胡西南，徐健龍，張?jiān)姾?，劉朝霞，劉呈雄，?凡，鄒 坤

三峽大學(xué) 生物與制藥學(xué)院 天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，宜昌 443002

湖北旋覆花Inulahupehensis(Ling)為菊科(Composite)旋覆花屬(Inula)多年生草本植物，又名六月菊、覆花、金佛草、金沸草[1]。主要分布在中國湖北神農(nóng)架和恩施地區(qū)，以及四川東部(巫山)[2]。在我國傳統(tǒng)中醫(yī)藥文化中，最早關(guān)于旋覆花的功效記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》：“主結(jié)氣脅下滿，驚悸。除水，去五臟間寒熱，補(bǔ)中，下氣”。是土家族的一種傳統(tǒng)中草藥，性味咸、溫。具有降氣、消痰、行水、止嘔等功效，主治咳嗽消痰、脅下脹滿大腹水腫、去頭目風(fēng)、泄散風(fēng)寒[3]。

該植物為我國特有品種，主要產(chǎn)于湖北恩施和神農(nóng)架，地理位置特殊，植物資源集中。湖北旋覆花的化學(xué)成分為倍半萜、黃酮、甾醇、百里酚以及多糖類化合物，倍半萜類為特征成分。國內(nèi)外大量研究顯示旋覆花屬植物倍半萜類成分在抗腫瘤、抗炎和治療糖尿病方面均具有良好的生物活性[4-8]，但關(guān)于抗結(jié)核方面的研究鮮有報(bào)道。據(jù)WHO統(tǒng)計(jì)，2016年全世界范圍內(nèi)每年約有1 040萬人感染結(jié)核并引起死亡[9]。結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌引起的一種慢性、消耗性傳染病。最早的抗結(jié)核藥物鏈霉素來自于放線菌，但近年來結(jié)核桿菌產(chǎn)生了耐藥性，現(xiàn)有抗結(jié)核藥物很難殺死耐藥菌株。因此，本文對(duì)湖北旋覆花化學(xué)成分及抗結(jié)核活性進(jìn)行了研究，對(duì)于開發(fā)其藥用資源，從天然產(chǎn)物中尋找新型抗結(jié)核桿菌活性物質(zhì)具有重大意義，也為以后該植物的藥用開發(fā)提供了參考依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 菌株

標(biāo)準(zhǔn)菌株人型結(jié)核分枝桿菌M.tuberculosisH37RV、牛分枝桿菌M.bovisBCG，均購于上海公共衛(wèi)生臨床中心。

1.2 主要試劑與儀器

柱層層析硅膠(批號(hào)：0370245青島海洋化工有限公司)；MCI GEL(批號(hào)：3E804日本三菱化學(xué))；色譜級(jí)甲醇(批號(hào)：17065112美國TEDIA 公司)；色譜級(jí)乙腈(批號(hào)：17065094美國TEDIA 公司)；分析級(jí)甲醇(批號(hào)：20140319國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；分析級(jí)石油醚(批號(hào)：20150930國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；分析級(jí)乙酸乙酯(批號(hào)：20170422天津科密歐化學(xué)試劑有限公司)；分析級(jí)丙酮(批號(hào)：2017111001成都市科隆化學(xué)品有限公司)；Middlebrook 7H9培養(yǎng)基(批號(hào)：271310美國BD公司)；吐溫80(批號(hào)：20170319國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；DMSO(批號(hào)：20170823國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；利福平(批號(hào)：H32021677常州制藥廠有限公司)。

Bruker AV 400核磁共振譜儀(瑞士布魯克公司)；SHIMADU LC-6AD高效液相色譜儀，(島津企業(yè)管理中國有限公司)；YMC-Pack ODA-A色譜柱(10 μm，250×10 mm半制備型；5 μm，250×4.6 mm分析型，日本YMC公司)；FreeZone 2.5 L低溫冷凍干燥機(jī)(美國Labconco公司)；Sartorius cp324s電子分析天平(上海梅特勒-托利多儀器有限公司)；GL-H-100C恒溫恒濕培養(yǎng)箱(德國BINDER公司)；Haier HR40-ⅡA2生物安全柜(上海恒勤儀器設(shè)備有限公司)；Unic 2000可見分光光度計(jì)(上海旦鼎國際貿(mào)易)；TOMY ss-325高壓滅菌鍋(北京久航潤達(dá)科技有限公司)。

