鐘建青，袁航，殷士寧，尹麗華，傅超，單秀明，張春輝，吳愛英

(青島市食品藥品檢驗(yàn)研究院，山東 青島 266071)

根痛平系列制劑處方中續(xù)斷占比較重，屬于臣藥。續(xù)斷來源為川續(xù)斷科植物川續(xù)斷的干燥根，具“補(bǔ)肝腎，強(qiáng)筋骨，續(xù)折傷”的功能，屬于臨床常用中藥[1]。續(xù)斷中皂苷類成分含量較高，其中川續(xù)斷皂苷Ⅵ作為三萜皂苷類的主要活性成分其藥理活性已被廣泛研究，研究證實(shí)其具有抗骨質(zhì)疏松、保肝降脂、保護(hù)神經(jīng)、保護(hù)心肌等藥理作用，抗骨質(zhì)疏松作用尤為顯著，與續(xù)斷藥典功效中的“補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨、續(xù)折傷”相吻合[2-5]。

我院承擔(dān)了根痛平膠囊與根痛平片兩個(gè)品種2017年度國家藥品評價(jià)抽驗(yàn)工作，合計(jì)共收到根痛平膠囊244批次，涉及16家生產(chǎn)企業(yè)；根痛平片83批次，涉及3家生產(chǎn)企業(yè)。我們參照《中國藥典》2015年版中續(xù)斷藥材的標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合近年來多篇文獻(xiàn)研究，采用高效液相色譜(HPLC)測定方法考察了本次國評樣品中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量[6-8]。由于各生產(chǎn)企業(yè)間處方量和添加輔料略有不同，生產(chǎn)工藝也不同，分別執(zhí)行企業(yè)注冊標(biāo)準(zhǔn)，所有執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)均未建立關(guān)于續(xù)斷含量測定的方法，因此本研究建立了HPLC法測定根痛平膠囊/片中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量的方法，主要通過此項(xiàng)考察摸清原材料的質(zhì)量及企業(yè)投料情況，以期更深入有效的協(xié)助市場流通藥品的監(jiān)管。

1 儀器與試劑

Agilent 1100高效液相色譜儀(美國安捷倫公司)；BP-211D電子天平(北京賽多利斯)；超聲波清洗器(深圳市潔盟清洗設(shè)備有限公司)。色譜柱：Agilent ZORBAX SB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)。川續(xù)斷皂苷Ⅵ(中國食品藥品檢定研究院；批號：111685-201506)。乙腈為色譜純(德國默克公司)，其余試劑均為分析純(國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)。根痛平膠囊方法學(xué)考察選用陜西東泰制藥有限公司生產(chǎn)的樣品，批號：5L02。根痛平片方法學(xué)考察選用承德燕峰藥業(yè)有限責(zé)任公司生產(chǎn)的樣品，批號：16914012。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-水(27∶73)為流動相；檢測波長為212 nm。理論板數(shù)按川續(xù)斷皂苷Ⅵ峰計(jì)算，應(yīng)不低于2 000。

2.2 對照品溶液的制備 取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品適量，加甲醇制成每1 mL中含約700 μg的溶液，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液適量，加甲醇制成每1 mL中含約140 μg的溶液，作為對照品使用液。

2.3 供試品溶液的制備 取本品10片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液(片劑)。取本品10粒內(nèi)容物，精密稱定，研細(xì)，精密稱取0.5 g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，稱定重量，超聲處理45 min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液(膠囊劑)。

2.4 專屬性試驗(yàn) 按處方比例及工藝配制缺續(xù)斷的陰性樣品，按供試品溶液制備方法，制備陰性對照溶液。陰性樣品溶液在川續(xù)斷皂苷Ⅵ色譜峰保留時(shí)間相對應(yīng)的位置上無色譜峰干擾，表明根痛平膠囊(片)中的其他藥物組分對川續(xù)斷皂苷Ⅵ的測定無干擾，見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 精密量取川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品儲備液適量，加乙醇制成每1 mL含川續(xù)斷皂苷Ⅵ分別為30、60、90、110、140、210、280 μg的溶液作為對照品。取對照品溶液各10 μL，注入液相色譜儀，以濃度(μg·mL-1)為橫坐標(biāo)，以峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明川續(xù)斷皂苷Ⅵ在30～280 μg·mL-1的范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，回歸方程為Y=2 029.357 0X+3.688 5，R2=0.999 7。

2.6 精密度試驗(yàn) 取140 μg·mL-1的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照溶液按“2.1”項(xiàng)下的液相色譜條件連續(xù)測定6次，由峰面積計(jì)算精密度，RSD為0.61%(n=6)，表明方法的精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取根痛平膠囊樣品(陜西東泰制藥有限公司，批號：5L02)，按供試品溶液制備方法制備，重復(fù)測定6次，川續(xù)斷皂苷Ⅵ的平均含量為1.12 mg/片，RSD為0.67%(n=6)。取根痛平片樣品(承德燕峰藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：16914012)，按供試品溶液制備方法制備，重復(fù)測定6次，川續(xù)斷皂苷Ⅵ的平均含量為0.93 mg/片，RSD為1.52%(n=6)。表明此方法重復(fù)性良好。

