王 頡，孫志良

（湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖南 長(zhǎng)沙410128）

鉤吻（Gelsemium elegans (Gardn.＆ Champ.)Benth.，GEB）為馬錢科植物胡蔓藤的全草，又名斷腸草、野葛、毒根、大茶藥等，味苦、微辛，性熱，有大毒，主要分布在浙江、福建、廣東、廣西、湖南、貴州和云南等地。研究表明，鉤吻素子、鉤吻素甲等生物堿是其主要的有效成分[1]。

中草藥是我國(guó)醫(yī)藥文化的瑰寶，部分中草藥作為飼料原料應(yīng)用于畜禽養(yǎng)殖也具有悠久的歷史。如《神農(nóng)本草經(jīng)》中有“梓葉喂豬，肥大三倍”的記載[3]。近年來(lái)，關(guān)于草藥在畜禽、水產(chǎn)養(yǎng)殖中應(yīng)用的報(bào)道逐漸增多，顯示出中草藥在促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、增進(jìn)動(dòng)物健康以及疾病防控與治療中的廣闊前景。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與處理

選取30 頭56日齡的體況健康的長(zhǎng)×大二元雜交育成豬，按體重平均分為兩組：對(duì)照組（CON，15 頭）飼喂基礎(chǔ)日糧，鉤吻組（GEB，15 頭）飼喂補(bǔ)充50mg/kg 劑量的鉤吻醇提物日糧。試驗(yàn)期為49天，每?jī)芍苡涗浺淮呜i的體重和采食量；試驗(yàn)結(jié)束后，采集仔豬血液進(jìn)行相關(guān)血常規(guī)和生化指標(biāo)測(cè)定（每組生物學(xué)重復(fù)為15，技術(shù)重復(fù)為3），采集肝臟組織進(jìn)行基因表達(dá)分析（每組生物學(xué)重復(fù)為9，技術(shù)重復(fù)為3）。

1.2 血常規(guī)檢測(cè)

使用血液分析儀（邁瑞B(yǎng)C-2800vet）測(cè)定全血中的紅細(xì)胞數(shù)(RBC)、血紅蛋白(HGB)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白含量(MCH)、紅細(xì)胞平均血紅蛋白濃度(MCHC)、白細(xì)胞數(shù)(WBC)等相關(guān)血常規(guī)參數(shù)。

1.3 生化指標(biāo)測(cè)定

使用血液生化儀測(cè)定血液生化指標(biāo)[2]，按照試劑盒說(shuō)明書分別測(cè)定血清中INS （胰島素）、TP（總蛋白）、ALB （白蛋白）、GLOB （球蛋白）、IGM（免疫球蛋白M）、IGG（免疫球蛋白G）、IGA（免疫球蛋白A）、ALT （谷丙轉(zhuǎn)氨酶）、AST （谷草轉(zhuǎn)氨酶）、AKP（堿性磷酸酶）、LDH(乳酸脫氫酶)、BUN（尿素氮）、TCHO（膽固醇）等血液生化指標(biāo)的含量。

1.4 基因表達(dá)分析

RT-PCR 使用TAKARA 試劑盒按照說(shuō)明書進(jìn)行檢測(cè)，步驟簡(jiǎn)述如下：（1）反應(yīng)體系：20μL，其中上、 下引物各1.0 μL，SYBR Premix Ex Taq II 10 μL，cDNA 200 ng，補(bǔ)充dH2O 至20 μL 的總體積。（2）反應(yīng)程序： 95 ℃，30 s；，95 ℃5 s，60 ℃30 s，40 個(gè)循環(huán)； 95 ℃15 s，60 ℃60 s，95 ℃15 s。使 用Applied Biosystems 7900HT Fast Real-Time PCR System 儀器上機(jī)。相對(duì)基因表達(dá)用2-(△△Ct)公式計(jì)算。

