(1.吉林師范大學生態(tài)環(huán)境研究所, 吉林 四平 136000; 2.吉林農(nóng)業(yè)大學中藥材學院, 長春 130118;3.通化師范學院生命科學學院, 吉林 通化 134002)
隨著城市化的不斷推進和人民生活水平的逐漸提高,園林綠化已成為城市文明建設的主要標志之一,其在改善城市生態(tài)環(huán)境、美化市容、提高生活品質等方面發(fā)揮著重要作用。但是對于我國東北地區(qū)來說,由于受土壤次生鹽漬化和氣候的影響,導致園林綠化植物選擇受限、應用品種單一,且栽植后存在成活率偏低現(xiàn)象。因此,摸清園林綠化植物對環(huán)境的適應性,因地制宜的選配景觀植物,是提高東北地區(qū)城市園林綠化植物存活率、節(jié)約成本投入和豐富園林綠化品種的有效途徑。種子萌發(fā)期是植物整個生命周期中最為關鍵的發(fā)育階段,其生存環(huán)境的好壞直接影響到種苗的成活和生長發(fā)育[1-2]。對于大多數(shù)植物,種子萌發(fā)期對環(huán)境脅迫非常敏感,人們常用逆境脅迫條件下種子萌發(fā)狀況來評價植物的抗逆性[3-5]。因此,明確園林花卉種子萌發(fā)期對鹽脅迫的響應特征,了解其對鹽脅迫的適應特性,對篩選和培育耐鹽花卉品種具有重要意義。
茶花鳳仙(ImpatiensbalsamenaL.),是鳳仙花的一個品種。其花色艷麗,重瓣大花,形如山茶,而且株型矮小緊湊,常用作花壇、花境、自然叢植和盆栽植物,是園林綠化和庭院、會場布景的優(yōu)良花卉之選。目前,人們對茶花鳳仙的研究主要涉及植物生長調節(jié)劑對種子萌發(fā)的影響[6]、試管苗成花誘導[7-8]、多倍體誘導[9]、耐陰性[10]、重金屬(鉛、鎘、鋅、砷)脅迫及植物對重金屬的富集[11-16]等方面,而有關茶花鳳仙鹽脅迫方面的研究甚少,僅見姜云天等[17]、祖悅[18]和張曉軍等[19]對其種子萌發(fā)期的耐鹽性進行了初步探討。該花卉能否在復雜鹽堿脅迫環(huán)境下生存?其種子萌發(fā)期遇到復雜鹽堿脅迫后又是作何響應?耐受性又如何?為了進一步深入了解該花卉資源的耐鹽特性,人工模擬2種配比的鹽堿脅迫環(huán)境,探討復雜鹽堿生境條件對茶花鳳仙種子發(fā)芽率、發(fā)芽勢、活力指數(shù)等萌發(fā)指標的影響,明確茶花鳳仙在種子萌發(fā)期對混合鹽脅迫的響應特征及其耐受濃度,以期為鹽堿地區(qū)城市綠化花卉品種的選擇提供理論依據(jù),同時也為其他園林綠化花卉耐鹽性研究提供理論參考。
茶花鳳仙種子購自北京盈車嘉穗科技有限公司。
1.2.1試驗設計
根據(jù)東北地區(qū)鹽堿地鹽分組成[20],并參照相關文獻[21]進行人工模擬混合鹽脅迫條件。將4種單鹽(NaCl、Na2SO4、NaHCO3和Na2CO3)按照1∶1∶1∶1和0∶0∶1∶1兩種摩爾配比進行混合,2種混合鹽組合分別以堿性鹽比例較低處理組(A組)和堿性鹽比例較高處理組(B組)來表示。根據(jù)預實驗每組內(nèi)又設定4個濃度梯度(分別用1~4代表4個濃度梯度),其混合鹽總濃度依次設置為30,60,90,120 mmol·L-1,分別標記為A 1~A 4、B 1~B 4;以蒸餾水為對照0(ck)。A組和B組pH值平均值分別為9.56、10.68。
1.2.2種子處理及指標測定