1.3 藥材

2017年8月采自于湖北神農(nóng)架林區(qū)，經(jīng)三峽大學(xué)生物與制藥學(xué)院王玉兵副教授鑒定為湖北旋覆花(InulahupehensisLing)。植物標(biāo)本現(xiàn)保存于三峽大學(xué)天然產(chǎn)物研究與利用湖北省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取分離

取干燥旋覆花花序部分 4.51 kg，粉碎后用 95%乙醇浸提3次，每次12 h，提取液合并過濾，減壓蒸餾干燥得乙醇提取物 685.71 g，提取率為 15.2%。將乙醇提取物懸浮于水中，依次用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇萃取，得各部位萃取物：石油醚萃取物121.97 g、乙酸乙酯萃取物108.48 g、正丁醇萃取物43.74 g。

取石油醚萃取物浸膏37.64 g，經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以石油醚-丙酮溶劑系統(tǒng) (100∶1～1∶1)梯度洗脫，依據(jù)薄層色譜合并得20個(gè)組分 (Fr.1～20)。Fr.5進(jìn)行高效液相色譜半制備分離純化(乙腈-水=75∶25，2.5 mL/min)，得到化合物1(16.1 mg)、2(1.1 mg)。Fr.6經(jīng)MCI層析柱甲醇-水 (10∶90～1∶0)分離，得5個(gè)部分 (Fr6.1～5)。 Fr6.3經(jīng)甲醇重結(jié)晶得化合物3(64.9 mg)。Fr.7經(jīng)正相硅膠柱層析分離，石油醚-乙酸乙酯 (10∶1～1∶1)洗脫，進(jìn)行高效液相色譜半制備分離純化(乙腈-水=51∶49，2.5 mL/min)，得到化合物4(3.0 mg)、6(28.2 mg)、7(452.2 mg)、10(27.3 mg)。

取乙酸乙酯萃取物103.68 g，經(jīng)正相硅膠柱層析分離，以氯仿-甲醇溶劑系統(tǒng) (100∶1～1∶1)梯度洗脫，得15個(gè)組分IH.1-15。 IH.2經(jīng)正相硅膠柱石油醚-乙酸乙酯溶劑體系 (30∶1～1∶1)反復(fù)分離純化，經(jīng)高效液相色譜半制備分離純化(乙腈-水=40∶60，2.5 mL/min)，得到化合物5(85.3 mg)、8(22.6 mg)、9(28.4 mg)。

化合物結(jié)構(gòu)均采用質(zhì)譜(MS)、核磁共振(NMR)波譜方法鑒定，并與文獻(xiàn)對(duì)照確定化合物1～10的結(jié)構(gòu)。

2.2 肉湯二倍稀釋法考察體外抗結(jié)核分支桿菌增殖抑制活性

2.2.1 10%(v/v)的OADC的配置

H2O (375 mL)，GS(10 g)，NaCl(4.25 g)，Oleic acid (0.3 mL)，BSA (25 g)，上述試劑攪拌1 h直至完全溶解，調(diào)體積至500 mL，用0.22 μm無菌過濾器過濾，放于4 ℃保存。

2.2.2 接種菌株的準(zhǔn)備

試驗(yàn)菌株 H37Rv和 BCG 在 Middlebrook 7H9肉湯附加0.5% glycerol，0.25% 吐溫80和10% OADC 37 ℃培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長期(OD6000.6～1)，兩種培養(yǎng)物與足夠體積的滅菌Middlebrook 7H9 肉湯培養(yǎng)基混合，達(dá)到OD600為0.08，即為檢測用的菌液。

