鐘 建胡 芳董驥馳程蛟文崔竣杰胡開(kāi)林*

（1華南農(nóng)業(yè)大學(xué)園藝學(xué)院，廣東廣州 510642；2佛山科學(xué)技術(shù)學(xué)院食品科學(xué)與工程學(xué)院，廣東佛山

528000）

卷須是瓜類(lèi)蔬菜及其他攀援類(lèi)植物具有的一種線狀結(jié)構(gòu)的特殊器官，通過(guò)螺旋狀生長(zhǎng)纏繞到其他物體上，為植株提供攀援的能力（Sousa-Baena et al.，2018），從而使攀援植物能生長(zhǎng)到更廣泛的地方，以獲得更多的生存空間，提高光合作用效率，促進(jìn)傳花授粉等（Hofer et al.，2009）。

植物卷須的研究可以追溯到達(dá)爾文時(shí)代。達(dá)爾文認(rèn)為，植物卷須可能來(lái)源于各種各樣的器官結(jié)構(gòu)（Darwin，1875）。例如在豌豆中，卷須是由葉片進(jìn)化而來(lái)的，它是葉片的形態(tài)同源物，TI基因是控制豌豆生成卷須的關(guān)鍵因素（Hofer et al.，2009）；在葡萄中，卷須一般有2～3個(gè)分叉，它作為花序的形態(tài)同源物，是潛在的生殖器官，同時(shí)它也是為葡萄植株攀爬提供支持的營(yíng)養(yǎng)附屬器（張彥蘋(píng) 等，2013）；黃瓜卷須的同源器官是側(cè)枝，調(diào)控黃瓜卷須發(fā)育的關(guān)鍵基因TEN編碼黃瓜中保守的TCP轉(zhuǎn)錄因子，它只在卷須中特異表達(dá)（Wang et al.，2015）。

瓜類(lèi)蔬菜卷須的初始發(fā)生是植株從幼苗期轉(zhuǎn)入抽蔓期的重要標(biāo)志，研究其初始發(fā)生節(jié)位的遺傳規(guī)律對(duì)于瓜類(lèi)蔬菜高效栽培管理以及熟性育種具有重要參考意義。關(guān)于葫蘆科蔬菜作物卷須是否分叉，前人認(rèn)為，黃瓜（Cucumis sativus L.）、南瓜〔Cucurbita moschata（Duch. ex Lam.）Duch. ex Poiret〕、絲瓜〔Luffa cylindrica（L.）Roem.〕和紅瓜〔Coccinia grandis（L.）Voigt〕是分叉的，馬交兒〔Zehneria japonica（Thunberg）H. Y. Liu〕是不分叉的（Amonwu & Okoli，2013）?？喙希∕omordica charantia L.）屬于葫蘆科苦瓜屬攀援性草本植物，起源于非洲熱帶地區(qū)（Schaefer & Renner，2010），其卷須存在分叉和不分叉2種類(lèi)型，且后者較前者更普遍發(fā)生（Amonwu & Okoli，2013；Sidhu &Pathak，2016），關(guān)于苦瓜植株卷須發(fā)生的初始節(jié)位（簡(jiǎn)稱(chēng)卷須初始節(jié)位）及其分叉的遺傳規(guī)律鮮見(jiàn)報(bào)道。

通過(guò)對(duì)廣泛收集的苦瓜種質(zhì)資源進(jìn)行觀察和篩選，選擇卷須初始節(jié)位及分叉存在顯著差異的4份苦瓜自交系為材料，通過(guò)構(gòu)建遺傳分離群體，對(duì)2個(gè)性狀分別進(jìn)行遺傳分析，旨在為揭示苦瓜植株卷須發(fā)生及發(fā)育的遺傳機(jī)制奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

以卷須初始節(jié)位存在顯著差異的栽培苦瓜自交系佛瀝112為母本和野生苦瓜自交系THMC170為父本，通過(guò)人工隔離雜交及其后代自交相繼獲得F1和F2材料，對(duì)苦瓜卷須初始節(jié)位進(jìn)行遺傳分析。以卷須分叉的栽培苦瓜自交系佛瀝734為母本和卷須不分叉的半野生苦瓜自交系A(chǔ)VBG1602為父本，同樣通過(guò)人工隔離雜交及其后代自交相繼獲得F1和F2材料，對(duì)苦瓜卷須分叉性進(jìn)行遺傳分析。