種子處理及相關指標的測定參照姜云天等[17]和李玉梅等[22]的研究:選取飽滿、大小均勻一致的茶花鳳仙種子,先用0.1%的KMnO4溶液消毒5 min,然后用蒸餾水沖洗5遍備用。種子培養(yǎng)采用雙層濾紙法[17],培養(yǎng)皿規(guī)格為直徑12 cm。將消毒后的種子均勻擺放到培養(yǎng)皿內(nèi),每個培養(yǎng)皿30粒,然后分別加入10 mL對應濃度的混合鹽溶液,每個處理濃度3次重復。將所有處理后的種子置于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng),每隔24 h觀察、記錄種子萌發(fā)情況。種子發(fā)芽標準[22]:以胚芽長度達到種子長度一半時記為發(fā)芽。第7天結束種子發(fā)芽試驗,并對未萌發(fā)種子進行復水發(fā)芽試驗,觀察記錄復水后種子的萌發(fā)情況。相關指標的計算公式如下:
發(fā)芽率(%)=(正常發(fā)芽的種子總數(shù)/供試種子總數(shù))×100%[17];
相對發(fā)芽率(%)=(鹽處理發(fā)芽率/對照發(fā)芽率)×100%[17];
復水發(fā)芽率(%)=(未萌發(fā)種子復水后發(fā)芽種子數(shù)/未萌發(fā)種子總數(shù))×100%;
發(fā)芽勢(%)=(日發(fā)芽種子數(shù)達到高峰期時的發(fā)芽種子總數(shù)/供試種子總數(shù))×100%[22];
發(fā)芽指數(shù)(Gi)=∑Gt/Dt,
式中,Gt為不同時間(t,d)的發(fā)芽數(shù);Dt為相應的發(fā)芽試驗時間[17]。
活力指數(shù)(Vi)=Gi×S,
兩年歷練,許峰比李莉現(xiàn)實,他率先戳破了童話,李莉再沒有過多追問,許峰坦白了自己的欺騙后再沒有多作解釋。他們都明白,他們之間,這樣是最好的結局。
式中S為平均幼苗鮮質量(單位:g)。
相對鹽害率(%)=[(對照發(fā)芽率-處理發(fā)芽率)/對照發(fā)芽率]×100%[17]。
1.2.3耐鹽性評價
分別以混合鹽處理7 d后的相對發(fā)芽率為因變量(y)、以混合鹽濃度為自變量(x)建立函數(shù)方程,以相對發(fā)芽率下降75%、50%和10%時所對應的混合鹽濃度作為茶花鳳仙種子對A、B處理組的耐鹽適宜濃度、耐鹽半致死濃度和耐鹽極限濃度[22-23]。
用Excel軟件進行制圖,運用SPSS 20.0軟件進行方差分析和回歸分析,以LSD法進行多重比較。
由圖1可見,堿性鹽比例較低的A處理組(pH=9.56),播種后第1天,對照(0 mmol·L-1)和30 mmol·L-1處理下的種子已開始萌發(fā),其發(fā)芽率分別達到4.44%和3.33%;60 mmol·L-1和90 mmol·L-1處理下的種子,則從第2天才開始萌發(fā),發(fā)芽率分別為67.78%和41.11%;120 mmol·L-1處理下的種子,初始萌發(fā)時間明顯延后,第3天才開始萌發(fā),其發(fā)芽率達到13.33%。而堿性鹽比例較高的B處理組(pH=10.68),播種后第1天,僅對照有少量種子萌發(fā),不同濃度混合鹽脅迫處理下的茶花鳳仙種子均在第2天才開始萌發(fā),但不同濃度處理間的發(fā)芽率則存在較大差異。其中,30 mmol·L-1和60 mmol·L-1處理下,種子發(fā)芽率分別達到90%和76.67%;而90 mmol·L-1和120 mmol·L-1處理下,種子的發(fā)芽率分別為31.11%和4.44%。
