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三角帆蚌和馬氏珍珠貝軟體脂肪酸的分析

2019-06-03 08:05:30楊書婷吳皓劉睿孫晶晶韋小翠張焱程建明
中成藥 2019年5期
關(guān)鍵詞:三角帆烷酸索氏

楊書婷吳 皓劉 睿孫晶晶韋小翠張 焱程建明?

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,江蘇 南京 210023;2.江蘇省海洋藥物研究開發(fā)中心,江蘇 南京 210023)

珍珠貝主要包括三角帆蚌、馬氏珍珠貝和褶紋冠蚌,其中三角帆蚌是淡水珍珠中養(yǎng)殖最廣品種,馬氏珍珠貝又稱馬氏珠母貝或合浦珠母貝,是目前世界上用于海水珍珠生產(chǎn)的主要貝類,其育珠產(chǎn)量占海水珍珠產(chǎn)量的85% 以上[1],但每年采集珍珠后其軟體得不到充分利用,造成嚴重的資源浪費[2]?!侗静菥V目》 記載其 “止渴除熱,解酒毒,去眼赤,明目除濕,主婦人勞損下血,除煩解熱毒,血崩帶下”;《食療本草》 記載其 “主大熱,解酒毒,去眼赤,止渴”,具有很好的藥效,所含脂肪酸類成分是主要的能量和營養(yǎng)物質(zhì),其中不飽和脂肪酸具有顯著的藥理活性[3-4]。本實驗研究淡水與海水中珍珠貝軟體脂肪酸組成,篩選出優(yōu)勢品種,為進一步開發(fā)其藥用價值提供參考。

1 材料

FA1104 型電子分析天平(上海精密科學(xué)儀器有限公司);九陽勻漿機(九陽有限公司);凍干機(美國Labconco 公司);Milli-Q 超純水機(美國 Millipore 公司);KQ-500DE 型數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司);SB-2100 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海愛朗儀器有限公司)。正己烷(阿拉丁,批號201406);甲醇(國藥集團化學(xué)試劑有限公司,批號20170912);三氟化硼乙醚(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司);無水硫酸鈉(西隴化工股份有限公司)。

三角帆蚌采于浙江諸暨,貝齡24 個月;馬氏珍珠貝采于廣西北海,貝齡14 個月,經(jīng)南京中醫(yī)藥大學(xué)劉圣金副教授鑒定為正品。

2 方法

2.1 三角帆蚌與馬氏珍珠貝凍干粉制備 取適量軟體置于籃中,瀝干過夜,清洗干凈,勻漿,-20 ℃放置 4 h,轉(zhuǎn)移至-80 ℃過夜后,冷凍干燥后粉碎,過40 目篩,即得淡黃色珍珠貝凍干粉。

2.2 索氏提取 取珍珠貝凍干粉3 g,加入150 mL 正己烷,索氏提取6 h,提取溶液減壓回收,三角帆蚌油脂得率為3.5%,馬氏珍珠貝油脂得率為6.2%。取適量油脂,分別置于25 mL 試管中,加入10% KOH-CH3OH(80%甲醇)2 mL,在60 ℃水浴中皂化至油珠消失,冷卻后加入2 mL三氟化硼乙醚-甲醇(三氟化硼乙醚 ∶甲醇=1 ∶3),60 ℃水浴甲酯化 30 min,冷卻,加 4 mL 正己烷,5 000 r/min 離心10 min,取上層,水洗至中性。加無水硫酸鈉靜置過夜,正己烷稀釋 2 倍,過 0.22 μm 微孔濾膜,供試品進GC-MS 分析。

2.3 超聲提取 取珍珠貝凍干粉3 g,加入150 mL 正己烷,超聲(40 kHz,300 W)提取30 min,提取溶劑減壓回收,三角帆蚌油脂得率為 3.1%,馬氏珍珠貝油脂得率5.9%。皂化和甲酯化方法同 “2.1”項。

2.4 GC-MS 分析(圖1~4)

2.4.1 GC-MS 條件 Agilent HP-5 色譜柱(0.25 mm×30 mm,0.25 μm);進樣口溫度 220 ℃;檢測器溫度250 ℃;載氣為高純度氦氣;柱體積流量 1.0 mL/min;進樣時間 1 min;溶劑延遲 3 min;柱起始溫度 110 ℃,保持5 min,然后以 5 ℃ /min 升溫至 185 ℃ ,再以 5 ℃ /min 升溫至 280 ℃;采用分流進樣模式,分流比 10 ∶1;進樣 1 μL。

