于鑫，韋霞，馮嬋，范倩，王思玉，章衛(wèi)民，張翠仙

(1. 廣州中醫(yī)藥大學中藥學院，廣東 廣州 510006； 2. 華南應(yīng)用微生物國家重點實驗室∥廣東省菌種保藏與應(yīng)用重點實驗室∥ 廣東省微生物應(yīng)用新技術(shù)公共實驗室∥廣東省微生物研究所，廣東 廣州 510070)

海洋放線菌由于其獨特的生理和代謝功能成為海洋微生物活性天然產(chǎn)物的重要來源。海洋放線菌中鏈霉菌屬研究最廣泛，結(jié)構(gòu)類型涉及生物堿、聚酮、萜類、甾體和鹵代物聚醚等，生理活性涉及抗腫瘤、抗菌、抗瘧及寄生蟲等[1-7]。為了繼續(xù)尋找新的克服腫瘤耐藥活性次生代謝產(chǎn)物[8-10]，本課題對分離自南海沉積物中的新凱撒鏈霉菌Streptomycesnovaecaesareae次生代謝產(chǎn)物進行分離，共得到10個化合物，其結(jié)構(gòu)依次為環(huán)(4-羥基-L-脯-D-苯丙)二肽(1)、環(huán)(4-羥基-L-脯-L-苯丙)二肽(2)、環(huán)(4-羥基-L-脯-D-脯)二肽(3)、環(huán)(4-羥基-L-脯-L-亮)二肽(4)、環(huán)(L-脯-L苯丙)二肽(5)、環(huán)(L-亮-L-脯)二肽(6)、環(huán)(D-脯-L-亮)二肽(7)、環(huán)(8-羥基-L-脯-D-異亮)二肽(8)、N-(4-氧代戊基)-乙酰胺(9)和鄰苯二甲酸二丁酯(10)(圖1)?；衔?-9為葉立德類化合物，且1、3和7含有自然界中不常見的D構(gòu)型氨基酸。所有化合物均首次從Streptomycesnovaecaesareae中分離得。

圖1 來源于Streptomyces novaecaesareae化合物1-10Fig.1 Compounds1-10fromStreptomyces novaecaesareae

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

1.1.1 菌株 放線菌Streptomycesnovaecaesareae由廣東省微生物研究所饋贈，分離自中國南海北部(E 111°10.442′、N 18°52.730′)海底沉積物。菌種保存于廣州中醫(yī)藥大學中藥學院海洋天然藥物實驗室(編號：線-章-SS9)。

儀器：Bruker AVANCE III HD 400型核磁共振儀器(德國Bruker公司)；AB SCIEX TripleTOFTM 5600+四極桿-飛行時間串聯(lián)質(zhì)譜(美國AB SCIEX公司)；軌道阱高分辨液-質(zhì)聯(lián)用儀(美國Thermo Fisher公司)；半制備高效液相色譜(HPLC)儀器(北京慧得易科技有限公司)；MCP 200數(shù)字式旋光儀(奧地利AntonPaar公司)。LX-B75L型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌鍋(合肥華泰醫(yī)療設(shè)備有限公司)；超凈工作臺(單人)(蘇州凈化設(shè)備廠)；HYG-A全溫搖瓶柜(太倉市試驗設(shè)備廠)；DZ-900振蕩器(太倉市強樂試驗設(shè)備廠)；恒溫水浴鍋(鞏義市予華儀器有限責任公司)；WFH-201B紫外透射反射儀(上海精科實業(yè)有限公司)；ER-120A電子分析天平(日本A&D公司)。

1.1.2 材料與試劑 色譜柱1：Luna (5 μm C18 100 ?，4.6 mm×100 mm(美國Phenomenex公司)、色譜柱2：Kromasil 100-5-C18 5 μm，10 mm×250 mm(瑞典AKZO NOBEL公司)和色譜柱3：YMC-Pack ODS-A/S 5 μm/12 nm，250 mm×10.0 mm(日本YMC公司)；Sephadex LH-20 葡聚糖凝膠(GE醫(yī)療集團)；ODS-A-HG填料(50 μm、日本YMC公司)；Amberlite ( XAD-7樹脂(20～60目，美國Sigma公司)；乙醇、甲醇、乙酸乙酯、氯仿和正丁醇(AR，天津市富宇精細化工有限公司)；甲醇和乙腈(色譜純，康科德公司)；酵母膏和蛋白胨(BR，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)，瓊脂粉(AR，廣東環(huán)凱微生物科技有限公司)；可溶性淀粉(AR，天津市大茂化學試劑廠)；速溶海水結(jié)晶海鹽(佛山市海富生物科技有限公司)；TLC預(yù)制板和硅膠(200～300目，青島海洋化工廠)。