當解除茶花鳳仙種子混合鹽脅迫后發(fā)現(xiàn)(表1),堿性鹽比例較低的A處理組(pH=9.56),未萌發(fā)種子在復水第1天就有部分種子恢復萌發(fā);復水第3天,30 mmol·L-1處理下的未萌發(fā)種子完全恢復萌發(fā);而60,90,120 mmol·L-1處理下的未萌發(fā)種子復水發(fā)芽率分別達到27.78%、52.78%和51.97%,其累計發(fā)芽率分別達到91.11%、84.44%和71.11%。但是堿性鹽比例較高的B處理組(pH=10.68),30 mmol·L-1處理下的未萌發(fā)種子均未恢復萌發(fā);而60,90 mmol·L-1和120 mmol·L-1處理下的未萌發(fā)種子僅有少量種子恢復萌發(fā),其復水發(fā)芽率分別為8.33%、2.22%和4.49%,累計發(fā)芽率分別為96.67%、60.00%和28.89%。
表1 解除混合鹽脅迫后茶花鳳仙種子的萌發(fā)情況
處理組混合鹽濃度/(mmol·L-1)復水發(fā)芽率/%累計發(fā)芽率/%ck00.0097.78A130100.00100.00A26027.7891.11A39052.7884.44A412051.9771.11 ck00.0097.78B1300.0098.89B2608.3396.67B3902.2260.00B41204.4928.89
由圖2可見, A(pH=9.56)、B(pH=10.68)處理組,隨著混合鹽濃度的升高,茶花鳳仙種子的發(fā)芽率均呈“先升高后下降”的趨勢。當混合鹽濃度為30 mmol·L-1時,2個處理組的發(fā)芽率同時達到峰值,且與對照差異不顯著(p>0.05),僅比對照增加了1.14%;混合鹽濃度升高到60 mmol·L-1時,A、B處理組的發(fā)芽率分別比對照下降了9.09%和2.27%,但均與對照無顯著差異(p>0.05);當混合鹽濃度達到90 mmol·L-1和120 mmol·L-1時,2個處理組的發(fā)芽率均顯著低于對照及其它處理,且B處理組發(fā)芽率的下降幅度明顯高于A處理組,其分別較對照下降了29.54%、59.09%和39.77%、73.86%。
注:相同處理組內(nèi)的不同小寫字母表示不同混合鹽濃度之間差異顯著(p<0.05)。下同。圖2 混合鹽脅迫對茶花鳳仙種子發(fā)芽率的影響
由圖3可見,A(pH=9.56)、B(pH=10.68)處理組,隨著混合鹽濃度的升高,茶花鳳仙種子的發(fā)芽勢均呈逐漸下降趨勢,且30~120 mmol·L-1各處理濃度間差異顯著(p<0.05)。其中,混合鹽濃度為30 mmol·L-1時,A、B處理組的發(fā)芽勢分別比對照下降了10.34%和6.90%,且均與對照差異不顯著(p>0.05);當混合鹽濃度達到60 mmol·L-1時,2個處理組的發(fā)芽勢則顯著低于對照(p<0.05),分別比對照下降了31.03%和20.69%;當混合鹽濃度升高到120 mmol·L-1時,2個處理組的發(fā)芽勢均驟然下降,其發(fā)芽勢僅為0和4.44%。
圖3 混合鹽脅迫對茶花鳳仙種子發(fā)芽勢的影響
綜合圖2和圖3可知,低濃度(≤30 mmol·L-1)混合鹽脅迫條件下,A、B處理組茶花鳳仙種子的發(fā)芽率和發(fā)芽勢均達到80%以上,而高濃度(≥90 mmol·L-1)混合鹽脅迫條件下,2個處理組的發(fā)芽率和發(fā)芽勢均顯著低于對照及其它處理。說明茶花鳳仙種子對2種配比的低濃度混合鹽脅迫具有一定的耐受性,而高濃度混合鹽脅迫則對種子的生活力及出苗整齊性造成嚴重影響。