2套4世代材料（P1、P2、F1、F2）均于2018年3月14日種植于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)躍進(jìn)北試驗(yàn)基地大棚內(nèi)，常規(guī)栽培管理。8月10日，重復(fù)種植栽培苦瓜自交系佛瀝734和半野生苦瓜自交系A(chǔ)VBG1602及其F1和F2材料于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)增城教學(xué)科研基地，常規(guī)栽培管理，用于驗(yàn)證苦瓜卷須分叉遺傳規(guī)律。

1.2 性狀調(diào)查

苦瓜種子萌發(fā)后，最初形成的2片真葉為對(duì)生葉，以后形成的為互生葉。以第1片互生葉作為苦瓜植株的第1節(jié)，當(dāng)苦瓜植株長(zhǎng)至抽蔓期開(kāi)始形成卷須時(shí)，統(tǒng)計(jì)苦瓜卷須初始節(jié)位。

苦瓜植株（包括卷須分叉和卷須不分叉2種類(lèi)型）最初形成的卷須絕大多數(shù)是不分叉的。但是，對(duì)于卷須分叉類(lèi)型的植株而言，當(dāng)植株生長(zhǎng)至20～30片葉時(shí)就會(huì)形成分叉的卷須，而對(duì)于卷須不分叉類(lèi)型的植株而言，則仍然產(chǎn)生不分叉的卷須。為了準(zhǔn)確統(tǒng)計(jì)苦瓜植株卷須分叉的有無(wú)，本試驗(yàn)調(diào)查了每株植株40節(jié)以?xún)?nèi)主莖的卷須分叉情況，以40節(jié)內(nèi)卷須存在分叉的記為卷須分叉，均不分叉的記為卷須不分叉。

1.3 群體正態(tài)分布檢驗(yàn)

使用Excel和SPSS軟件對(duì)佛瀝112和THMC170及其F1、F24個(gè)世代的卷須初始節(jié)位進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和分析。運(yùn)用Shapiro-Wilk（W檢驗(yàn)）對(duì)分離世代F2進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，當(dāng)P＞0.05時(shí)，表示符合正態(tài)分布。再根據(jù)偏度（Skewness）和峰度（Kurtosis）值判斷正態(tài)分布的具體情況或類(lèi)型，當(dāng)Sk=0，Ku=0時(shí)，表示分布呈正態(tài)，即眾數(shù)等于算術(shù)平均數(shù)；當(dāng)Sk＞0時(shí)，表示分布呈正偏態(tài)，即眾數(shù)位于算術(shù)平均數(shù)的左側(cè)；當(dāng)Sk＜0時(shí)，表示分布呈負(fù)偏態(tài)，即眾數(shù)位于算術(shù)平均數(shù)的右側(cè)。

1.4 遺傳分析

采用植物數(shù)量性狀主基因+多基因混合遺傳模型（蓋鈞鎰 等，2003），對(duì)4個(gè)世代的苦瓜卷須初始節(jié)位進(jìn)行聯(lián)合分析，通過(guò)極大似然法和IECM（iterated expectation and conditional maximization）算法對(duì)混合分布中的有關(guān)成分分布參數(shù)做出估計(jì)，然后利用AIC（Akaike’s information criterion）準(zhǔn)則和一組適合性測(cè)驗(yàn)，選擇最優(yōu)遺傳模型，并估計(jì)主基因和多基因遺傳率、方差等遺傳參數(shù)。在適合性測(cè)驗(yàn)的5個(gè)統(tǒng)計(jì)量（U12、U22、U32、nW2和Dn）中，U12、U22和U32為均勻性檢驗(yàn)，nW2為Smirnov檢驗(yàn)，Dn為Kolmogorov檢驗(yàn)；前三者是對(duì)分布的某一數(shù)字特征進(jìn)行檢驗(yàn)，即檢驗(yàn)分布的平均數(shù)、二階原點(diǎn)矩和二階中心矩；后兩者是對(duì)分布整體進(jìn)行檢驗(yàn)。分析軟件由南京農(nóng)業(yè)大學(xué)國(guó)家大豆改良中心提供。

