劉忠輝 謝善松 饒寶蓉

摘 要 采用H2SO4、NaOH、GA3和2，4-D四種處理方法，研究不同因素不同處理方法對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響。結(jié)果表明，4種方法對七葉一枝花平均發(fā)芽率有顯著影響，并不同程度縮短種子萌動時間。其中50% H2SO4處理3 s最高發(fā)芽率為16.7%，萌動時間為120 d；10% NaOH處理30 min平均發(fā)芽率為23.3%，萌動時間為100 d； GA3 2 500 mg/L處理48 h平均發(fā)芽率為50%，萌動時間為53 d；2，4-D 20 mg/L處理72 h 平均發(fā)芽率為53.3%，種子萌動時間為105 d。

關(guān)鍵詞 七葉一枝花 ；發(fā)芽率 ；赤霉素 ；2，4-氯苯氧乙酸

中圖分類號 S567.23+9 文獻(xiàn)標(biāo)識碼 A Doi：10.12008/j.issn.1009-2196.2019.02.005

Abstract Seeds of Paris polyphylla were treated with four chemicals （H2SO4， NaOH， GA3 and 2，4-D） for different hours to observe their germination rates. The results showed that these 4 chemicals had significant effects on the average germination rate and shortened the seed germination time to different extents. The seeds treated with 50% H2SO4 for 3 s gave an average germination rate of 16.7%， and started their germination on day 120. The seeds treated with 10% NaOH for 30min had an average germination rate of 23.3%， and started their germination on day 100. The seeds treated with GA3 2500 ppm for 48 h had an average germination rate of 50%， and began to germinate on day 53. The seeds treated with 2，4-D 20 mg/L for 72 h had an average germination rate of 53.3%， and commenced to germination on day 105.

Keywords Paris polyphylla ； average germination rate ； GA3 ； 2，4-D

七葉一枝花（Paris polyphylla），別名蚤休、紫河車、草河車、華重樓、七葉蓮、鐵燈臺等，百合科重樓屬多年生草本植物，屬珍稀瀕危植物，在我國浙江、江蘇、江西、福建、安徽、湖北、四川、云南、廣西、貴州等地均有分布[1-2]。具有清熱解毒[3]、消腫止痛[4]、涼肝定驚之功效[5]，七葉一枝花除了是云南白藥季德勝蛇藥片、宮血寧膠囊的主要藥用成分之一之外[6-8]，它還廣泛用于多種中藥制劑中，如抗病毒顆粒、抗病毒沖劑、紅藥、熱毒清等重要中成藥，七葉一枝花作為抗腫瘤藥和婦科用藥的開發(fā)也具有良好的前景[9-11]。

七葉一枝花的種子發(fā)芽周期長，發(fā)芽率低，且種子具有休眠性，影響七葉一枝花種子萌發(fā)的因素有溫度、光照、內(nèi)源激素、外源生長調(diào)節(jié)劑、超聲波、紫外線等。對七葉一枝種子的育苗因素研究比較少[12-13]，利用有效的因素縮短七葉一枝花種子發(fā)芽周期和提高發(fā)芽率，是七葉一枝花產(chǎn)業(yè)的當(dāng)務(wù)之急。本文對七葉一枝花種子進(jìn)行不同因素試驗研究，探索影響七葉一枝花的發(fā)芽的因子，為七葉一枝花的生產(chǎn)種植提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

七葉一枝花種子、培養(yǎng)皿、紗布、光照培養(yǎng)箱、H2SO4、NaOH、GA3、2，4-D、50%多菌靈、純凈水。

1.2 方法

1.2.1 種子預(yù)處理

2015年9～10月，選5年生以上植株所結(jié)的飽滿成熟變紅果實(shí)，用網(wǎng)袋搓去果皮，洗凈，在太陽下曬2～3 d，挑出不飽滿的種子后裝到密封袋中，排除空氣，4℃冰箱保存。2016年3月份挑選飽滿七葉一枝花種子進(jìn)行如下處理試驗。

1.2.2 H2SO4對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響

采用50% H2SO4（V/V）處理七葉一枝花種子，共5個水平，分別浸泡3、15、30、60 s和2 min。

1.2.3 NaOH對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響

不同濃度NaOH和時間處理七葉一枝花種子，采用10%和30%的NaOH各處理15、30、45、60 min，共8個水平。

1.2.4 GA3對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響

不同濃度GA3和時間處理七葉一枝花種子，分別采用10、100、200、500、1 000和2 500 mg/mL的GA3處理48 h；2 500 mg/mL處理24 h；5 000 mg/mL處理24和48 h，共9個水平。