由圖4可見, A(pH=9.56)、B(pH=10.68)處理組,隨著混合鹽濃度的升高,茶花鳳仙種子的發(fā)芽指數(shù)均呈逐漸下降趨勢,但各處理濃度的下降幅度存在一定差異。其中,鹽濃度為30 mmol·L-1時,A、B處理組的發(fā)芽指數(shù)分別比對照下降了2.26%和3.89%,且均與對照差異不顯著(p>0.05);當鹽濃度升高到60 mmol·L-1時,A、B處理組的發(fā)芽指數(shù)則顯著低于對照(p<0.05),分別較對照下降了19.25%和12.81%;當混合鹽濃度繼續(xù)升高到90 mmol·L-1時,堿性鹽比例較高的B處理組的發(fā)芽指數(shù)下降幅度明顯高于A處理組;當鹽濃度高達120 mmol·L-1時,2個處理組的發(fā)芽指數(shù)驟然降至7.36和7.74,相比對照分別下降了84.60%和83.80%。以上結果表明,2個處理組的低濃度(≤30 mmol·L-1)混合鹽脅迫對茶花鳳仙種子發(fā)芽指數(shù)的影響不大,而當鹽濃度超出種子承受范圍后,種子的發(fā)芽能力和活力則受到嚴重影響。
圖4 混合鹽脅迫對茶花鳳仙種子發(fā)芽指數(shù)的影響
由圖5可見, A(pH=9.56)、B(pH=10.68)處理組,隨著混合鹽濃度的升高,茶花鳳仙種子的活力指數(shù)均呈逐漸下降趨勢,且4個鹽濃度處理下的活力指數(shù)均與對照差異顯著(p<0.05),但各自下降幅度存在較大差異。其中,在低濃度(30 mmol·L-1)混合鹽脅迫下,A、B處理組的活力指數(shù)分別較對照下降62.60%和68.29%;鹽濃度達到60 mmol·L-1時,A處理組的活力指數(shù)下降幅度明顯高于B處理組;當鹽濃度達到90 mmol·L-1時,A處理組的活力指數(shù)下降幅度較平緩,而B處理組則呈顯著下降趨勢,其與對照相比分別下降了80.49%和88.21%;當鹽濃度繼續(xù)升高到120 mmol·L-1時,A、B處理組的活力指數(shù)均顯著低于其它鹽濃度處理,且分別較對照下降93.90%和96.34%。
圖5 混合鹽脅迫對茶花鳳仙種子活力指數(shù)的影響
為了進一步明確茶花鳳仙種子各發(fā)芽指標與混合鹽濃度之間的關系,分別對發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù)與混合鹽濃度間進行曲線回歸分析,結果表明:堿性鹽比例較低的A處理組(pH=9.56),種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢和發(fā)芽指數(shù)與混合鹽濃度之間的所有曲線模型中僅二次曲線模型達到極顯著水平(p<0.01),其決定系數(shù)R2均達到1.000,而堿性鹽比例較高的B處理組(pH=10.68),這3項指標與混合鹽濃度之間的所有曲線模型中線性曲線和二次曲線模型均達到顯著水平(p<0.05),但是2種模型中二次曲線方程的決定系數(shù)R2最大,其決定系數(shù)分別為0.984、0.954、0.970;A、B處理組的活力指數(shù)與混合鹽濃度之間的所有模型中生長曲線模型均達到極顯著水平(p<0.01),其決定系數(shù)達到0.945和0.925。
表2 發(fā)芽指標與混合鹽濃度之間的回歸分析
發(fā)芽指標回歸方程R2相關系數(shù)r發(fā)芽率yA1=98.002+0.181x-0.006x21.000??-0.926?yB1=97.621+0.359x-0.008x20.984?-0.898?發(fā)芽勢yA2 =96.384+0.263x-0.008x21.000??-0.925?yB2=99.115+0.115x-0.007x20.954?-0.923?發(fā)芽指數(shù)yA3 =47.893+0.042x-0.003x21.000??-0.949?yB3=48.351+0.012x-0.003x20.970?-0.942?活力指數(shù)yA4=e(4.379-0.029)·x0.945??-0.883?yB4= e(4.559-0.037)·x0.925??-0.879?