卷須分叉的遺傳分析采用卡方檢驗(yàn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 苦瓜親本及F1卷須初始節(jié)位統(tǒng)計(jì)

統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果表明（表1），佛瀝112（P1）的卷須初始節(jié)位為（3.64±0.50）節(jié)，THMC170（P2）的卷須初始節(jié)位為（4.62±0.65）節(jié)，兩者之間存在顯著差異（P＜0.05），并且F1卷須初始節(jié)位為（3.39±0.70）節(jié)，略低于佛瀝112（P1），但是差異不顯著（P＞0.05），而F1與THMC170（P2）差異顯著（P＜0.05）。說(shuō)明苦瓜植株卷須發(fā)生的初始節(jié)位低對(duì)初始節(jié)位高符合完全顯性遺傳。

表1 佛瀝112（P1）、THMC170（P2）及其F1的卷須初始節(jié)位統(tǒng)計(jì)

2.2 苦瓜F2群體卷須初始節(jié)位的分布特征

對(duì)佛瀝112（P1）和THMC170（P2）的F2群體（n=119）卷須初始節(jié)位進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。結(jié)果表明（圖1），卷須初始節(jié)位在F2群體中呈現(xiàn)連續(xù)分布，符合數(shù)量性狀遺傳特征。W檢驗(yàn)結(jié)果表明，卷須初始節(jié)位在F2群體中呈正偏態(tài)分布，即偏向于低值親本。

2.3 苦瓜卷須初始節(jié)位的遺傳模型

對(duì)佛瀝112（P1）和THMC170（P2）及其F1、F24個(gè)世代的卷須初始節(jié)位進(jìn)行主基因+多基因混合遺傳模型分析，獲得1對(duì)主基因（A）、2對(duì)主基因（B）、多基因（C）、1對(duì)主基因+多基因（D）和2對(duì)主基因+多基因（E）5類(lèi)24種遺傳模型的極大似然函數(shù)值和AIC值（表2）。

根據(jù)最小AIC值原則，初步判定E-3、E-4、E-5和E-6模型較為適合，進(jìn)一步對(duì)此4個(gè)初選模型進(jìn)行一組適合性檢驗(yàn)。結(jié)果表明（表3），在4個(gè)世代的20個(gè)統(tǒng)計(jì)量中，所選4個(gè)模型的統(tǒng)計(jì)量顯著個(gè)數(shù)均為1個(gè)。經(jīng)似然比檢驗(yàn)，E-6模型與E-3模型（χ2=0.01，P＞0.05）、E-6模型與E-4模型（χ2=0.01，P＞0.05）、E-6模型與E-5模型（χ2=0，P＞0.05）之間沒(méi)有顯著差異。由于E-6模型的AIC值最小，因此認(rèn)為苦瓜的卷須初始節(jié)位遺傳符合E-6模型，即符合2對(duì)等顯性主基因+加性-顯性多基因混合遺傳模型。

圖1 苦瓜植株卷須初始節(jié)位在F2群體中的頻次分布

表2 苦瓜卷須初始節(jié)位遺傳模型的極大似然函數(shù)值和AIC值

表3 苦瓜卷須初始節(jié)位遺傳模型的適合性檢驗(yàn)

2.4 苦瓜卷須初始節(jié)位的遺傳參數(shù)估計(jì)

根據(jù)苦瓜卷須初始節(jié)位遺傳模型參數(shù)的極大似然估計(jì)值，估計(jì)最適遺傳模型的遺傳參數(shù)。結(jié)果表明（表4），苦瓜卷須初始節(jié)位遺傳由主基因和多基因共同控制，其中主基因遺傳率為15.81%，多基因遺傳率為7.83%。說(shuō)明環(huán)境對(duì)苦瓜卷須初始節(jié)位的影響較大。2對(duì)主基因的加性和顯性效應(yīng)均相等（h1=h2=d1=d2=-0.21），h1/d1=h2/d2=1，表現(xiàn)為完全顯性；多基因的顯性效應(yīng)[h]為-0.25，加性效應(yīng)[d]為-0.01，[h]/[d]＞1，表現(xiàn)為正超顯性。說(shuō)明苦瓜卷須初始節(jié)位低對(duì)卷須初始節(jié)位高為顯性，且存在超顯性現(xiàn)象，與F1（表1）和F2（圖1）表型統(tǒng)計(jì)結(jié)果一致。