2.2.3 肉湯二倍稀釋法操作過程[10]

試驗(yàn)在 96 孔平底細(xì)胞培養(yǎng)板中進(jìn)行。設(shè)置空白、陽性對(duì)照、陰性對(duì)照。不同單體化合物平行檢測三次。加200 μL無菌蒸餾水到微板的外圍孔中，于第2列孔中加200 μL Middlebrook 7H9肉湯，繼續(xù)向第二列孔中注入各化合物溶液(100 μM)、陽性藥物利福平、陰性對(duì)照物DMSO，剩余孔中都增補(bǔ) 100 μL Middlebrook 7H9肉湯，留一行做空白對(duì)照，不加任何物質(zhì)只加培養(yǎng)基，對(duì)每列進(jìn)行系列二倍稀釋，100 μL菌懸液加到所有檢測孔中。被檢測溶液的最終濃度從 50 μM到0.78 μM。平板套上封閉的塑料袋在 37 ℃ 的培養(yǎng)箱中孵育7～9天，而后觀察濁度。無混濁現(xiàn)象的最低濃度定義為MIC。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3.1 化合物結(jié)構(gòu)式

圖1 化合物1～10的化學(xué)結(jié)構(gòu)Fig.1 The chemical structures of compounds 1-10

3.2 化合物結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1無色油狀物(CHCl3)，EI-MSm/z338 [M]+，分子式為C18H26O6；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:6.86 (1H,s,H-2),7.35 (1H,d,J=8.0 Hz,H-5),7.04 (1H,dd,J=8.0 Hz,H-6),3.02 (1H,d,J=4.0 Hz,H-8a),2.79 (1H,d,J=4.0 Hz,H-8b),4.57 (1H,d,J=12.0 Hz,H-9a),4.19 (1H,d,J=12.0 Hz,H-9b),2.34 (3H,s,H-10),2.51 (1H,dt,J=16.0,8.0,4.0 Hz,H-2′),1.09 (3H,d,J=8.0 Hz,H-3′),1.10 (3H,dd,J=16.0,8.0 Hz,H-4′),2.84 (1H,dt,J=16.0,8.0,4.0 Hz,H-2"),1.32 (3H,d,J=12.0 Hz,H-3"),1.32 (3H,d,J=12.0 Hz,H-4")；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:139.88 (C-1),122.93 (C-2),148.56 (C-3),125.96 (C-4),128.91 (C-5),126.70(C-6),56.89 (C-7),50.68 (C-8),64.83 (C-9),21.10 (C-10),176.39 (C-1′),33.82 (C-2′),18.99 (C-3′),18.99 (C-4′),175.30 (C-1"),34.17 (C-2"),18.87 (C-3"),18.83 (C-4")。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 7,8-epoxy-9-(isobutyryloxy)thymolisobutyrate。

化合物2無色油狀物(CHCl3)，EI-MSm/z334 [M]+，分子式為C19H26O5；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:6.87 (1H,s,H-2),7.35 (1H,d,J=8.0 Hz,H-5),7.04 (1H,d,J=8.0 Hz,H-6),2.34 (3H,s,H-7),2.78 (1H,d,J=4.0 Hz,H-9a),3.02 (1H,d,J=8.0 Hz,H-9b),4.06 (1H,d,J=12.0 Hz,H-10a),4.17 (1H,d,J=12.0 Hz,H-10b),2.84 (1H,m,H-2′),1.33 (3H,d,J=8.0 Hz,H-3′),1.33 (3H,d,J=8.0 Hz,H-4′),2.50 (1H,m,H-2"),1.59 (1H,m,J=8.0 Hz,H-3a"),1.41 (1H,m,H-3b"),0.80 (3H,t,J=8.0 Hz,H-4"),1.08 (3H,d,J=8.0 Hz,H-5")；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:139.89 (C-1),122.93 (C-2),148.56 (C-3),125.98 (C-4),128.92 (C-5),126.73 (C-6),21.11 (C-7),56.95 (C-8),50.64 (C-9),64.74 (C-10),176.01 (C-1′),34.19 (C-2′),19.01 (C-3′),18.90 (C-4′),175.33 (C-1"),40.85 (C-2"),26.59 (C-3"),16.45 (C-4"),11.37 (C-5")。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 10-(2-methylbutyloxy)-8,9-epoxythymolisobutyrate。

