSS 22.0 分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料以表示，多組比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)。P < 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié)果

一、4組大鼠體質(zhì)量、前列腺濕重及前列腺指數(shù)的比較

4組大鼠的體質(zhì)量相近（P > 0.05）。與對照組比較，模型組、低劑量組和中劑量組前列腺濕重及前列腺指數(shù)均較高（P均< 0.05）。與模型組及低劑量組比較，中劑量組前列腺指數(shù)較低（P均< 0.05），見表1。

表1 ? ? ? ? 4組大鼠體質(zhì)量、前列腺濕重和前列腺

指數(shù)比較（）

組 別 n 體質(zhì)量

（g） 前列腺濕重

（mg） 前列腺指數(shù)（mg/g）

對照組 6 382±19 1133±65 2.97±0.08

模型組 6 394±16 1369±48a 3.48±0.09a

低劑量組 6 395±27 1327±53a 3.36±0.10a

中劑量組 6 409±29 1274±89a 3.12±0.11abc

F值 1.324 14.706 33.403

P值 0.295 < 0.001 < 0.001

注：與對照組比較，aP < 0.05;與模型組比較，bP < 0.05;與低劑量組比較，cP < 0.05

二、4組大鼠前列腺液中白細(xì)胞數(shù)量和卵磷脂小體密度的變化

與對照組相比，模型組、低劑量組和中劑量組前列腺液中白細(xì)胞增多（P均< 0.05）。與模型組對比，中劑量組前列腺液中白細(xì)胞減少（P < 0.05）。與低劑量組相比，中劑量組前列腺液中白細(xì)胞減少（P < 0.05）。與對照組相比，模型組的卵磷脂小體密度下降（P < 0.05），低劑量組、中劑量組的卵磷脂小體密度有所升高（P均< 0.05），中劑量組的卵磷脂小體密度高于低劑量組（P < 0.05），見表2。

表2 ? ? ? 4組大鼠前列腺液白細(xì)胞及卵磷脂小體密度

比較（）

組 別 n 白細(xì)胞（×106/L） 卵磷脂小體密度（分）

對照組 6 6.1±0.1 0.23±0.03

模型組 6 15.5±0.9a 0.10±0.04a

低劑量組 6 14.7±0.6a 0.58±0.10ab

中劑量組 6 12.0±0.7abc 0.93±0.12abc

F值 255.945 129.704

P值 < 0.001 < 0.001

注：與對照組比較，aP < 0.05;與模型組比較，bP < 0.05;與低劑量組比較，cP < 0.05

三、治療后4組大鼠前列腺組織病理形態(tài)分析

取各組大鼠前列腺組織切片行HE染色，光鏡下觀察：對照組前列腺腺體分布疏散，管腔可見分泌物;模型組腺上皮細(xì)胞變性，前列腺增生，炎癥細(xì)胞聚集;低劑量組間質(zhì)稀疏，炎癥細(xì)胞聚集;中劑量組管腔內(nèi)可見炎癥細(xì)胞聚集。與模型組相比，低劑量及中劑量組未見前列腺增生，炎癥細(xì)胞聚集相對較少，見圖1。

四、4組大鼠血清和前列腺組織中NGF、IL-1β和TNF-α水平比較

1. 4組大鼠血清NGF、IL-1β和TNF-α水平比較

與對照組相比，模型組大鼠血清中NGF、IL-1β和TNF-α水平均升高（P均< 0.05），低劑量組大鼠血清中NGF、TNF-α水平均升高（P均< 0.05），中劑量組大鼠血清中NGF、IL-1β和TNF-α水平與對照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P均> 0.05）。與模型組比較，低劑量組、中劑量組大鼠血清中NGF、IL-1β和TNF-α水平均降低（P均< 0.05）。與低劑量組相比，中劑量組大鼠血清中NGF、TNF-α水平均降低（P均< 0.05），見表3。

表3 ? ? ? ?4組大鼠血清NGF、IL-1β和TNF-α

水平比較（） ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ng/L

組 別 n NGF IL-1β TNF-α

對照組 6 226±39 22.3±5.9 189±19

模型組 6 382±33a 38.1±1.8a 323±17a

低劑量組 6 297±30ab 27.4±1.7b 248±26ab

中劑量組 6 258±31b 26.3±5.4b 217±24bc

F值 24.129 15.687 41.743

P值 < 0.001 < 0.001 < 0.001

注：與對照組比較，aP < 0.05;與模型組比較，bP < 0.05;與低劑量組比較，cP < 0.05

2. 4組大鼠前列腺組織中NGF、IL-1β和TNF-α水平比較

與對照組相比，模型組大鼠前列腺組織中NGF、IL-1β和TNF-α水平均升高（P均< 0.05），低劑量組大鼠前列腺組織中NGF、IL-1β水平均升高（P均< 0.05），中劑量組大鼠前列腺組織中僅NGF水平升高（P < 0.05）。與模型組相比，低劑量組與中劑量組大鼠前列腺組織中NGF、IL-1β和TNF-α水平均下降（P均< 0.05）。中劑量組大鼠前列腺組織中NGF水平低于低劑量組（P < 0.05），見表4。