1.2.5 2，4-D對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響

不同濃度2，4-D和處理時間處理七葉一枝花種子，采用2，4-D 0.5、1、2、20 mg/L 4個濃度，分別處理24、48、72 h，共12個處理水平。

1.2.6 培養(yǎng)條件

每個水平用種量30粒，3次重復(fù)。CK采用純凈水浸泡48 h。上述不同處理后立即用純凈水沖洗3次，然后處理好的種子用50%的多菌靈浸泡10 min，然后用純凈水沖洗干凈后放置有濕紗布的培養(yǎng)皿中，放置在23℃，65%濕度恒溫培養(yǎng)，定期觀察，并及時補(bǔ)充純凈水，忌澆水太多。

1.2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析

記錄種子萌發(fā)情況，以胚根（或胚芽）開始膨大突破種皮視為萌動，記錄萌動時間，培養(yǎng)180 d統(tǒng)計種子萌發(fā)數(shù)，以胚根（或胚芽）長度≥5 mm視為萌發(fā)，種子萌發(fā)率（%）為萌發(fā)種子數(shù)占全部種子數(shù)的質(zhì)量分?jǐn)?shù)。采用SPSS 19.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和多重比較S-N-K檢驗。

2 結(jié)果和分析

2.1 H2SO4對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響

從表1可知，50%（V/V）H2SO4對七葉一枝花平均發(fā)芽率影響顯著。處理1的平均發(fā)芽率極最高為16.7%，極顯著（p≤0.01）高于處理2、3、4、5。50%H2SO4縮短了種子萌動時間30 d，平均發(fā)芽率除了處理1比CK提高了3.4%，其他處理均比CK低；并且隨著時間的增加，平均發(fā)芽率從16.7%逐漸較少到0。

2.2 NaOH對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響

從下表2可知，采用不同濃度NaOH和不同處理時間對七葉一枝花種子平均發(fā)芽率的影響達(dá)極顯著。七葉一枝花種子萌動時間基本在100～110 d，比對照CK縮短了40～50 d；平均發(fā)芽率最高的處理1和處理2為23.3%，比對照CK增加10%，極顯著高于其他處理和CK；最差的處理8為0；相同時間處理，10% NaOH比30% NaOH平均發(fā)芽率要高，而兩種濃度NaOH隨著浸泡時間的增加，七葉一枝花種子平均發(fā)芽率逐漸降低。

2.3 GA3對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響

從表3可知，GA3對七葉一枝花種子平均發(fā)芽率的影響顯著。處理6平均發(fā)芽率最高為50.0%，比CK提高了36.7%，種子萌動時間為53 d，比CK減少了97 d；同時可以看到隨著GA3濃度的增加，種子萌動時間逐漸減少，而平均發(fā)芽率隨著濃度的增加，平均發(fā)芽率逐漸增加到處理6的50%后又逐漸減少。

2.4 2，4-D對七葉一枝花種子發(fā)芽率的影響

從下表4可知，2，4-D對七葉一枝花種子平均發(fā)芽率的影響顯著。處理12平均發(fā)芽率最高為53.3%，比CK提高了40%，種子萌動時間為105 d，比CK減少了45 d；平均發(fā)芽率最低為16.7%，比CK僅多了3.4%，種子萌動時間比CK少了32 d；2，4-D的4種濃度均隨這七葉一枝花浸泡時間的增加種子萌動時間增長，平均發(fā)芽率沒有規(guī)律變化。

3 討論

適當(dāng)濃度的H2SO4處理七葉一枝花種子，種子發(fā)芽率提高不理想，并且隨著處理時間加長，發(fā)芽率逐漸降低，主要原因是H2SO4破環(huán)了種皮，導(dǎo)致七葉一枝花種子被霉菌感染的幾率增加而引發(fā)種子失活。所以在實(shí)際生產(chǎn)上不建議用化學(xué)或者物理方法破壞七葉一枝花的種皮，致使種子污染率增加。

NaOH影響七葉一枝花種子發(fā)芽率和萌動時間，采用10% NaOH處理種子10～15 min可以提高發(fā)芽率至23.3%，種子萌動時間縮短至100 d；增加NaOH的濃度和處理時間，會使種子發(fā)芽率降低，主要原因和H2SO4一樣，種子種皮被破壞，增加了霉菌感染幾率。所以在七葉一枝花實(shí)際生產(chǎn)上，適當(dāng)pH的堿性土壤有利于提高種子發(fā)芽率。