2.8 添加回收率試驗(yàn) 取根痛平膠囊樣品(陜西東泰制藥有限公司，批號：5L02，川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量為1.12 mg/粒，每粒裝0.5 g)0.25 g，精密加入濃度為0.708 3 mg·mL-1的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品溶液1.0 mL，照供試品溶液的制備方法制備6份回收率測試溶液，測定，外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果見表1。取根痛平片樣品(承德燕峰藥業(yè)有限責(zé)任公司，批號：16914012，川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量為0.93 mg/片，每片重0.3 g)0.25 g，精密加入濃度為0.708 3 mg·mL-1的川續(xù)斷皂苷Ⅵ對照品溶液1.0 mL，照供試品溶液的制備方法制備6份回收率測試溶液，測定，外標(biāo)法計(jì)算回收率，結(jié)果見表2。

表2 根痛平片添加回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9 樣品檢測結(jié)果 本次國評抽到的根痛平膠囊16家生產(chǎn)企業(yè)均執(zhí)行不同的標(biāo)準(zhǔn)，16個(gè)現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)共計(jì)4種處方量(處方1～4)，每種處方量下又有多種規(guī)格(0.35、0.4、0.5、0.3、0.37 g/粒)。由于不同企業(yè)生產(chǎn)工藝和處方量各不相同，為了直觀、準(zhǔn)確的分析川續(xù)斷皂苷Ⅵ在不同生產(chǎn)企業(yè)中的含量，最終我們根據(jù)不同的處方量，分別以mg·g-1為單位擬定川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量參考線度值，以避免規(guī)格和處方量疊加后產(chǎn)生過多頭續(xù)的限度值，不利于整體分析。本次國評抽到的根痛平片3家生產(chǎn)企業(yè)執(zhí)行同一標(biāo)準(zhǔn)，處方量唯一，片劑均為薄膜衣片。以mg·g-1為單位擬定根痛平片中川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量參考線度值，有利于整體分析。

根據(jù)各個(gè)企業(yè)執(zhí)行標(biāo)準(zhǔn)中根痛平膠囊和根痛平片的處方及生產(chǎn)工藝，樣品取樣量為1 g時(shí)，平均每1 g樣品中含續(xù)斷飲片的量分別為0.27 g(片劑處方，膠囊處方1、膠囊處方2)、0.38 g(膠囊處方3)和0.49 g(膠囊處方4)?！吨袊幍洹?015年版規(guī)定，續(xù)斷飲片“含川續(xù)斷皂苷Ⅵ不得少于1.5%”， 以1.5%作為續(xù)斷中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量底限，按照50%轉(zhuǎn)移率計(jì)算，結(jié)果見表3。

表3 根痛平膠囊和根痛平片不同處方參考線度值計(jì)算表

擬定上述限度值作為結(jié)果分析參考限度值，考察企業(yè)續(xù)斷的投料情況。結(jié)果244批次根痛平膠囊中有187批次低于此限度。83批次根痛平片中21批次低于此限度。有2家企業(yè)3批次樣品未檢出川續(xù)斷皂苷Ⅵ，提示企業(yè)未投料或投料用續(xù)斷質(zhì)量差。

A.未檢出川續(xù)斷皂苷Ⅵ的樣品色譜圖 (企業(yè)A)；B.未檢出川續(xù)斷皂苷Ⅵ的樣品色譜圖 (企業(yè)A)；C.未檢出川續(xù)斷皂苷Ⅵ的樣品色譜圖 (企業(yè)B)圖2 未檢出川續(xù)斷皂苷Ⅵ的根痛平膠囊樣品高效液相色譜圖

3 討論

本次研究建立了HPLC法測定根痛平膠囊和根痛平片中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，該方法專屬性強(qiáng)、簡單、準(zhǔn)確、方便、重復(fù)性好，能有效用于測定根痛平膠囊和根痛平片中川續(xù)斷皂苷Ⅵ的含量，為根痛平系列制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提高提供理論依據(jù)。

我們擬定了川續(xù)斷皂苷Ⅵ含量參考限度值，全面系統(tǒng)的考察了本次國家性評價(jià)抽檢的所有生產(chǎn)企業(yè)續(xù)斷的投料情況，結(jié)果有2家企業(yè)3批次樣品未檢出川續(xù)斷皂苷Ⅵ，提示個(gè)別企業(yè)存在疑似未投料或投料所用續(xù)斷飲片質(zhì)量差的問題。

綜上，我們需要盡快開展根痛平系列制劑的標(biāo)準(zhǔn)提高工作，將處方中的重要藥味的標(biāo)志性成分含量測定作為監(jiān)測項(xiàng)目。日常檢驗(yàn)中，標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)項(xiàng)目較少的品種多留心多探索，才能發(fā)現(xiàn)隱藏的藥品生產(chǎn)質(zhì)量問題，堵住監(jiān)管漏洞。