1.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤表示，試驗(yàn)結(jié)果采用GraphPad Prism 7.0 進(jìn)行U-paired t-test統(tǒng)計(jì)分析并作圖，P＜0.05 表示差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 生長(zhǎng)性能

試驗(yàn)期間1-15 天、16-31 天、32-49 天，飼料中添加鉤吻干粉顯著提高了仔豬的平均日增重并且降低料重比（圖1，P＜0.05）。同時(shí)，飼料中添加鉤吻干粉顯著提高了試驗(yàn)全程（0-49 天）仔豬的平均日增重（11%）并降低了全程料重比（12%）（圖1，P＜0.05）。鉤吻對(duì)仔豬的平均日采食量無(wú)顯著性影響（圖1，P＞0.05）。

圖1 鉤吻對(duì)仔豬生長(zhǎng)性能的影響（Mean±SD）

2.2 血常規(guī)變化

血常規(guī)檢測(cè)結(jié)果顯示，GEB 組的紅細(xì)胞數(shù)量和血紅蛋白含量顯著高于CON 組 （P＜0.05）（圖2，A、B），分別提高7.6%、8.5%。血小板、白細(xì)胞、淋巴細(xì)胞的數(shù)量在GEB 組和CON 組之間沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）（圖2，C、D、E）。

圖2 鉤吻對(duì)仔豬血常規(guī)的影響（Mean±SD）

2.3 血液生化參數(shù)變化

與CON 相比，飼料中添加GEB 顯著提高了仔豬血清總蛋白（5.9%）、免疫球蛋白A（36%）、胰島素（11%）、尿素氮（17%）等指標(biāo)（P＜0.05），同時(shí)降低血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶 （15%） 和谷草轉(zhuǎn)氨酶（23%） 活性以及谷丙轉(zhuǎn)氨酶與谷草轉(zhuǎn)氨酶比值（P＜0.05）。（圖3，A、E、F、G、H、I、J）。血清白蛋白、球蛋白、免疫球蛋白M、免疫球蛋白G、總膽固醇等在兩組之間沒(méi)有顯著性差異（P＞0.05）（圖3，B、C、D、L、K）。

圖3 鉤吻對(duì)仔豬血液生化參數(shù)的影響（Mean±SD）

2.4 基因表達(dá)變化

與CON相比，GEB組的肝臟PPARD、ANGPT4、HMGCS2 三個(gè)基因的mRNA 豐度顯著增加 （P＜0.05）（圖4，A、B、C）、PDK4 基因的表達(dá)量顯著降低（P＜0.05）（圖4，D）。

圖4 鉤吻對(duì)仔豬肝臟相關(guān)基因表達(dá)的影響（Mean±SD）

3 討論

在本研究中，飼料中添加鉤吻顯著提高仔豬的日增重并降低料重比，與前人報(bào)道一致，表明鉤吻具有開發(fā)成一種飼料添加劑促進(jìn)仔豬生長(zhǎng)的前景。

血液是在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)氧氣、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及以及代謝物運(yùn)輸?shù)闹饕d體，血液生理生化指標(biāo)是動(dòng)物機(jī)體健康的重要參考標(biāo)志。鉤吻作為飼料添加劑對(duì)動(dòng)物血液生化具有調(diào)節(jié)作用，有可能進(jìn)一步影響仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育。

研究發(fā)現(xiàn)，鉤吻對(duì)仔豬的生長(zhǎng)具有顯著的促進(jìn)作用并且降低了料重比，可以推測(cè)鉤吻對(duì)仔豬的促生長(zhǎng)作用可能與其參與其肝臟糖脂的代謝、影響胰島素敏感性和機(jī)體能量代謝等具有一定的聯(lián)系。

4 結(jié)論

本研究結(jié)果表明，鉤吻作為飼料添加劑能夠顯著提高仔豬生長(zhǎng)性能，其促生長(zhǎng)作用可能與其參與血液生化以及糖脂代謝相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)控有關(guān)。