表4 ? ?4組大鼠前列腺組織中NGF、IL-1β和TNF-α

水平比較（） ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?ng/L

組 別 n NGF IL-1β TNF-α

對照組 6 355±39 27.6±6.0 308±19

模型組 6 494±33a 43.3±1.8a 447±17a

低劑量組 6 422±30ab 34.9±1.7ab 359±26b

中劑量組 6 387±31abc 31.5±5.4b 332±24b

F值 18.706 15.901 45.993

P值 < 0.001 < 0.001 < 0.001

注：與對照組比較，aP < 0.05;與模型組比較，bP < 0.05;與低劑量組比較，cP < 0.05

五、4組大鼠前列腺組織中IL-6的表達(dá)情況

IL-6在前列腺組織胞漿、胞外中均有表達(dá)，在對照組中呈陰性表達(dá)，在模型組中呈陽性表達(dá)，在低劑量組和中劑量組中呈弱陽性表達(dá)，見圖2。

討論

前列腺炎是一種異質(zhì)性綜合征，約占到泌尿外科門診量的25%，主要表現(xiàn)為盆腔疼痛和下尿路癥狀，嚴(yán)重影響男性的生活質(zhì)量。1995年，前列腺炎被美國國立衛(wèi)生研究院（NIH）統(tǒng)一分為4類：急性細(xì)菌性前列腺炎、慢性細(xì)菌性前列腺炎、CAP/CPPS、無癥狀的炎癥性前列腺炎[5]。CAP病因復(fù)雜，現(xiàn)有藥物療效欠佳，因此尋找有效的治療方法對臨床醫(yī)師仍然是一項(xiàng)挑戰(zhàn)[6]。

隨著臨床與實(shí)驗(yàn)研究逐步深入，人們的焦點(diǎn)更多集中在免疫因素對CAP的作用上[7]。細(xì)胞因子的變化是免疫因素參與前列腺炎癥調(diào)節(jié)機(jī)制中最重要的檢測指標(biāo)，其主要涉及調(diào)節(jié)性細(xì)胞因子、抗炎癥細(xì)胞因子和促炎癥細(xì)胞因子[8-9]。IL-1β、TNF-α屬于促炎癥細(xì)胞因子，是炎癥反應(yīng)中最早出現(xiàn)的細(xì)胞因子，通過增加趨化因子（IL-8、ENA-78）、環(huán)氧酶-2、誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（iNOS）和細(xì)胞黏附因子的表達(dá)來促進(jìn)全身炎癥反應(yīng)發(fā)展。鄒如政等[10]報(bào)道，CAP模型小鼠的IL-1β、TNF-α水平高于正常對照組。NGF作為一種蛋白，可調(diào)節(jié)周圍和中樞神經(jīng)元的生長發(fā)育，維持神經(jīng)元的存活。有研究表明，在自身免疫性前列腺炎小鼠模型中，NGF的表達(dá)與疼痛的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[11]。

IL-6主要由單核巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生，能誘導(dǎo)激活T、B淋巴細(xì)胞的分化，促進(jìn)中性粒細(xì)胞的溶酶體活性和吞噬功能。?utulovi?等[12]報(bào)道，CAP/CPPS患者前列腺按摩液中的IL-6水平高于對照組，且增加癲癇發(fā)作的易感性，也與疼痛的緩解相關(guān)。白細(xì)胞數(shù)及卵磷脂小體密度是前列腺炎的共同檢測指標(biāo)。其中前列腺液中的白細(xì)胞數(shù)目反映了腺體上皮受損的程度，而卵磷脂小體作為前列腺液的成分之一，能起到保護(hù)精子的作用。臨床上，白細(xì)胞增多常與卵磷脂小體減少相對應(yīng)。