化合物3白色無定形固體(CHCl3)，EI-MSm/z390 [M]+，分子式為C29H48O；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:3.51 (m,H-3a),5.34 (d,J=4.0 Hz,H-7),0.76 (s,H-18),0.83 (s,H-19),5.15 (1H,t,J=12.0,8.0 Hz,H-21),5.01 (t,J=12.0,8.0 Hz,H-22),0.70 (d,J=8.0 Hz,H-25),0.78 (d,J=8.0 Hz,H-26),1.0 (d,J=8.0 Hz,H-28),1.0 (d,J=8.0 Hz,H-29)；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:137.20 (C-1),31.60 (C-2),71.80 (C-3),42.20 (C-4),140.70 (C-5),121.73(C-6),31.89 (C-7),31.92 (C-8),50.81 (C-9),36.58 (C-10),21.07 (C-11),39.62 (C-12),42.23 (C-13),56.83 (C-14),24.38 (C-15),28.91 (C-16),55.92 (C-17),12.07 (C-18),19.45 (C-19),40.51 (C-20),21.22 (C-21),138.31 (C-22),129.28 (C-23),51.22 (C-24),31.89 (C-25),21.02 (C-26),18.89 (C-27),25.39 (C-28),12.29 (C-29)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 stigmasterol。

化合物4無色固體粉末(CHCl3)，EI-MSm/z190 [M]+，分子式為C10H6O4；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:6.12 (2H,s,H-2),6.33 (1H,d,J=12.0 Hz,H-7),7.62 (1H,d,J=8.0 Hz,H-8),6.88 (1H,s,J=8.0 Hz,H-9)；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:151.32 (C-3a),161.35 (C-6),113.46 (C-7),143.42 (C-8),112.72 (C-8a),105.04 (C-9),144.94 (C-9a),102.34 (OCH2O)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[14]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 ayapin。

化合物5無色片狀結(jié)晶(CHCl3)，EI-MSm/z306 [M]+，分子式為C17H22O5；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:2.29 (1H,J=16.0,12.0,4.0 Hz,ddt,H-1),2.16 (1H,m,H-2a),1.46 (1H,m,H-2b),2.14 (1H,m,H-3a),2.39 (1H,dd,J=24.0,20.0,8.0 Hz,H-3b),5.50 (1H,d,J=8.0 Hz,H-6),3.04 (1H,m,H-7),4.49 (1H,ddd,J=12.0,10.0,4.0 Hz,H-8),1.57 (1H,d,J=12.0 Hz,H-9a),2.51 (1H,m,H-9b),1.86 (1H,m,H-10),5.85 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13a),6.21 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13b),1.11 (3H,d,J=8.0 Hz,H-14),1.07 (3H,s,H-15),2.02(3H,s,OAc)；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:46.76 (C-1),24.49 (C-2),37.92 (C-3),218.66 (C-4),56.08 (C-5),74.72 (C-6),52.70 (C-7),76.25 (C-8),44.33 (C-9),30.01(C-10),137.29 (C-11),169.39 (C-12),122.14 (C-13),19.99 (C-14),18.43 (C-15),169.14 (MeCO),21.13 (COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[15]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 ergolide。

化合物6無色片狀結(jié)晶(CHCl3)，EI-MSm/z248 [M]+，分子式為C15H20O3；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:1.51 (2H,m,H-2b),4.31 (1H,ddd,J=12.0,8.0,4.0 Hz,H-8),1.63 (1H,m,H-9a),2.49 (3H,m,H-9b),1.96 (2H,m,H-10),6.21 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13a),5.54 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13b),1.12 (3H,d,J=8.0 Hz,H-14),1.06 (3H,s,H-15)；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:48.69 (C-1),24.14 (C-2),35.22 (C-3),222.40 (C-4),50.02 (C-5),34.54 (C-6),44.76 (C-7),80.86 (C-8),44.06 (C-9),26.61 (C-10),140.25 (C-11),169.88 (C-12),120.10 (C-13),20.00 (C-14),22.04 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[16]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 5,10-epi-2,3-dihydroaromatin。