GA3對七葉一枝花種子平均發(fā)芽率的影響比較明顯，顯著提高種子發(fā)芽率和縮短種子萌動時間，這與王艷芳等赤霉素處理可提高滇重樓種子發(fā)根率和發(fā)根速度的研究結(jié)果一致[14]， 蘇海蘭等[15]研究表明，隨著發(fā)芽時間增長，GA3種子含量逐漸增加。其中處理6平均發(fā)芽率最高為50.0%，種子萌動時間為53 d；種子隨GA3濃度的增加萌動時間逐漸較少，從92 d減少到53 d；種子平均發(fā)芽率隨著GA3濃度和時間的增加顯現(xiàn)先增加后減少的結(jié)果。說明在七葉一枝花種子發(fā)芽過程中GA3具有促進(jìn)種子發(fā)芽的作用，而后期出現(xiàn)的平均發(fā)芽率減少是過高的GA3濃度抑制了種子的發(fā)芽。

2，4-D對七葉一枝花種子平均發(fā)芽率的影響比較顯著，它能提高種子發(fā)芽率，不能顯著較少種子萌動時間。采用20 mg/L浸泡72 h處理平均發(fā)芽率可達(dá)53.3%，而種子萌動時間為105 d，高于宋發(fā)軍用2，4-D誘導(dǎo)滇重樓種子，種子萌發(fā)率為37.9%[16]；隨著種子浸泡2，4-D時間的增加，增加了種子萌動時間；2，4-D濃度和時間的變化，平均發(fā)芽率呈不規(guī)律變化。

七葉一枝花種子發(fā)芽一個復(fù)雜的過程，外部的培養(yǎng)條件改變、內(nèi)源激素的變化、內(nèi)源酶的變化等條件都會影響種子的發(fā)芽，利用有效的因素縮短七葉一枝花種子發(fā)芽周期和提高發(fā)芽率，探索出一個最佳育苗方案是發(fā)展七葉一枝花產(chǎn)業(yè)的當(dāng)務(wù)之急，所以，對七葉一枝花育苗還需要做大量科研工作。

參考文獻(xiàn)

[1] 龔范武，羅先權(quán)，王 萍，等. 七葉一枝花種子育苗技術(shù)研究[J]. 湖南林業(yè)科技， 2014（01）： 50-53.

[2] 湯海峰，趙越平，蔣永培. 重樓屬植物的研究概況[J]. 中草藥， 1998（12）： 839-842.

[3] 張 玨，王躍華，楊 華，等. 華重樓研究現(xiàn)狀[J]. 時珍國醫(yī)國藥， 2013（01）： 196-198.

[4] 李小莉，陳紅琳，牟光敏. 七葉一枝花軟膏抗炎鎮(zhèn)痛作用研究[J]. 醫(yī)藥導(dǎo)報， 2007（02）： 139-140.

[5] 馬傳江，逯 雙，曹廣尚，等. 七葉一枝花繁育技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 中國實(shí)驗方劑學(xué)雜志， 2016（18）： 192-196.

[6] 王麗萍，起學(xué)偉. 云南重樓野生馴化及栽培技術(shù)研究初探[J]. 中國野生植物資源，2002（01）： 62-63.

[7] 王 嵐，陳仕學(xué)，姚元勇. 梵凈山七葉一枝花總黃酮含量測定[J]. 安徽農(nóng)學(xué)通報，2013（20）： 25-28.

[8] 邊洪榮，李小娜，王會敏. 重樓的研究及應(yīng)用進(jìn)展[J]. 中藥材， 2002（03）： 218-220.

[9] 武珊珊，高文遠(yuǎn)，段宏泉，等. 重樓化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展[J]. 中草藥，2004（03）： 110-113.

[10] 鹿洪秀，馬德東. 七葉一枝花提取物抗腫瘤生長及轉(zhuǎn)移的作用[J]. 山東醫(yī)藥，2013（45）： 33-34.

[11] 齊建紅. 七葉一枝花的藥學(xué)及臨床應(yīng)用研究進(jìn)展[J]. 園藝與種苗， 2012（01）： 69-72.

[12] 王艷芳，李 戈，唐 玲，等. 滇重樓種子萌發(fā)過程觀察及出苗影響因素研究[J]. 中藥材， 2017（09）： 2 022-2 025.

[13] 陳 翠，楊麗云，呂麗芬，等. 云南重樓種子育苗技術(shù)研究[J]. 中國中藥雜志，2007（19）： 1 979-1 983.

[14] 王艷芳，唐 玲，李榮英，等. 影響滇重樓種子萌發(fā)及胚根生長因素的研究[J]. 云南中醫(yī)學(xué)院學(xué)報， 2012（2）： 28-31.

[15] 蘇海蘭，周先治，李 希，等. 七葉一枝花種子萌發(fā)不同階段生理生化變化研究[J]. 中草藥， 2017（22）： 4 755-4 763.

[16] 宋發(fā)軍，羅 忠，黃 珍，等. 赤霉素處理對重樓種子萌發(fā)相關(guān)生理指標(biāo)的影響[J]. 中南民族大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2016（3）： 30-34.