本研究采用SD大鼠前列腺蛋白提純液輔以免疫佐劑注射誘導(dǎo)自身免疫性前列腺炎，即CAP模型，模型制備方法已被廣泛認(rèn)可[13]。本研究顯示，模型組大鼠的前列腺濕重及前列腺指數(shù)均高于對照組，同時(shí)白細(xì)胞多于對照組、卵磷脂小體密度低于對照組。進(jìn)一步通過HE染色觀察各組小鼠腺體、導(dǎo)管區(qū)和間質(zhì)的病理變化，結(jié)果顯示對照組前列腺腺體分布疏散，管腔可見分泌物，而模型組腺上皮細(xì)胞變性，前列腺增生，炎細(xì)胞聚集。血清和前列腺組織中IL-1β、TNF-α和NGF的表達(dá)中，模型組小鼠各細(xì)胞因子的水平均高于對照組，免疫組化也顯示模型組IL-6蛋白表達(dá)為陽性，而對照組IL-6蛋白表達(dá)水平為陰性。以上這一系列檢測均從不同角度說明誘導(dǎo)后的模型組出現(xiàn)不同程度的組織炎癥指征，即自身免疫因素參與了CAP的發(fā)病過程，在這個過程中，前列腺體質(zhì)量及指數(shù)受影響，細(xì)胞因子間的動態(tài)平衡受到破壞，HE檢測腺體局部也出現(xiàn)炎癥病變，充分表明CAP模型建模成功。

本研究的主要目的是研究不同能量的體外沖擊波對CAP的作用。體外沖擊波法作為一種較保守的治療方法，其主要通過能量轉(zhuǎn)換和傳遞，造成不同密度的組織之間產(chǎn)生機(jī)械應(yīng)力效應(yīng)、空化效應(yīng)及神經(jīng)阻滯效應(yīng);通過機(jī)械力效應(yīng)加速病灶血管循環(huán)，促進(jìn)組織再生;而通過神經(jīng)鎮(zhèn)痛效應(yīng)可引起細(xì)胞周圍自由基的改變，釋放抑制疼痛的物質(zhì)一氧化氮，從而緩解疼痛癥狀。近年體外沖擊波逐漸轉(zhuǎn)向慢性疼痛治療領(lǐng)域，Mattheolabakis等[14]通過采用沖擊波治療，下調(diào)降鈣素基因作用的坐骨神經(jīng)元受體，從而抑制痛覺的產(chǎn)生，使大鼠步行距離明顯改善。同時(shí)通過沖擊波作用，也能調(diào)節(jié)炎癥細(xì)胞的變化。Sukubo等[15]用低能量的沖擊波干預(yù)巨噬細(xì)胞可抑制促炎癥細(xì)胞因子的產(chǎn)生，同時(shí)促進(jìn)抗炎物質(zhì)的生成。近年來，低能量體外沖擊波在ⅢB型CAP患者中得到應(yīng)用，且效果理想。本研究探討了2種不同能量（分別為低劑量、高劑量）沖擊波對CAP大鼠的療效。結(jié)果顯示，低劑量組、中劑量組CAP大鼠體質(zhì)量及前列腺濕重下降、白細(xì)胞減少、卵磷脂小體密度升高，中劑量組的前列腺指數(shù)有所下降，HE顯示模型組腺上皮細(xì)胞變性、前列腺增生、炎癥細(xì)胞聚集，低劑量組間質(zhì)稀疏、炎細(xì)胞聚集，與模型組差異不大，中劑量組管腔內(nèi)雖可見炎癥細(xì)胞聚集，但相比模型組，未見前列腺增生，這在一定程度上說明炎癥細(xì)胞聚集相對較少。另外，低劑量組、中劑量組血清和前列腺組織中IL-1β、TNF-α及NGF水平均低于模型組，中劑量組降低更明顯。進(jìn)一步免疫組化檢測顯示低劑量組和中劑量組IL-6蛋白減弱，但不明顯，這一系列結(jié)果表明通過沖擊波可減輕炎癥反應(yīng)，可能是其抑制炎癥細(xì)胞的遷移、黏附，阻止其穿越血管內(nèi)皮細(xì)胞，減輕炎癥細(xì)胞對前列腺組織的浸潤，最終減少炎癥介質(zhì)在前列腺組織的釋放，減輕前列腺組織的炎癥免疫損傷。本研究中，低劑量組和中劑量組與對照組相比，各指征仍部分存在差異，說明所用體外沖擊波的強(qiáng)度在后續(xù)試驗(yàn)研究中還可進(jìn)一步進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，以期達(dá)到更好的治療效果。

綜上所述，低能量密度及中能量密度沖擊波可減輕CAP大鼠前列腺組織的炎癥反應(yīng)，且中能量密度沖擊波效果更好，這為將來CAP的靶點(diǎn)治療提供了一定的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。有關(guān)沖擊波對CAP的具體作用機(jī)制有待日后研究論證。

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（收稿日期：2019-09-05）

（本文編輯：林燕薇）