唐 權(quán),劉 華,余清源,代 文

(利川市人民醫(yī)院檢驗科，湖北利川 445400)

非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)仍然是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因，盡管多學(xué)科治療方法有所改善，但整體5年生存率僅為15%左右[1]。大多數(shù)肺癌患者在診斷時患有晚期疾病，這通常與轉(zhuǎn)移和預(yù)后不良有關(guān)[2]。因此，對早期非小細(xì)胞肺癌的診斷尤為重要?；诖x組學(xué)，二乙酰精胺(DAS)最近被認(rèn)為是一種新型血清代謝物，在預(yù)診斷的NSCLC中具有顯著的性能[3]。Lemur酪氨酸激酶3(LMTK3)在人體內(nèi)參與神經(jīng)元中N-甲基-D-天冬氨酸受體的內(nèi)吞運輸[4]。XU等[5]認(rèn)為術(shù)前血清LMTK3是NSCLC患者的一種新型診斷和獨立預(yù)后生物標(biāo)志物。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔內(nèi)Ca2+結(jié)合蛋白78(GRP78)參與蛋白質(zhì)的正確折疊和錯誤折疊蛋白質(zhì)的降解。XIAO等[6]發(fā)現(xiàn)GRP78可能在非小細(xì)胞肺癌的癌發(fā)生中起重要作用，并且可能是非小細(xì)胞肺癌的預(yù)后標(biāo)志物。基于此，本研究旨在探討DAS、LMTK3、GRP78聯(lián)合檢測對早期非小細(xì)胞肺癌的診斷價值。

1 資料與方法

1.1一般資料 納入2016年3月至2018年3月本院收治的早期非小細(xì)胞肺癌患者30例為腫瘤組；其中男19例、女11例，年齡41～74歲；平均(57.25±14.71)歲；腫瘤直徑1.7～5.8 cm，平均(3.69±1.71)cm；分型：腺癌13例、鱗癌17例；TNM分期：Ⅱ期16例、Ⅲ期14例。納入2016年3月至2018年3月本院收治的肺部良性疾病患者30例，為良性組；其中男15例、女15例，年齡37～78歲；平均(52.98±15.77)歲；其中肺結(jié)核21例、肺炎9例。30例早期非小細(xì)胞肺癌患者和30例肺部良性疾病患者均經(jīng)本院病理科證實。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)嚴(yán)重心、肝、腎功能損害者；(2)長期使用皮質(zhì)類固醇激素及免疫抑制劑者；(3)患有精神疾病者；(4)經(jīng)過相關(guān)治療者；(5)患有其他癌癥者。同時，納入2016年3月至2018年3月至本院體檢的體檢健康者30例為健康對照組；其中男15例，女15例，年齡42～70歲；平均(51.49±15.10)歲。各組一般資料比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(0.05)，可納入此次分析。受試者均簽署知情同意書。

1.2方法

1.2.1酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 采取3組受試者的清晨肘前靜脈血6 mL，進行ELISA試驗。LMTK3和GRP78的ELISA試劑盒分別購自上海滬震實業(yè)有限公司(貨號：HZ-LMTK3-Hu)和上海彩佑實業(yè)有限公司(貨號：1219R)根據(jù)試劑盒的說明書進行ELISA試驗。

1.2.2靶向代謝組學(xué) 靶向代謝組學(xué)方法可以分析各種血液化合物，包括DAS。DAS質(zhì)荷比為287.243 7。合成DAS并使用MS進行分析?；谝韵?個標(biāo)準(zhǔn)：柱保留時間，同位素模式，MS碎裂和精確質(zhì)量，將血清中的化合物顯示出與合成DAS匹配的信息。DAS質(zhì)荷比為287.243 7。抽取3組人員清晨空腹肘前靜脈血6 mL，將樣本和信息交由上海中科新生命進行質(zhì)譜分析。