1.1.3 A1培養(yǎng)基(1 L) 可溶性淀粉w=1%，酵母浸膏w=0.4%，蛋白胨w=0.2%，海鹽w=2.48%，121 ℃滅菌25 min，冷卻后備用。

1.2 微生物的發(fā)酵培養(yǎng)

1.2.1 菌種活化 放線菌Streptomycesnovaecaesareae種子活化培養(yǎng)基采用A1培養(yǎng)基。將適量純化菌種接種于培養(yǎng)瓶(30 mL A1/100 mL)，置于搖床上培養(yǎng)24 h(28 ℃、165 r/min)。

1.2.2 規(guī)模發(fā)酵 按一定接種量(2%/L培養(yǎng)基)接種于培養(yǎng)瓶中(1 L A1培養(yǎng)基/3 L培養(yǎng)瓶)，搖瓶培養(yǎng)7 d(28 ℃、165 r/min)。共發(fā)酵培養(yǎng)36 L。

1.3 微生物的提取與分離

生長7 d后的微生物加入XAD-7樹脂(4 g/L)，繼續(xù)振搖3～4 h后紗布過濾，分別得到菌體(含XAD-7樹脂)和發(fā)酵液。

1.3.1 菌體部分 將菌體部分(XAD-7樹脂)加丙酮振搖1 h/次(1 L丙酮/次，3次)，紗布過濾得丙酮液。丙酮液減壓濃縮至無丙酮味，加水成水懸液，等體積EtOAc萃取3次，萃取液減壓濃縮得菌體EtOAc相(5.0 g)。

1.3.2 發(fā)酵液部分 菌液恒溫水浴鍋濃縮至6 L，等體積EtOAc萃取3～5次，EtOAc相合并減壓濃縮得菌液EtOAc提取物(3.0 g)。

菌體EtOAc相(5.0 g)采用Sephadex LH-20凝膠柱層析(柱長:1 m，直經(jīng):4 cm)純甲醇洗脫，運用TLC薄層色譜進行合并，共得7個流份Fr1-7。Fr2(2.24 g)經(jīng)過ODS層析柱(50 μm/12 nm)，采用甲醇水(甲醇∶水=56∶44～100∶0,V/V)梯度洗脫，經(jīng)過TLC追蹤合并為8個子流份Fr2-1-Fr2-8。Fr2-1(580 mg)經(jīng)半制備HPLC(色譜柱3, 0～40 min，乙腈∶水=20∶80～100∶0,V/V, 流速1 mL/min)梯度洗脫，分離純化得Fr2-1-1- Fr2-1-19。Fr2-1-15(tR=28.2 min, 28 mg)為化合物6、Fr2-1-17(tR=29.8 min, 14 mg)為化合物5。Fr2-1-4(29 mg)再次經(jīng)半制備HPLC純化(色譜柱2, 0～25 min, 甲醇∶水=20∶80～70∶30,V/V, 流速1 mL/min)梯度洗脫，得到化合物9(tR=22 min, 4.5 mg)。Fr2-1-9(44 mg)經(jīng)HPLC(色譜柱2, 甲醇∶水=40∶60,V/V, 流速1 mL/min)等度洗脫，純化得到化合物4(tR=36 min, 27 mg)和1(tR=38 min, 3.2 mg)。Fr2-1-11(28 mg) 經(jīng)半制備HPLC(色譜柱2, 甲醇∶水=44∶56,V/V, 流速1 mL/min)等度洗脫，純化得到化合物2(tR=29 min, 5 mg)。Fr2-1-13(23 mg)經(jīng)半制備HPLC(色譜柱2, 甲醇∶水=33∶67,V/V,流速1 mL/min)等度洗脫，得到Fr2-1-13-3(9 mg)，再純化得到(色譜柱2, 乙腈∶水=31∶69,V/V, 流速1 mL/min)得到化合物7(tR=17.9 min, 3.2 mg)和8(tR=19 min, 2.3 mg)。Fr2-1-2(145 mg)經(jīng)半制備HPLC純化(色譜柱2, 甲醇∶水=23∶77,V/V,流速1 mL/min)等度洗脫，得到化合物3(tR=17 min, 3 mg)。對Fr2-8(545 mg)經(jīng)半制備HPLC(色譜柱2, 乙腈∶水=80∶20,V/V, 流速1 mL/min)等度洗脫，純化得到化合物10(tR=48.8 min, 4 mg)。

