余爭(zhēng)垚 鄭伯安 董全進(jìn) 王建軍 牟虹

近年來(lái)，結(jié)直腸癌發(fā)病率逐漸上升[1]。隨著美國(guó)國(guó)家綜合癌癥網(wǎng)絡(luò)、歐洲腫瘤內(nèi)科學(xué)會(huì)指南的更新，結(jié)直腸腫瘤的治療不斷規(guī)范。Ⅲ、Ⅳ期結(jié)直腸癌患者術(shù)后須行輔助化療已達(dá)共識(shí)，但對(duì)于Ⅱ期結(jié)直腸癌患者術(shù)后是否行輔助化療尚有爭(zhēng)議。因此，對(duì)Ⅱ期結(jié)直腸癌術(shù)后是否行化療，需要一個(gè)可靠、有效的評(píng)價(jià)指標(biāo)。筆者對(duì)E-cadherin、α-catenin在Ⅱ期結(jié)直腸癌中的表達(dá)及與預(yù)后的關(guān)系作了研究，以探討這2項(xiàng)指標(biāo)對(duì)術(shù)后化療的指導(dǎo)意義，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 對(duì)象和方法

1.1 對(duì)象 選取2010年1月至2016年1月在淳安縣第一人民醫(yī)院手術(shù)治療的45例Ⅱ期結(jié)直腸癌患者的石蠟標(biāo)本。入選標(biāo)準(zhǔn)：（1）術(shù)后經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為結(jié)直腸癌；（2）術(shù)前均未接受任何治療；（3）術(shù)前CT診斷為Ⅱ期結(jié)直腸癌；（4）均為中國(guó)漢族人種；（5）均經(jīng)過(guò)根治性手術(shù)治療?；颊吣?32 例，女 13 例；年齡 23～76（54.4±14.2）歲。其中30例患者的標(biāo)本同時(shí)包括距結(jié)直腸癌組織5cm以外的正常黏膜組織。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審查通過(guò)，所有患者簽署知情同意書(shū)。

1.2 檢測(cè)方法 采用免疫組化法。使用鼠抗人αcatenin單克隆抗體（中國(guó)北京中山生物技術(shù)有限公司）、即用型鼠抗人E-cadherin單克隆抗體（中國(guó)福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)中心）、Envision system試劑盒（丹麥DAKO基因有限公司）。石蠟標(biāo)本經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度乙醇水化，切片經(jīng)微波抗原修復(fù)；采用Envision法染色、蘇木素復(fù)染、切片脫水透明、封片。以已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。E-cadherin陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：沿細(xì)胞邊界的細(xì)胞膜均勻染有棕黃色。αcatenin陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)：細(xì)胞膜均勻染有棕黃色。根據(jù)染色強(qiáng)度分為陰性、中度陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性，并將中度陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性歸為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法。采用Kaplan-Meier法繪制患者的生存曲線，并采用logrank檢驗(yàn)分析結(jié)直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Ⅱ期結(jié)直腸癌組織與癌旁正常黏膜組織中E-cadherin、α-catenin表達(dá)比較 Ⅱ期結(jié)直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin 陽(yáng)性表達(dá)率均為 84.4%（38/45），免疫組化結(jié)果見(jiàn)圖1a、2a（插頁(yè)）；癌旁正常黏膜組織中E-cadherin、α-catenin陽(yáng)性表達(dá)率均為 100.0%（30/30），免疫組化結(jié)果見(jiàn)圖1b、2b（插頁(yè)）。Ⅱ期結(jié)直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin陽(yáng)性表達(dá)率均明顯低于癌旁正常黏膜組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。

2.2 Ⅱ期結(jié)直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系 E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)率與Ⅱ期結(jié)直腸癌患者浸潤(rùn)深度、有無(wú)靜脈侵犯有關(guān)（均P＜0.05），與患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理組織學(xué)類(lèi)型、有無(wú)淋巴管侵犯等均無(wú)關(guān)（均P＞0.05）；α-catenin陽(yáng)性表達(dá)率與有無(wú)靜脈侵犯有關(guān)（P＜0.05），與患者年齡、性別、腫瘤直徑、分化程度、浸潤(rùn)深度、有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理組織學(xué)類(lèi)型、有無(wú)淋巴管侵犯等均無(wú)關(guān)（均P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 Ⅱ期結(jié)直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin表達(dá)與患者臨床特征的關(guān)系[例（%）]

2.3 Ⅱ期結(jié)直腸癌組織中E-cadherin、α-catenin表達(dá)與患者預(yù)后的關(guān)系 隨訪至2017年5月31日。在Ⅱ期結(jié)直腸癌患者中，7例E-cadherin陰性表達(dá)者1、3、5年生存率分別為85.7%、42.9%、0.0%，38例陽(yáng)性表達(dá)者1、3、5年生存率分別為 94.7%、65.8%、39.5%；E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)者總生存率明顯高于陰性表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），生存曲線見(jiàn)圖3。7例α-catenin陰性表達(dá)者 1、3、5年生存率分別為 85.7%、28.6%、0.0%，38例 α-catenin陽(yáng)性表達(dá)者 1、3、5年生存率分別為94.7%、68.4%、39.5%；α-catenin陽(yáng)性表達(dá)者總生存率明顯高于陰性表達(dá)者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），生存曲線見(jiàn)圖4。