化合物7黃色油狀物(CHCl3)，EI-MSm/z248 [M]+，分子式為C15H20O3；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:2.24(2H,t,J=8.0 Hz,H-2),2.57 (1H,ddd,J=24.0,16.0,8.0 Hz,H-3a),2.46 (1H,m,H-3b),5.44 (1H,m,H-5),2.18 (1H,m,H-6a),2.44 (1H,m,H-6b),3.33 (1H,m,H-7),4.65 (1H,m,H-8),2.03 (1H,m,H-9a),1.92 (1H,ddd,J=12.0,8.0 Hz,H-9b),2.36 (1H,m,H-10),5.53 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13a),6.25 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13b),1.13 (3H,d,J=8.0 Hz,H-14),2.16 (3H,s,H-15) ；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:144.42 (C-1),30.42 (C-2),42.61 (C-3),208.28 (C-4),120.10 (C-5),26.55 (C-6),42.10 (C-7),79.32 (C-8),36.64 (C-9),35.42 (C-10),138.98 (C-11),170.29 (C-12),122.14 (C-13),20.95 (C-14),29.93 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[17]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 xanthalongin。

化合物8無色針狀結(jié)晶(CHCl3)，EI-MSm/z304 [M]+，分子式為C17H20O5；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:3.05(1H,m,H-1),7.75 (1H,dd,J=6.0,4.0 Hz,H-2),6.14 (1H,dd,J=8.0,4.0 Hz,H-3),5.66 (1H,d,J=8.0 Hz,H-6),3.12 (1H,m,H-7),4.65 (1H,ddd,J=12.0,8.0,4.0 Hz,H-8),2.60 (1H,m,H-9a),1.60 (1H,ddd,J=24.0,12.0 Hz,H-9b),2.10 (1H,m,H-10),5.96 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13a),6.27 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13b),1.33 (3H,d,J=4.0 Hz,H-14),1.25 (3H,s,H-15),2.01 (3H,s,COCH3) ；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:52.22 (C-1),161.61 (C-2),130.82 (C-3),209.18 (C-4),56.29 (C-5),73.12 (C-6),53.98 (C-7),76.17 (C-8),44.41 (C-9),27.23 (C-10),137.16 (C-11),169.63 (C-12),122.18 (C-13),19.82 (C-14),22.71 (C-15),168.95 (COCH3),21.13 (COCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[18]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 bigelovin。

化合物9無色片狀結(jié)晶(CHCl3)，EI-MSm/z264 [M]+，分子式為C15H20O4；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:4.05(1H,d,J=8.0 Hz,H-6),3.05 (1H,s,C-6-OH),2.91 (1H,m,H-7),4.42 (1H,ddd,J=12.0,10.0,4.0 Hz,H-8),6.02 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13a),6.24 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13b),1.12 (3H,d,J=4.0 Hz,H-14),1.06 (3H,s,H-15) ；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:50.06 (C-1),24.60 (C-2),44.16 (C-3),223.20 (C-4),57.75 (C-5),75.36 (C-6),45.19 (C-7),76.05 (C-8),37.70 (C-9),30.18 (C-10),138.96 (C-11),169.68 (C-12),121.86 (C-13),19.09 (C-14),20.10 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[19]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 carpesiolin。