1.4 物理常數(shù)與波譜數(shù)據(jù)

化合物1：淡黃色固體(甲醇)，[α]20D+41.17° (c=0.08, MeOH), ESI-MS:m/z261[M+H]+, 分子式為C14H16N2O3;1H NMR (400 MHz, CD3OD)δH: 4.21 (2H, brs, H-4/6), 7.19 (2H, m, H-2′), 7.29 (3H, m, H-3′, H-4′), 3.18 (1H, dd,J=13.6, 5.2 Hz, H-10a), 2.99 (1H, dd,J=13.6, 4.4 Hz, H-10b), 2.22(1H, m, H-5a), 1.89(1H, m, H-5b), 3.59 (1H, m, H-3a)、3.27～3.24 (1H, m, H-3b);13C NMR (100 MHz, CD3OD)δC: 167.7 (C-1), 54.0(C-3), 68.5(C-4), 38.0(C-5), 59.6(C-6), 171.0(C-7), 57.2(C-9), 40.9(C-10), 136.8(C-1′), 129.7(C-2′), 131.2(C-3′), 128.5(C-4′)。

化合物2：淡黃色固體(甲醇)，[α]20D-78.90° (c=0.1, MeOH), ESI-MS:m/z261[M+H]+, 分子式為C14H16N2O3;1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 4.48(1H, brt,J=4.4 Hz, H-9), 4.36 (1H, dd,J=11.6, 5.6 Hz, H-6), 2.06 (1H, dd,J=12.8, 6.0 Hz, H-5a), 1.34 (1H, dt,J=12.8, 4.8 Hz, H-5b), 4.27(1H, t,J=5.2 Hz, H-4), 3.70 (1H, dd,J=13.2, 4.8 Hz, H-3a), 3.30(1H, m, H-3b), 3.17 (2H, m, H-10), 7.21～7.29(5H, m, H-2′, H-3′, H-4′);13C NMR(100 MHz, CD3OD)δC: 167.1 (C-1), 55.2(C-3), 68.5(C-4), 38.0(C-5), 58.3(C-6), 171.2(C-7), 57.6(C-9), 38.8(C-10), 137.4(C-1′), 129.5(C-2′), 131.0(C-3′), 128.1(C-4′)。

化合物3：白色無定形固體(甲醇)，[α]20D-24.22° (c=0.06, H2O), ESI-MS:m/z249[M+ K]+,分子式為C10H14N2O3;1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 4.49(1H, t,J=4.0 Hz, H-9), 4.61(1H, dd,J=11.2, 5.6 Hz, H-6), 4.39(1H, brt,J=6.8 Hz, H-4), 3.63(1H, dd,J=12.8, 3.2 Hz, H-3a), 3.45(1H, d,J=12.8, Hz, H-3b), 3.51(2H, m, H-12), 2.29(1H, m, H-5a), 2.02(1H, m, H-5b), 2.26(1H, m, H-10a), 2.14(1H, m, H-10b), 2.06(1H, m, H-11a), 1.96(1H, m, H-11b);13C NMR(100 MHz, CD3OD)δC: 168.7 (C-1), 54.8C-3), 69.6(C-4), 37.7(C-5), 60.2(C-6), 168.8(C-7), 46.2(C-9), 24.2(C-10), 28.7(C-11), 61.7(C-12)。

