田 敏，李 麗，毛萬成，田曉靜，楊 韜

(思南縣人民醫(yī)院，貴州思南 565100)

1材料與方法

1.1 研究對象 選取2018年6月～2019年1月來自銅仁地區(qū)(思南、德江、印江、石阡、沿河、江口、松桃、萬山、銅仁等縣市)在思南縣人民醫(yī)院門診及住院部就診的400例疑似珠蛋白生成障礙性貧血患者，其中男性38例，女性362例，年齡范圍為8月～40歲。入選標(biāo)準(zhǔn)：通過血細(xì)胞檢測，平均紅細(xì)胞容積(MCV)<80 fl，平均紅細(xì)胞血紅蛋白(MCH)<27 pg為疑似珠蛋白生成障礙性貧血患者[2-3]。

1.2 儀器與試劑

1.2.1 試劑：珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測試劑盒(PCR+導(dǎo)流雜交法)購置潮州凱普生物化學(xué)有限公司。

1.2.2 儀器：Bioer Life Express PCR擴(kuò)增儀TC-96/G/H(b)(杭州博日科技有限公司)，醫(yī)用核酸分子雜交儀HB-2012A(潮州凱普生物化學(xué)有限公司)。

1.3 方法

1.3.1 樣本采集和處理：乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝全血，DNA提取及樣本保存嚴(yán)格按試劑說明書要求執(zhí)行。

1.3.2 檢測內(nèi)容：檢測人抗凝靜脈血樣本中3種缺失類型α-珠蛋白生成障礙性貧血：東南亞型基因缺失(--SEA)，3.7基因缺失(-α3.7)，4.2基因缺失(-α4.2)；3種突變類型α珠蛋白生成障礙性貧血：CS突變(αCS)，QS突變(αQS)，Ws突變(αWS)及19種β珠蛋白生成障礙性貧血突變類型：41-42M，17M，654M，71-72M，-28M，EM，43M，14-15M，30M，-30M，-32M，-29M，CapM(A-C-AAAC)，31M，IVSI-5M，IntM，IVSI-IM，(G-T，G-A)，27-28M。

1.3.3 檢測方法：α-和β-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測采取PCR+導(dǎo)流雜交法，具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

馮先生以王陽明為《小史》作結(jié)。他的解釋是，清代學(xué)問風(fēng)尚轉(zhuǎn)為漢學(xué)，漢學(xué)家鄙薄宋學(xué)，以為雜佛老而言儒家經(jīng)學(xué)。清代人也有講理學(xué)、心學(xué)的，但無有顯著的新見，更無成體系的大家。所討論的問題，不出宋明理學(xué)家；所根據(jù)的經(jīng)典，也不出四書，故略去不講。

1.3.4 結(jié)果判定：觀察測試膜條上出現(xiàn)的藍(lán)紫色斑點(diǎn)，與膜條陰陽性對照進(jìn)行綜合分析判斷，結(jié)果判讀詳見試劑盒說明書。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS16.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，采用χ2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 總體情況 在400例疑為珠蛋白生成障礙性貧血患者中，經(jīng)基因檢測共確診188例，檢出率為47%。其中，α-珠蛋白生成障礙性貧血84例，占21%，β-珠蛋白生成障礙性貧血100例，占25%，兩組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=1.81，P=0179)。此外，α-和β-復(fù)合突變4例(αβ-珠蛋白生成障礙性貧血)，占1%。

2.2 α-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型與構(gòu)成比 84例α-珠蛋白生成障礙性貧血基因均以缺失型為主，并以--SEA/αα(54.7%，46/84)和-α3.7/αα(38.2%，32/84)居多，其次是αCSα/αα(4.7%，4/84)和--SEA/-α3.7(2.4%，2/84)。

2.3 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型與構(gòu)成比 見表1。β-珠蛋白生成障礙性貧血中，以基因型βCD17/βN(44%)和βCD41-42/βN(36%)為主。

表1 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因類型與構(gòu)成比(n=100)

2.4 不同民族珠蛋白生成障礙性貧血檢出情況 見表2。不同民族珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，漢族90例，占53.7%(90/168)；土家族54例，占45.8%(54/118)，苗族36例，占42.9%(36/84)，其他民族8例，占26.7%(8/30)。經(jīng)分析，α-珠蛋白生成障礙性貧血檢出率在各民族間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=3.1，P=0.37)，β-珠蛋白生成障礙性貧血檢出率在各民族間有差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.5，P=0.036)。

表2 不同民族受檢者珠蛋白生成障礙性貧血檢出率(%)

漢族β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，以βCD17/βN基因型最多(54.9%)；土家族與苗族β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，均以βCD41-42/βN基因型最多(53.8%和33.3%)，見表3。

表3 不同民族β-珠蛋白生成障礙性貧血基因型構(gòu)成比(%)

3討論珠蛋白生成障礙性貧血臨床上以a-珠蛋白生成障礙性貧血和β-珠蛋白生成障礙性貧血最常見，是全球分布最廣、累積人群最多的單基因病[4]。本研究對400例疑似珠蛋白生成障礙性貧血樣本進(jìn)行分析，初步了解了貴州省銅仁地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血基因分布情況。

α-珠蛋白生成障礙性貧血的基因缺陷主要為α-珠蛋白基因缺失或突變，目前全球已發(fā)現(xiàn)超過20種基因缺失和68種點(diǎn)突變類型。有資料顯示，α-珠蛋白基因在不同地區(qū)有著不同的基因突變譜，具有高度的異質(zhì)性[5]。本研究涉及貴州銅仁地區(qū)84例α-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，僅檢出4種基因型，與以往研究結(jié)果相比，基因型別較少，可能與樣本數(shù)量較少有關(guān)。其中，--SEA/αα基因型最多(54.7%)，其次是-α3.7/αα(38.2%)。與朱曉西[6]報(bào)道的貴州地區(qū)α-珠蛋白生成障礙性貧血基因型在構(gòu)成比上存在差異，可能是研究所涉及人群地域差異性所致，本文只針對貴州銅仁地區(qū)人群。

對于β-珠蛋白基因突變類型，至今發(fā)現(xiàn)了200多種，在我國報(bào)道的已超過48種[7]。本研究100例β-珠蛋白生成障礙性貧血攜帶者中，檢出6種基因型，以βCD17/βN基因型最多，占44%，與劉興梅等[8]研究報(bào)道一致。β-珠蛋白基因突變譜也存在著地域差異性。有報(bào)道顯示，廣西[9]、廣東[10]等地區(qū)以CD41-42為主，福建[11]以IVS-Ⅱ-654為主，云南[12]以CD26為主等。貴州是一個多民族地區(qū)，遺傳背景多樣化，本研究中涉及到漢族、土家族、苗族及其他民族地區(qū)，對β-珠蛋白生成障礙性貧血在不同民族間的檢出率進(jìn)行比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=8.5，P=0.036)。其基因型在漢族人群以βCD17/βN為主(54.9%)，土家族與苗族人群均以βCD41-42/βN為主(分別為53.8%和33.3%)，這表明貴州省β-珠蛋白生成障礙性貧血人群中的基因型分布在當(dāng)?shù)夭煌褡逯杏幸欢ǖ牟町愋浴?/p>

總之，通過研究初步明確了銅仁地區(qū)珠蛋白生成障礙性貧血基因類型及在不同民族間的分布特征，對婚前遺傳咨詢和出生缺陷干預(yù)具有重要的指導(dǎo)意義。