1.3統(tǒng)計學(xué)處理 RISM7.0軟件進行統(tǒng)計分析，多組間比較采用單因素方差分析，方差齊者采用LSD法比較，方差不齊者采用Tamhane′s T2法比較。應(yīng)用受試者工作特征(ROC)曲線下面積(AUC)分析DAS、LMTK3、GRP78檢測妊娠期高血壓疾病的臨床診斷價值。以P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.13組受試者血清中DAS、LMTK3、GRP78的表達(dá)量比較 腫瘤組患者血清中DAS、LMTK3、GRP78的表達(dá)量均顯著高于良性組患者和健康對照組(P<0.05)；良性組患者血清中DAS、LMTK3、GRP78的表達(dá)量顯著高于健康對照組(P<0.05)。見表1。

表1 3組受試者血清DAS、LMTK3、GRP78的 表達(dá)量比較

注：腫瘤組和良性組與健康對照組血清中DAS、LMTK3、GRP78的表達(dá)量比較,*P<0.05；腫瘤組與良性組血清中DAS、LMTK3、GRP78的表達(dá)量比較,#P<0.05

2.2腫瘤組患者與良性組患者DAS、LMTK3、GRP78的AUC、靈敏度、特異度和截斷值 為了評估DAS、LMTK3、GRP78在腫瘤組患者與良性組患者中的診斷價值，繪制腫瘤組癌患者和良性組患者的ROC曲線(圖1)。DAS的受試者工作特征曲線的AUC為(0.75±0.07，95%CI：0.606 4～0.887 0)，以DAS的陽性臨界值，其診斷靈敏度為73%，特異度為90%；LMTK3的受試者工作特征曲線的AUC為(0.74±0.07,95%CI：0.590 9～0.880 2)，以LMTK3的陽性臨界值，其診斷靈敏度為73%，特異度為90%；GRP78的受試者工作特征曲線的AUC為(0.77±0.07，95%CI：0.618 2～0.895 1)，以GRP78的陽性臨界值，其診斷靈敏度為77%，特異度為87%。見圖1。

圖1 腫瘤組癌患者與良性組患者DAS、LMTK3、 GRP78的ROC曲線

2.3腫瘤組患者與健康對照組DAS、LMTK3、GRP78的AUC、靈敏度、特異度和截斷值 為了評估DAS、LMTK3、GRP78在腫瘤組患者與健康對照組的診斷價值，繪制腫瘤組癌患者和健康對照組的ROC曲線(圖1)。DAS的受試者工作特征曲線的AUC為(0.83±0.06，95%CI：0.717 2～0.945 0)，以DAS的陽性臨界值，其診斷靈敏度為73%，特異度為90%；LMTK3的受試者工作特征曲線的AUC為(0.84±0.06，95%CI：0.735 3～0.951 3)，以LMTK3的陽性臨界值，其診斷靈敏度為83%，特異度為87%；GRP78的受試者工作特征曲線的AUC為(0.84±0.06，95%CI：0.735 5～0.953 4)，以GRP78的陽性臨界值，其診斷靈敏度為87%，特異度為87%。見圖2。

圖2 早期非小細(xì)胞肺癌患者與健康體檢者DAS、 LMTK3、GRP78的ROC曲線

2.4DAS、LMTK3、GRP78對早期非小細(xì)胞肺癌的聯(lián)合診斷 患有早期非小細(xì)胞肺癌的為真陽性，未患有早期非小細(xì)胞肺癌的為真陰性，DAS、LMTK3、GRP78聯(lián)合對早期非小細(xì)胞肺癌的診斷的靈敏度為76.67%(23/30)，特異度為83.33%(53/60)，準(zhǔn)確度為84.44%(76/90)。見表2。

表2 DAS、LMTK3、GRP78對早期非小細(xì)胞 肺癌的聯(lián)合診斷(n)

3 討 論

在世界范圍內(nèi)，肺癌是最致命的癌癥之一，占癌癥相關(guān)死亡人數(shù)的六分之一[7]。所有肺癌患者中只有15%在早期被診斷出來，導(dǎo)致生存率低[8]。 非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)是肺癌的主要類型，占所有肺癌的80%。 由于NSCLC常被診斷為晚期，因此患者無法進行有效治療，5年生存率<15%[9]?；诖耍狙芯恐荚谔接慏AS、LMTK3、GRP78聯(lián)合對早期非小細(xì)胞肺癌的診斷價值，并發(fā)現(xiàn)DAS、LMTK3、GRP78聯(lián)合對早期非小細(xì)胞肺癌的診斷的靈敏度為76.67%，特異度為83.33%，準(zhǔn)確度為84.44%。