化合物4：白色粉末(甲醇)，[α]20D-117.6° (c= 0.48, MeOH), ESI-MS:m/z227[M+H]+, 分子式為C11H18N2O3。1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 0.96(3H, d,J=6.4 Hz, H-12), 0.97(3H, d,J=6.4 Hz, H-13), 1.52(1H, m, H-10b), 1.92(2H, m, H-10a和H-11), 2.09(1H, ddd,J=13.6, 11.6, 4.0 Hz, H-5b), 2.28(1H, dd,J=13.2, 6.0 Hz, H-5a), 3.44(1H, d,J=12.8 Hz, H-3a), 3.66(1H, dd,J=12.4, 2.0 Hz, H-3b), 4.18(1H, m, H-9), 4.47(1H, t,J=4.0 Hz, H-4), 4.53(1H, dd,J=8.8, 7.2 Hz, H-6);13C NMR(100 MHz, CD3OD)δC: 169.0 (C-1), 54.6(C-3), 69.1(C-4), 38.1(C-5), 58.7(C-6), 173.0(C-7), 55.1(C-9), 39.3(C-10), 25.7(C-11), 23.3(C-12), 22.2(C-13)。

化合物5：白色粉末(甲醇)，[α]20D-49.9° (c= 0.24, MeOH), ESI-MS:m/z283 [M+K]+, 分子式為C14H16N2O2。1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 7.26(5H, m, H-2′, H-3′, H-4′), 4.44(1H, t,J=4.0 Hz, H-9), 4.06(1H, dd,J=10, 6.8 Hz, H-6), 3.52(1H, m, H-3a), 3.37(1H, m, H-3b), 3.16(2H, d,J=4.4 Hz, H-10), 2.27(1H, m, H-5a), 1.21(1H, m, H-5b), 2.09(1H, m, H-4a), 1.82(1H, m, H-4b);13C NMR(100 MHz, CD3OD)δC: 166.9 (C-1), 46.0(C-3), 22.8(C-4), 29.4(C-5), 60.1(C-6), 170.9(C-7), 57.7(C-9), 38.2(C-10), 137.3(C-1′), 131.0(C-2′), 129.4(C-3′), 128.1(C-4′)。

化合物6：白色粉末(甲醇)，[α]20D-102.97° (c=0.10, EtOH), ESI-MS:m/z211[M+ H]+, 分子式為C11H18N2O2。1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 4.26(1H, t,J=7.2 Hz, H-6), 4.12(1H, t,J=5.6 Hz, H-9), 3.50(2H, t,J=6.4 Hz, H-3), 2.29(1H, m, H-5a), 2.01(2H, m, H-5b, H-10a), 1.91(2H, m, H-4), 1.51(1H, m, H-10b), 1.35(1H, m, H-11), 0.96(3H, s,H-12), 0.94(3H, s, H-13)；13C NMR(100 MHz, MeOD)δC: 172.8 (C-1), 46.4(C-3), 23.6(C-4), 29.1(C-5), 60.3(C-6), 168.9(C-7), 54.6(C-9), 39.4(C-10), 25.7(C-11), 23.3(C-12), 22.2(C-13)。

化合物7：白色粉末(甲醇)，[α]20D+27.1° (c=0.05, EtOH), ESI-MS:m/z211 [M+ H]+, 分子式為C11H18N2O2。1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 3.58(1H, m, H-3a), 3.50(1H, m, H-3b), 2.03(1H, m, H-4a), 2.35(1H, m, H-4b), 1.95(2H, m, H-5), 3.85(1H, m, H-9), 4.28(1H, t,J=13.6 Hz, H-6), 1.78(1H, m, H-10a), 1.69(1H, m, H-10b), 1.60(1H, m, H-11), 1.01(3H, d,J=6.8 Hz, H-12), 0.98(3H, d,J=6.0 Hz, H-13)；13C NMR(100 MHz, MeOD)δC: 171.6 (C-1), 43.6(C-3), 23.1(C-4), 29.9(C-5), 59.3(C-6), 169.1(C-7), 57.1(C-9), 46.7(C-10), 25.5(C-11), 22.9(C-12), 23.3C-13)。