3 討論

侵襲和轉(zhuǎn)移是惡性腫瘤的重要生物學(xué)特征[2]。黏附分子在惡性腫瘤的發(fā)生、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移中起著重要作用，其中E-cadherin是與結(jié)直腸癌浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移較為密切的黏附分子。E-cadherin是一種主要介導(dǎo)細(xì)胞間黏附的鈣依賴(lài)性跨膜糖蛋白，其基因定位于染色體16q22，廣泛分布于成人的上皮細(xì)胞，與細(xì)胞的黏附有關(guān)[3]。E-cadherin在腫瘤細(xì)胞中缺失表達(dá)與患者預(yù)后不良有關(guān)[4]。此外，E-cadherin表達(dá)與惡性腫瘤分化程度、浸潤(rùn)深度、轉(zhuǎn)移特性等相關(guān)[5]。體外研究證實(shí)，E-cadherin黏附能力的喪失是獲得去分化和有侵襲力表型的第一步[6]，同時(shí)證實(shí)E-cadherin能抑制腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的[7-8]。高鈞等[9]回顧性分析了227例結(jié)腸癌患者的臨床資料，探討了結(jié)腸癌組織中E-cadherin表達(dá)與結(jié)腸癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移及生存的關(guān)系，結(jié)果顯示E-cadherin表達(dá)缺失可能與結(jié)腸癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移和不良生存預(yù)后有關(guān)。Ngan等[10]采用免疫組化法檢測(cè)了140例結(jié)直腸癌組織中E-cadherin蛋白表達(dá)情況，結(jié)果顯示術(shù)后生存期＞5年的患者E-cadherin蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯高于生存期＜5年的患者。本研究結(jié)果顯示，E-cadherin在癌旁正常黏膜組織中呈高表達(dá)；E-cadherin在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)較弱，且與結(jié)直腸癌的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)。此外，E-cadherin陽(yáng)性表達(dá)的結(jié)直腸癌患者生存率明顯高于陰性表達(dá)者。

圖1 Ⅱ期結(jié)直腸癌組織與癌旁正常黏膜組織中E-cadherin表達(dá)（a：橫結(jié)腸黏液腺癌組織中E-cadherin蛋白染色呈陰性，定位于細(xì)胞膜；b：正常大腸黏膜組織中E-cadherin蛋白呈棕黃色保存型表達(dá)，定位于細(xì)胞膜；免疫組化染色，×240）

圖2 Ⅱ期結(jié)直腸癌組織與癌旁正常黏膜組織中α-catenin表達(dá)（a：直腸管狀腺癌組織中α-catenin染色呈陰性，定位于細(xì)胞膜；b：癌旁正常黏膜組織中α-catenin蛋白呈棕黃色保存型表達(dá)，定位于細(xì)胞膜；免疫組化染色，×240）

圖3 E-cadherin表達(dá)陽(yáng)性與陰性Ⅱ期結(jié)直腸癌患者的生存曲線

圖4 α-catenin表達(dá)陽(yáng)性與陰性Ⅱ期結(jié)直腸癌患者的生存曲線

catenin 是一組膜內(nèi)蛋白，包括 α-catenin（102kDa）、β-catenin（88kDa）、γ-cat（82kDa）。其中α-catenin基因位于染色體5q21-22，編碼906個(gè)氨基酸[11]。研究表明，α-catenin在維持正常組織形態(tài)方面發(fā)揮著重要作用，若它缺失或異位表達(dá)，可使癌細(xì)胞獲得惡性增生、浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的能力[12]。E-cadherin功能的發(fā)揮，不僅需要有鈣離子的存在，還需要與其配體——連環(huán)素（包括αcatenin、β-catenin和γ-catenin）、細(xì)胞骨架——肌動(dòng)蛋白絲連接，發(fā)揮其黏附功能。若無(wú)α-catenin，即使在正常E-cadherin表達(dá)的情況下，細(xì)胞也不能相互黏附[13]。α-catenin的基因產(chǎn)物與E-cadherin胞漿區(qū)形成復(fù)合體，再與細(xì)胞骨架中的肌動(dòng)蛋白微絲結(jié)合，發(fā)揮其黏附功能，使相鄰細(xì)胞形成穩(wěn)定連接。α-catenin基因丟失或α-catenin蛋白突變，都可導(dǎo)致細(xì)胞失去黏附功能。因此α-catenin的正常表達(dá)是E-cadherin發(fā)揮黏附功能的必要條件，而E-cadherin與α-catenin結(jié)合是E-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞黏附功能的關(guān)鍵步驟。本研究結(jié)果顯示，αcatenin在癌旁正常黏膜組織中呈高表達(dá)，在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)強(qiáng)度減弱；α-catenin陽(yáng)性表達(dá)率與有無(wú)靜脈侵犯有關(guān)。生存分析發(fā)現(xiàn)，α-catenin陽(yáng)性表達(dá)者生存率明顯高于陰性表達(dá)者。

綜上所述，E-cadherin、α-catenin表達(dá)強(qiáng)度與Ⅱ期結(jié)直腸癌患者預(yù)后有關(guān)，其表達(dá)越弱，患者預(yù)后越差。對(duì)于E-cadherin和/或α-catenin表達(dá)陰性者，應(yīng)嚴(yán)密隨訪，必要時(shí)予以輔助化療；對(duì)于E-cadherin和/或αcatenin表達(dá)陰性者，無(wú)需輔助化療。