DAS是精胺的乙?；苌?，一種眾所周知的多胺[10]。多胺是一種小陽離子分子，長期以來一直與調(diào)節(jié)正常細(xì)胞和癌細(xì)胞中的關(guān)鍵代謝酶有關(guān)。在本研究中，發(fā)現(xiàn)腫瘤組患者血清中DAS的水平均顯著高于良性組患者和健康對照組(P<0.05)；良性組患者血清中DAS的水平顯著高于健康對照組(P<0.05)。DAS的生物合成途徑尚未完全闡明。哺乳動物細(xì)胞的多胺輸出主要通過乙?；喟?。SLC3A2是一個已被鑒定轉(zhuǎn)運多胺的二胺轉(zhuǎn)運蛋白[11]，其能轉(zhuǎn)運DAS。同時，SLC3A2在非小細(xì)胞肺癌中的表達(dá)水平較高[12]。提示本研究中觀察到的腫瘤組患者血清DAS水平受到SLC3A2的影響。本研究發(fā)現(xiàn)早期腫瘤組患者與良性組患者的DAS的靈敏度和特異度分別為73%和90%；腫瘤組患者與健康對照組的DAS的靈敏度和特異度分別為77%和90%。盡管通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)DAS的靈敏度不夠突出，但是其高達(dá)90%的特異度在聯(lián)合診斷中起到重要作用。

GRP78的強烈誘導(dǎo)發(fā)生在許多惡性腫瘤中，包括前列腺癌、乳腺癌、肝細(xì)胞癌和結(jié)腸癌[13]。本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組患者血清中GRP78的表達(dá)量均顯著高于良性組患者和健康對照組(P<0.05)；良性組患者血清中GRP78的表達(dá)量顯著高于健康對照組(P<0.05)。WANG等[14]發(fā)現(xiàn)高水平的GRP78在高級別肺癌患者中更常見。提示非小細(xì)胞肺癌患者血清中GRP78水平的提高可能與肺癌的進程有關(guān)。GRP78經(jīng)常在幾種常規(guī)治療難以治愈的癌癥中過度表達(dá)[15]。因此，GRP78不僅可以作為診斷早期非小細(xì)胞肺癌的生物標(biāo)志物，而且也可作為預(yù)測治療反應(yīng)的良好生物標(biāo)志物。本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組患者與良性組患者的GRP78的靈敏度和特異度分別為77%和87%；腫瘤組患者與健康對照組的GRP78的靈敏度和特異度分別為87%和87%。顯示了較好的診斷效能。

LMTK3最近涉及幾種類型的癌癥，包括乳腺癌和胃癌，并且可能是這些癌癥中的新型生物標(biāo)志物[16]。本研究數(shù)據(jù)表明，腫瘤組患者血清中LMTK3的表達(dá)量均顯著高于良性組患者和健康體對照組(P<0.05)；良性組患者血清中LMTK3的表達(dá)量顯著高于健康對照組(P<0.05)。XU等[5]發(fā)現(xiàn)NSCLC患者的血清LMTK3水平升高，并且高水平的LMTK3與較差的存活率相關(guān)。提示血清LMTK3是NSCLC患者的獨立預(yù)后因素。本研究發(fā)現(xiàn)腫瘤組患者與良性組患者的LMTK3的靈敏度和特異度分別為73%和90%；腫瘤組患者與健康對照組的LMTK3的靈敏度和特異度分別為84%和87%。顯示了較好的診斷效能。最近的研究[17]顯示，LMTK3水平與組織學(xué)分化，腫瘤浸潤深度和TNM分期顯著相關(guān)。提示LMTK3除了可作為診斷早期非小細(xì)胞肺癌的生物標(biāo)志物，可能也是預(yù)測非小細(xì)胞肺癌患者腫瘤進展的潛在生物標(biāo)志物。綜上所述，血清中DAS、LMTK3、GRP78的表達(dá)量檢測可作為診斷早期非小細(xì)胞肺癌的潛在標(biāo)志。