化合物8：無色晶體(甲醇)，[α]20D-43.08° (c=0.04, MeOH), ESI-MS:m/z227 [M+ H]+, 分子式為C11H18N2O3。1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 4.22(1H, t,J=6.8 Hz, H-9), 4.08(1H, s, H-6), 3.56(1H, m, H-3a), 3.52(1H, m, H-3b), 2.36～2.31(1H, m, H-5a), 2.19-2.16(1H, m, H-10), 2.07-2.02(1H, m, H-4a), 1.98～1.90(1H, m, H-4b), 2.00-1.93(1H, m, H-5b), 1.45(1H, m, H-11a), 1.38(1H, m, H-11b), 1.08(3H, d,J=6.8 Hz, H-13), 0.95(3H, d,J=7.2 Hz, H-12);13C NMR(100 MHz, CD3OD)δC: 172.4 (C-1), 46.2C-3), 23.2(C-4), 29.5(C-5), 61.3(C-6), 167.6(C-7), 60.0(C-9), 37.1(C-10), 25.4(C-11), 12.6(C-12), 15.5(C-13)。

化合物9：無色固體(甲醇)，ESI-MS:m/z144 [M+ H]+, 分子式為C7H13NO2。1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 3.14(2H, t,J=6.8 Hz, H-4), 2.52(2H, t,J=7.2 Hz, H-6), 2.13(3H, s, H-8), 1.92(3H, s, H-1), 1.72(2H, m, H-5);13C NMR(100 MHz, CD3OD)δC: 22.3 (C-1), 173.3(C-2), 39.7(C-4), 24.5(C-5), 41.3(C-6), 211.0(C-7), 29.8(C-8)。

化合物10：白色固體(甲醇)，ESI-MS:m/z279 [M+ H]+, 分子式為C16H22O4。1H NMR(400 MHz, CD3OD)δH: 7.73(2H, dd,J=3.2, 5.2 Hz, H-3,6), 7.63(2H, dd,J=3.2, 5.2 Hz, H-4,5), 4.30(4H, t,J=6.4 Hz, H-8,8′), 1.73(4H, m, H-9,9′), 1.47(4H, m, H-10,10′), 0.99(6H, t,J=7.2 Hz, H-11,11′);13C NMR(100 MHz, CD3OD)δC: 133.6(C-1,2), 129.9(C-3,6), 132.4(C-4,5), 169.3(C-7,7′), 66.7(C-8,8′), 31.7(C-9,9′), 25.3(C-10,10′), 14.1(C-11,11′)。

2 結(jié)果與討論

化合物1淡黃色固體(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為260(m/z261[M+H]+)，結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C14H16N2O3，不飽和度為8。1H NMR中δH7.19 (2H, m)、7.29 (3H, m)推測其苯環(huán)位置為單取代，結(jié)合δH3.18 (1H, m, H-10a)、2.99 (1H, m, H-10b)顯示有苯丙氨酸片段；δH4.21 (2H, brs, H-4/6)、3.59 (1H, m, H-3a)、3.27～3.24 (1H, m, H-3b)顯示有羥脯氨酸片段，同時13C NMR中δC167.7 (C-1)和171.0(C-7)為兩個酰胺碳信號，提示1為可能為葉立德類化合物，結(jié)合其旋光值[α]20D+41.17° (c=0.08, MeOH)，以上數(shù)據(jù)與文獻環(huán)(4-羥基-L-脯-D-苯丙)二肽[11]對照基本一致，故確定1為環(huán)(4-羥基-L-脯-D-苯丙)二肽。

化合物2淡黃色固體(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為260(m/z261[M+H]+)，結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C14H16N2O3，不飽和度為8。與化合物1的NMR其數(shù)據(jù)對比，發(fā)現(xiàn)與1十分相似，僅在δC55.2(C-3), 38.8(C-10)有差異。且2的比旋光度值[α]20D-78.90° (c=0.1, MeOH)與1完全不同，以上數(shù)據(jù)與文獻(4-羥基-L-脯-L-苯丙)二肽[11-12]對照基本一致，故確定其為環(huán)(4-羥基-L-脯-L-苯丙)二肽。