化合物10無色片狀結(jié)晶(CHCl3)，EI-MSm/z246 [M]+，分子式為C15H18O3；1H NMR (CDCl3,400 MHz)δ:2.79(1H,dt,J=16.0,8.0 Hz,H-1),7.68 (1H,dd,J=8.0,4.0 Hz,H-2),6.18 (1H,dd,J=8.0,4.0 Hz,H-3),1.69 (1H,dd,J=16.0,12.0,8.0 Hz,H-6a),2.52 (1H,d,H-6b),2.94 (1H,m,H-7),4.55 (1H,ddd,J=12.0,8.0,4.0 Hz,H-8),1.49 (1H,d,J=24.0,12.0,4.0 Hz,H-9a),2.56 (1H,m,H-9b),2.17 (1H,m,H-10),5.57 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13a),6.24 (1H,d,J=4.0 Hz,H-13b),1.30 (3H,d,J=12.0 Hz,H-14),1.23 (3H,s,H-15)；13C NMR (CDCl3,100 MHz)δ:54.23 (C-1),161.60 (C-2),130.35 (C-3),213.73 (C-4),51.19 (C-5),32.07 (C-6),46.51 (C-7),79.62 (C-8),44.21 (C-9),27.97 (C-10),140.31 (C-11),169.64 (C-12),120.19 (C-13),19.87 (C-14),27.20 (C-15)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[20]報(bào)道一致，故鑒定化合物為 aromaticin。

3.3 體外抗結(jié)核分支桿菌增殖抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果

經(jīng)過文獻(xiàn)調(diào)研顯示旋覆花屬植物中倍半萜類化合物具有顯著的生物活性，因此本文選取了分離得到的倍半萜類化合物5～10進(jìn)行體外抗結(jié)核分支桿菌增殖抑制活性測試。結(jié)果表明化合物5,6,8～10對(duì)人型結(jié)核分枝桿菌M.tuberculosisH37RV、牛分枝桿菌M.bovisBCG具有較好的增值抑制活性，其中化合物9和10的增殖活性更加顯著，化合物7沒有抗結(jié)核分支桿菌增殖抑制活性。具體活性結(jié)果見表1 。

表1 化合物5、6、7～10對(duì)結(jié)核分支桿菌的增殖抑制影響(n=3)

注：利福平為陽性對(duì)照藥。

Note:RIF of positive control.

4 結(jié)果

目前對(duì)湖北旋覆花化學(xué)成分及抗結(jié)核藥理作用研究較少，本課題組對(duì)湖北旋覆花的花序進(jìn)行了深入研究。從中共分離鑒定了10個(gè)化合物。其中包括6個(gè)倍半萜類，2個(gè)百里酚類，1個(gè)甾醇和1個(gè)酚類，化合物1、2、5、6、8～10均為首次從該植物中分離得到。通過肉湯二倍稀釋法評(píng)價(jià)了體外抗結(jié)核分支桿菌增殖抑制活性，與化合物7比較，化合物5、6、8～10對(duì)人型結(jié)核分枝桿菌M.tuberculosisH37RV、牛分枝桿菌M.bovisBCG都具有良好的增值抑制活性，猜測活性部位主要為閉環(huán)A以及5位甲基，其中化合物9和10的增殖活性更加顯著，可能與7、8位取代基有關(guān)。

由于主要近年來結(jié)核分支桿菌對(duì)現(xiàn)有抗結(jié)核藥物產(chǎn)生了廣泛耐藥性，耐藥菌株很難被藥物殺死。本文對(duì)湖北旋覆花化學(xué)成分及抗結(jié)核活性的研究，從結(jié)果來看，倍半萜類化合物具有良好的抗結(jié)核生物活性，也為從天然化合物中篩選有效抗結(jié)核活性物質(zhì)提供了途徑。這對(duì)于開發(fā)其藥用資源，從天然產(chǎn)物中尋找新型抗結(jié)核桿菌活性物質(zhì)具有重大意義，也為計(jì)算機(jī)輔助研究分子構(gòu)效關(guān)系以及尋找活性位點(diǎn)提供了參考依據(jù)。

致謝:感謝上海市公共衛(wèi)生臨床中心范小勇研究員在抗結(jié)核活性試驗(yàn)中給予的指導(dǎo)和幫助，在此致以真誠的謝意！