注:“*”表示在0.05水平上顯著相關;“**”表示在0.01水平上顯著相關。
以上結果表明,可用最優(yōu)二次曲線函數(shù)方程和生長曲線函數(shù)方程來預測發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)以及活力指數(shù)與混合鹽濃度之間的關系,其最優(yōu)二次函數(shù)方程分別為yA 1=98.002+0.181x-0.006x2、yA 2=96.384+0.263x-0.008x2、yA 3=47.893+0.042x-0.003x2;yB 1=97.621+0.359x-0.008x2、yB 2=99.115+0.115x-0.007x2、yB 3=48.351+0.012x-0.003x2;最優(yōu)生長曲線函數(shù)方程分別為yA 4= e(4.379-0.029)·x和yB 4= e(4.559-0.037)·x(見表2)。其中,yA 1~ A 4和yB 1~B 4分別表示A、B處理組茶花鳳仙種子的發(fā)芽率、發(fā)芽勢、發(fā)芽指數(shù)和活力指數(shù);x表示混合鹽濃度。
由圖6可見,A(pH=9.56)、B(pH=10.68)處理組,茶花鳳仙種子的相對鹽害率均隨著混合鹽濃度的升高呈“先下降后升高”的趨勢。其中,混合鹽濃度為0~30 mmol·L-1范圍內(nèi),A、B處理組茶花鳳仙種子的相對鹽害率為負值,相對鹽害率均為-1.14%,說明在此濃度范圍內(nèi),茶花鳳仙種子對這2種配比的混合鹽脅迫均具有一定的耐受性。當鹽濃度達到60 mmol·L-1時,A處理組(pH=9.56)的相對鹽害率增加幅度明顯高于B處理組(pH=10.68),其相對鹽害率分別達到9.09%和2.27%;當鹽濃度超過60 mmol·L-1時,A、B處理組的相對鹽害率均呈驟然上升趨勢,且堿性鹽比例較高的B處理組的相對鹽害率增加幅度明顯高于堿性鹽比例較低的A處理組,在鹽濃度達到120 mmol·L-1時,A、B處理組的相對鹽害率分別達到 59.09%和 73.86%。說明高濃度混合鹽脅迫已對種子萌發(fā)造成嚴重傷害,且高比例堿性鹽脅迫對茶花鳳仙種子的傷害程度遠高于低比例堿性鹽脅迫。
圖6 混合鹽脅迫下茶花鳳仙種子相對鹽害率的變化
參照劉海剛等[17]和張桂蓮等[22]的方法,將茶花鳳仙種子的相對發(fā)芽率與混合鹽濃度進行曲線回歸分析,以進一步明確茶花鳳仙種子萌發(fā)階段對2種配比混合鹽脅迫的耐受程度。結果表明:A、B處理組的相對發(fā)芽率與混合鹽濃度之間均呈良好的線性函數(shù)關系,其最優(yōu)線性函數(shù)方程分別為yA=108.002-0.485x1,yB=112.224-0.615x2,其中yA和yB分別表示A、B處理組的相對發(fā)芽率;x1和x2表示混合鹽濃度。由最優(yōu)線性函數(shù)方程求得茶花鳳仙種子對A處理組(NaCl∶Na2SO4∶NaHCO3∶Na2CO3= 1∶1∶1∶1,pH=9.56)和B處理組(NaCl∶Na2SO4∶NaHCO3∶Na2CO3=0∶0∶1∶1,pH=10.68)的耐鹽適宜濃度分別為68.05 mmol·L-1和60.53 mmol·L-1,耐鹽半致死濃度分別為119.59 mmol·L-1和101.18 mmol·L-1,耐鹽極限濃度分別為202.07 mmol·L-1和166.22 mmol·L-1。