化合物3白色無定形固體(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為210(m/z249[M+K]+)。結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C10H14N2O3，不飽和度為5。與化合物1的NMR對比，其中不同之處δH4.49(1H, t,J=4.0 Hz, H-9), 3.51(2H, m, H-12), 2.26(1H, m, H-10a), 2.14(1H, m, H-10b), 2.06(1H, m, H-11a), 1.96(1H, m, H-11b)為脯氨酸片段，結(jié)合其比旋光度值為[α]20D-24.22° (c=0.06, H2O)，以上數(shù)據(jù)與文獻環(huán)(4-羥基-L-脯-D-脯)二肽[11,13]對照基本一致，故確定其為環(huán)(4-羥基-L-脯-D-脯)二肽。

化合物4白色粉末(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為226(m/z227[M+H]+)。結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C11H18N2O3，不飽和度為4。與化合物1的NMR對比，主要差異在1H NMR中δH0.96(3H, d,J=6.4 Hz, H-12)、0.97(3H, d,J=6.4 Hz, H-13)、1.52(1H, m, H-10b)、1.92(2H, m, H-10a和H-11)、4.18(1H, m, H-9)為亮氨酸片段，其他信號基本相同，結(jié)合比旋光度值[α]20D-117.6° (c= 0.48, MeOH)與文獻報道環(huán)(4-羥基-L-脯-L-亮)二肽[12,14]對照基本一致，故確定其為環(huán)(4-羥基-L-脯-L-亮)二肽。

化合物5白色粉末(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為244(m/z283[M+K]+)，結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C14H16N2O2，不飽和度為8。其NMR數(shù)據(jù)與化合物2和3對比，其中化合物2中δH: 4.27(1H, t,J=5.2 Hz, H-4)為4位連羥基碳上氫信號，而在化合物5中δH: 2.27(1H, m, H-5a), 1.21(1H, m, H-5b)為脯氨酸4位亞甲基信號，對比其他信號發(fā)現(xiàn)其有苯丙氨酸片段與脯氨酸片段，以上數(shù)據(jù)與文獻環(huán)(L-脯-L-苯丙)二肽[15-16]對照基本一致，故確定其為環(huán)(L-脯-L-苯丙)二肽。

化合物6白色粉末(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為210(m/z211[M+H]+)，結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C11H18N2O2，不飽和度為4，其相對分子質(zhì)量與化合物4差16，可能為少一個氧原子，且不飽和度不變，其NMR數(shù)據(jù)與化合物4比較，其中δH1.91(2H, m, H-4)為脯氨酸4位沒有連羥基的亞甲基，所以為脯氨酸片段，結(jié)合其比旋光度值[α]20D-102.97° (c=0.10, EtOH)，與文獻環(huán)(L-亮-L-脯)二肽[17]對照基本一致，故確定6為環(huán)(L-亮-L-脯)二肽。

化合物7白色粉末(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為210(m/z211[M+H]+)，結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C11H18N2O2，不飽和度為4。1H NMR中δH1.95(2H, m, H-5)比化合物6中5位信號稍小，δH4.28(1H, t,J=13.6 Hz, H-6)偶合常數(shù)比化合物6中δH4.26(1H, t,J=7.2 Hz, H-6)中偶合常數(shù)小，其余信號與化合物6基本一致，推測7與化合物6為一對手性化合物，且比旋光度值[α]20D+27.1° (c=0.05, EtOH)與化合物6相反，以上數(shù)據(jù)與文獻環(huán)(D-脯-L-亮)二肽[18]對照基本一致，故確定7為環(huán)(D-脯-L-亮)二肽。

化合物8無色晶體(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為226(m/z227[M+H]+)，結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C11H18N2O3，不飽和度為4。其相對分子質(zhì)量與化合物4一致，且不飽和度也一致，推測其與化合物4是羥基連接位置不同，其MNR中δH4.22(1H, t,J=6.8 Hz, H-9), 2.19～2.16(1H, m, H-10)、1.45(1H, m, H-11a), 1.38(1H, m, H-11b), 1.08(3H, d,J=6.8 Hz, H-13), 0.95(3H, d,J=7.2 Hz, H-12)為異亮氨酸片段，與化合物4對比其脯氨酸上未連有羥基，推測羥基可能連接在7位氮上，以上數(shù)據(jù)與文獻環(huán)(8-羥基-L-脯-D-異亮)二肽[19]對照基本一致。故確定8為環(huán)(8-羥基-L-脯-D-異亮)二肽。