2.4.2 MS 條件 電子轟擊(EI)離子源;電子能量70 eV;離子源溫度230 ℃;接口溫度 220 ℃;選取全程離子碎片掃描模式;質(zhì)量掃描范圍為m/z45~450。

3 結(jié)果

三角帆蚌中確定25種脂肪酸,馬氏珍珠貝中確定26種脂肪酸。運用面積歸一化法得出各脂肪酸的相對含有量,結(jié)果見表1。

由表可知,三角帆蚌中含有飽和脂肪酸48.25%,以十六烷酸(26.53%)、十七烷酸(5.12%)、硬脂酸(9.15%)為主;含有不飽和脂肪酸(19.45%),以 9-十八碳烯酸(6.94%)、11-二十碳烯酸(7.05%)為主。馬氏珍珠貝中含有飽和脂肪酸 21.92%,以十六烷酸(13.70%)、硬脂酸(4.81%)為主;不飽和脂肪酸55.81% ,以 9,12-十八碳二烯酸(24.60% )、5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(6.41% )、EPA(6.41% )、DHA 酸(6.66%)為主。

圖1 三角帆蚌索氏提取脂肪酸GC-MS 總離子流圖

圖2 馬氏珍珠貝索氏提取脂肪酸GC-MS 總離子流圖

圖3 三角帆蚌超聲提取脂肪酸GC-MS 總離子流圖

圖4 馬氏珍珠貝中超聲提取脂肪酸GC-MS 總離子流圖

超聲提取2種珍珠貝軟體中脂肪酸類成分,三角帆蚌中確定24種脂肪酸,馬氏珍珠貝中確定21種脂肪酸。運用面積歸一化法得出各脂肪酸的相對含有量,結(jié)果見表2。

由表可知,三角帆蚌中含有飽和脂肪酸40.53%,以十六烷酸(23.65%)、十七烷酸(4.12%)、硬脂酸(7.50%)為主;含有不飽和脂肪酸(23.34%),以 9-十八碳烯酸(7.32%)、13-二十碳烯酸(7.52%)為主。馬氏珍珠貝中含有飽和脂肪酸 29.45%,以十六烷酸(20.11%)、硬脂酸(5.73%)為主;不飽和脂肪酸46.08% ,以9,12-十八碳二烯酸(20.10% )、5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(5.86% )、EPA(6.41% )、DHA 酸(3.65%)為主。

4 討論

三角帆蚌和馬氏珍珠貝是淡水與海水養(yǎng)殖珍珠主要品種,馬氏珍珠貝占海水珍珠產(chǎn)量的85%以上。但是貝肉沒有得到充分應(yīng)用,造成資源浪費。對廢棄的珍珠貝軟體脂肪酸成分研究,為珍珠貝軟體綜合開發(fā)利用提供參考。

脂肪酸主要包括飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸,不飽和脂肪酸在營養(yǎng)學(xué)和醫(yī)藥方面具有很好的藥理作用[5]。花生四烯酸、EPA 和DHA 等多不飽和脂肪酸可以提高人體免疫力[6]。自然界中大豆油等植物油中含有較多的花生四烯酸,鮭魚和金槍魚等海洋魚類動物中也含有較多的長鏈不飽和脂肪酸[7-9]。不飽和脂肪酸除了作為營養(yǎng)品、保健品、健康輔料和食品添加劑外,對生理功能方面也有作用,尤其對神經(jīng)系統(tǒng)、視覺系統(tǒng)、智力發(fā)育和心血管病方面有很好的作用[10-11]。

目前,沒有統(tǒng)一的標準和方法對生物體中的脂肪酸進行提取和分析[12]。文章采用傳統(tǒng)的索氏提取和現(xiàn)代化的超聲提取2種方法進行比較。結(jié)果顯示,索氏提取與超聲提取整體差異不大。由于索氏提取時間久,對脂肪酸類成分提取更加完全,但操作繁瑣,提取時間久。并且,與超聲提取差異不大。因此,采用更加高效的超聲提取。

對三角帆蚌和馬氏珍珠貝中脂肪酸進行分析,可以看出馬氏珍珠貝中脂肪酸含有量高于三角帆蚌,EPA、DHA含有量顯著高于三角帆蚌。因此,馬氏珍珠貝軟體可以作為提取EPA、DHA 的原料。EPA、DHA 具有促進視網(wǎng)膜形成、抑制血小板聚集、抑制腫瘤生長等作用[13]。三角帆蚌中硬脂酸含有量較高,且硬脂酸是重要的化工原料[14-15]。因此,三角帆蚌和馬氏珍珠貝軟體中脂肪酸均有研發(fā)價值。

表1 三角帆蚌和馬氏珍珠貝脂肪酸成分

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