種子萌發(fā)是一個復雜的生理變化過程,除了受自身生物學特性影響外,還易受到環(huán)境脅迫因素的影響[24],其中鹽堿脅迫是影響種子正常萌發(fā)和出苗的關鍵因素之一[25-26]。當種子受到鹽堿逆境脅迫時,萌發(fā)指標受抑,常表現(xiàn)為種子萌發(fā)時間滯后、發(fā)芽率下降,甚至種子完全失活而致死[22,25]。本研究結果表明,pH值為9.56和10.68的2種混合鹽脅迫均不同程度地抑制了茶花鳳仙種子的萌發(fā),推遲了種子的初始萌發(fā)時間,這可能是茶花鳳仙種子在初始萌發(fā)階段,由于鹽濃度的突然增加,致使種子周圍的水勢下降,胚細胞吸水困難[27],進而使種子的初始萌發(fā)時間滯后[17,28],也可能是鹽脅迫引發(fā)種子暫時進入淺度休眠狀態(tài)[22],以此來緩解鹽脅迫帶來的傷害。但在較低濃度的混合鹽脅迫(≤90 mmol·L-1)條件下,A(pH=9.56)、B(pH=10.68)處理組的種子均在第2天迅速萌發(fā),并與對照同時達到萌發(fā)高峰期,而高濃度(120 mmol·L-1)混合鹽脅迫則延遲了2個處理組萌發(fā)峰值的來臨。出現(xiàn)種子迅速萌發(fā)現(xiàn)象可能是隨著脅迫時間的延長,滲入種子中的鹽離子相對降低了胚細胞周圍的滲透勢,進而加速種子吸水而促進萌發(fā)[29],這可能是茶花鳳仙種子適應復雜鹽堿逆境的一種自我調節(jié)機制。對未萌發(fā)種子解除混合鹽脅迫后發(fā)現(xiàn),A處理組(pH=9.56)的部分種子仍能恢復萌發(fā),而B處理組(pH=10.68)的種子僅萌發(fā)1粒,幾乎喪失了生活力。分析其原因認為,pH值為9.56的混合鹽脅迫對部分茶花鳳仙種子產(chǎn)生的抑制作用主要由滲透效應而引起,并非鹽離子毒害作用所致,一旦解除鹽脅迫,復水后的種子其內(nèi)外滲透勢就會恢復相對平衡,進而使種子迅速恢復萌發(fā)[22];而高pH值混合鹽脅迫可能已對茶花鳳仙種子的萌發(fā)產(chǎn)生永久性抑制作用(離子毒害作用),致使種子生活力完全喪失[22]。但也有研究表明,適宜鹽濃度能夠促進種子萌發(fā),只有超過耐受閾值時才會受到抑制[30-31]。本研究結果表明,在混合鹽濃度為30 mmol·L-1時,A(pH=9.56)、B(pH=10.68)處理組,茶花鳳仙種子發(fā)芽率均略高于對照,呈“低促高抑”的現(xiàn)象,且在相同濃度(90,120 mmol·L-1)的高鹽脅迫條件下, B(pH=10.68)處理組對茶花鳳仙種子萌發(fā)的抑制作用要強于A處理組(pH=9.56)。這說明茶花鳳仙種子對pH=9.56和鹽濃度30 mmol·L-1的萌發(fā)條件比較適應,并且在鹽堿混合脅迫下,茶花鳳仙種子不僅受到鹽濃度的影響,而且還受到高pH值的協(xié)同作用[31-33]。這與前人的研究結果略有不同,姜云天等[17]的研究表明,NaCl脅迫處理下,茶花鳳仙種子各項萌發(fā)指標均較對照有所下降,并未出現(xiàn)“低促高抑”現(xiàn)象,而祖悅[18]和張曉軍等[19]的研究結果得出,混合鹽脅迫處理下茶花鳳仙種子發(fā)芽勢呈“低促高抑”的變化規(guī)律。這也說明植物種子的耐鹽性因鹽濃度、鹽脅迫類型、pH值等因素的不同而各異。
通過建立的最優(yōu)函數(shù)方程來求出茶花鳳仙種子萌發(fā)期對鹽堿混合脅迫的耐受值,其結果更加準確科學。本研究結果表明,茶花鳳仙種子對2種配比混合鹽脅迫的耐受性存在較大差異,其對A、B處理組的耐鹽適宜濃度分別為68.05 mmol·L-1、60.53 mmol·L-1,耐鹽半致死濃度分別為119.59 mmol·L-1、101.18 mmol·L-1,耐鹽極限濃度分別為202.07 mmol·L-1、166.22 mmol·L-1,由此可見,茶花鳳仙種子對低比例堿性鹽脅迫(pH=9.56)的耐受性強于高比例堿性鹽脅迫(pH=10.68)。經(jīng)與前期研究結果[17]相比發(fā)現(xiàn),茶花鳳仙種子對單一鹽脅迫(NaCl)的耐受性強于混合鹽脅迫,這也進一步說明2種配比的堿性鹽脅迫下種子的萌發(fā)不僅受到混合鹽濃度的影響,而且還與高pH值的作用相關。以上結果表明,茶花鳳仙種子無論對單鹽還是混合鹽均具有一定的耐受性,因此,在生產(chǎn)實際中可根據(jù)鹽堿地類型有選擇地播種。