化合物9無色固體(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為143(m/z144[M+H]+)，結(jié)合1H及13C NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C7H13NO2，不飽和度為2。1H NMR中δH3.14(2H, H-4), 2.52(2H, H-6), 1.72(2H, H-5)為三個相鄰的亞甲基，δH2.13(3H, H-8), 1.92(3H, H-1)為兩個甲基信號；13C NMR中δC173.3(C-2)為酰胺信號，δC211.0(C-7)為酮羰基信號。以上數(shù)據(jù)與文獻N-(4-氧代戊基)-乙酰胺[20]對照基本一致，故確定其為N-(4-氧代戊基)-乙酰胺。

化合物10白色固體(甲醇)，ESI-MS提示其相對分子質(zhì)量為278(m/z279[M+H]+)，結(jié)合NMR譜數(shù)據(jù)，推斷其分子式為C16H22O4，不飽和度為6。1H NMR中低場處δH7.73(2H, H-3,6), 7.63(2H, H-4,5)兩個芳香質(zhì)子信號，高場處一個甲基信號δH0.99(6H, H-11,11′)、兩個亞甲基信號δH1.73(4H, H-9,9′), 1.47(4H, H-10,10′)和一個連氧的亞甲基信號δH4.30(4H, H-8,8′)，結(jié)合13C NMR中給出8個碳信號以及質(zhì)譜給出相對分子質(zhì)量推測該化合物可能為對稱分子，因為有兩組芳香質(zhì)子信號所以為苯環(huán)臨位取代對稱分子結(jié)構(gòu)，結(jié)合NMR數(shù)據(jù)與文獻鄰苯二甲酸丁酯[21]對照基本一致，故確定其為鄰苯二甲酸丁酯。

化合物1-10均首次從放線菌Streptomycesnovaecaesareae該種中分離得到，且1、3首次從海洋放線菌中分離得到。1、3和7含有自然界中不常見的D構(gòu)型氨基酸。文獻檢索表明目前所報道的D構(gòu)型氨基酸組成的葉立德類化合物真菌來源的較多，且有文獻報道含有D構(gòu)型氨基酸的葉立德類化合物比含有L構(gòu)型的同類物質(zhì)生物活性好[11,22]，化合物1和2具有誘導煙草細胞產(chǎn)生H2O2的作用，且因為D-Phe構(gòu)型關(guān)系1的作用明顯強于2[11]?；衔?對RAW264.7細胞顯示出較好的生長抑制活性(IC50= 9.1 μmol/L)[23]，且對慢性粒細胞白血病細胞系K562也具有較強的細胞毒活性[24]。5能夠誘導J774A.1細胞增加分泌抗炎細胞因子IL-10，且還可以促進IFN-γ分泌，IFN-γ具有抗病毒、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤的特性[25]?；衔?和6具有良好的抗鰻弧菌Vibrioanguillarum活性(MIC為0.03～0.07 μg/mL)[26]。5和7對枯草芽胞桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌均具有抑制作用，且對大腸桿菌的抑制作用7與環(huán)丙沙星相當[18]。8具有抑制人胰腺癌細胞(PANC-1)的增殖作用[27]。

有文獻報道研究表明，微生物產(chǎn)生的環(huán)二肽類多作為胞間傳遞的信號分子，例如，環(huán)二肽分子cyclo(Phe-Pro)能夠刺激高絲氨酸內(nèi)酯信號傳遞途徑[28]，微生物可感知其濃度的變化，以調(diào)節(jié)微生物的群體行為。文獻 [29]研究發(fā)現(xiàn)，乳酸菌產(chǎn)生的cyclo(L-phe-L-pro)和cyclo(L- tyr-L-pro)可作為信號分子，調(diào)節(jié)乳酸菌和葡萄球菌之間細胞間信息交流，使內(nèi)源性或益生菌菌株可減弱病原菌產(chǎn)生的毒素因子?？梢娢⑸锂a(chǎn)生的環(huán)二肽作為信號分子在微生物群體行為具有很重要的作用。