表4 苦瓜卷須初始節(jié)位的遺傳參數(shù)估計(jì)值

2.5 苦瓜卷須分叉性狀的遺傳

經(jīng)統(tǒng)計(jì)，2018年春種植的母本佛瀝734所有單株主蔓在40節(jié)以?xún)?nèi)均有卷須分叉，父本AVBG1602均為卷須不分叉單株，F(xiàn)1世代中的所有單株在40節(jié)以?xún)?nèi)都有卷須分叉（圖2）。在F2分離世代的287個(gè)單株中，有208株表現(xiàn)為卷須分叉，79株表現(xiàn)為卷須不分叉。經(jīng)卡平方檢驗(yàn)，χ2=0.85（P＞0.05），表明在F2分離世代中卷須分叉與卷須不分叉符合3∶1的分離規(guī)律。

對(duì)2018年秋種植的佛瀝734與AVBG1602及其F1、F2材料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的結(jié)果同樣表明，母本佛瀝734與父本AVBG1602及其F1植株的卷須分叉表現(xiàn)與2018年春一致；在F2分離世代的88個(gè)單株中，有63株表現(xiàn)為卷須分叉，25株表現(xiàn)為卷須不分叉，經(jīng)卡平方檢驗(yàn)，χ2=0.55（P＞0.05）。同樣驗(yàn)證了在F2世代中植株卷須分叉與卷須不分叉的遺傳符合3∶1的分離規(guī)律。因此，認(rèn)為苦瓜植株卷須的分叉對(duì)不分叉受1對(duì)顯性基因控制，其中卷須分叉表現(xiàn)為顯性，卷須不分叉表現(xiàn)為隱性。

圖2 苦瓜植株卷須分叉與不分叉

3 結(jié)論與討論

苦瓜屬于無(wú)限生長(zhǎng)類(lèi)型的攀援性植物，其植株卷須發(fā)生的時(shí)間與抽蔓期的早晚有關(guān)，其卷須分叉的有無(wú)可能會(huì)影響植株的攀援能力。根據(jù)筆者對(duì)眾多苦瓜種質(zhì)資源觀察統(tǒng)計(jì)的結(jié)果表明，苦瓜植株卷須發(fā)生的早晚存在顯著差異，不同材料之間存在卷須分叉有無(wú)的差別。因此，本試驗(yàn)選擇了4份苦瓜材料為親本構(gòu)建遺傳分離群體，對(duì)苦瓜植株卷須相關(guān)的2個(gè)性狀進(jìn)行遺傳分析。結(jié)果表明，苦瓜植株的卷須初始節(jié)位符合2對(duì)等顯性主基因+加性-顯性多基因混合遺傳模型（E-6模型），F(xiàn)1偏向卷須初始節(jié)位低的親本，存在超親優(yōu)勢(shì)。這在苦瓜雜種優(yōu)勢(shì)中可以加以利用，即在選配親本時(shí)，選擇卷須初始節(jié)位低的親本將有可能配制獲得抽蔓期更早的一代雜種。另一方面，由于多基因效應(yīng)以顯性效應(yīng)為主，因此，對(duì)于苦瓜植株卷須初始節(jié)位的選擇應(yīng)在高世代進(jìn)行。本試驗(yàn)還對(duì)苦瓜植株主蔓40節(jié)以?xún)?nèi)卷須分叉有無(wú)進(jìn)行了遺傳分析，結(jié)果表明，卷須的分叉對(duì)不分叉受1對(duì)顯性基因控制。本試驗(yàn)結(jié)果為進(jìn)一步揭示苦瓜植株卷須發(fā)育的遺傳機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。