丁香酚麻醉斑點叉尾鮰在不同無水?；顪囟认碌纳砩兓?/h1>
2019-04-01 05:30，，，，，
漁業(yè)現(xiàn)代化 2019年1期
，， ， ， ，
(1 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術(shù)研究所，湖北省農(nóng)產(chǎn)品輻照工程技術(shù)研究中心，湖北 武漢 430064；2 四川省原子能研究院輻照保藏四川省重點實驗室，四川 成都 610101)
斑點叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)，叉尾鮰屬，是一種溫水性淡水魚類，其肉質(zhì)鮮美、易養(yǎng)殖、抗病能力強(qiáng)，是中國淡水養(yǎng)殖和出口的重要品種之一，擁有廣闊的國內(nèi)外市場，2016年全國總產(chǎn)量達(dá)28.58萬t，并逐年穩(wěn)步上升[1]。中國90%以上的水產(chǎn)品以鮮銷為主，通常由于養(yǎng)殖區(qū)域與銷售市場距離遙遠(yuǎn)，?；钸\輸成為水產(chǎn)品鮮銷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[2]。傳統(tǒng)活魚運輸技術(shù)成本高、魚體死亡率大、水處理困難[3]。隨著消費者對水產(chǎn)品鮮活度的要求越來越高，開發(fā)新的水產(chǎn)品?；钸\輸方法， 確保水產(chǎn)品在運輸和銷售過程中的?；?、食用安全，已成為亟待解決的問題[4]。
無水?；钍且环N新型的活魚運輸方法，具有活魚運載量大、低污染、低成本、低損耗、質(zhì)量高的特點，在水產(chǎn)品?；钸\輸中得到越來越多的關(guān)注[5-6]。魚類運輸常使用麻醉劑降低魚類應(yīng)激反應(yīng)，減少對魚的損傷而提高運輸質(zhì)量。丁香酚是一種高效安全、殘留期短的麻醉劑，澳大利亞、智利、芬蘭、新西蘭等多國認(rèn)為其是合法的水產(chǎn)麻醉劑[4]。丁香酚作為麻醉劑長距離保活運輸單色鯛，可以降低其代謝率，減少氨氮排放量[7]；經(jīng)丁香酚麻醉的美洲鰣幼魚運輸應(yīng)激反應(yīng)明顯低于對照組[8]；丁香酚還可以顯著緩解?？~和雙帶雙鋸魚的運輸應(yīng)激[9]。斑點叉尾鮰在離水或受應(yīng)激的狀態(tài)下，硬鰭會豎起，對其他魚體及其自身都會造成傷害，其無水?；钸^程對麻醉及環(huán)境溫度有較高要求，而丁香酚麻醉斑點叉尾鮰的無水?；钸\輸目前鮮有報道。
本文研究了在無水保活過程中，不同?；顪囟葘Π唿c叉尾鮰的?；顣r間、存活率和血液生理生化和魚肉品質(zhì)指標(biāo)的影響；通過對斑點叉尾鮰機(jī)體生理生化指標(biāo)的分析，探索其最佳無水?；罟に嚰夹g(shù)，從而確定最適宜無水?；顥l件，明確使用丁香酚對魚肉營養(yǎng)品質(zhì)的影響，為實際應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料與設(shè)備
中小型斑點叉尾鮰為試驗對象，購自嘉魚三湖漁業(yè)有限責(zé)任公司，選取的魚大小規(guī)格相近，體格健康，平均體質(zhì)量(526.23±10.56)g，體長(28.3±3.2)cm。
丁香酚(≥98%)購自Sigma-Aldrich公司；硼酸、硫酸、氫氧化鈉、鹽酸等試劑均為分析純，購自上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒(100管/96樣)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒(100管/96樣)、尿素氮試劑盒(100管/50樣)、肌酐試劑盒(100管/50樣)均購自南京建成生物工程研究所，在酶標(biāo)儀及紫外可見分光光度計上進(jìn)行檢測。
Sigma 3k15高速冷凍離心機(jī)(美國Sigma 公司)；FD5-Serious真空冷凍干燥機(jī)(GOLD SIM 儀器公司)；LRH-250CL低溫生化培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器公司)；TA XT Plus質(zhì)構(gòu)儀(英國SMSTA公司)； HITACH UH5300紫外可見光光度計(日本日立公司)；TECAN SPARK酶標(biāo)儀(瑞士TECAN儀器公司)；K9860全自動凱氏定氮儀(濟(jì)南海能儀器公司)。
1.2 試驗設(shè)計
將斑點叉尾鮰置于充分曝氣的自來水中暫養(yǎng)2 d，水溫(18±0.5) ℃，pH(7.6±0.5)，暫養(yǎng)期間停食。本試驗對斑點叉尾鮰無水?；疃掏具\輸條件進(jìn)行研究，設(shè)定?；顣r間5 h。配置丁香酚溶液質(zhì)量濃度為60 mg/L，將禁食暫養(yǎng)的斑點叉尾鮰浸浴在丁香酚溶液中麻醉，觀察不同階段試驗魚(指代斑點叉尾鮰，下文同)的狀態(tài)。麻醉10 min后待試驗魚基本進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)，將其裝入塑料袋中，充入純氧后密封，置于生化培養(yǎng)箱中于不同溫度下模擬無水保活運輸。?；? h后，將休眠中的試驗魚轉(zhuǎn)移至?xí)吼B(yǎng)水體中復(fù)蘇24 h，觀察其復(fù)蘇狀態(tài)。為研究丁香酚麻醉保活過程中各階段斑點叉尾鮰的生理生化指標(biāo)及肌肉營養(yǎng)成分變化情況，分別測定?；钋?對照組)、?；? h后、復(fù)蘇24 h后(清水中復(fù)蘇24 h)各指標(biāo)的變化，設(shè)置3個重復(fù)，每個重復(fù)15條魚。
1.3 無水?；钶^佳溫度的確定
丁香酚麻醉斑點叉尾鮰無水?；? h后，以試驗魚存活率為指標(biāo)，研究其無水?；钶^佳溫度范圍。調(diào)節(jié)生化培養(yǎng)箱溫度為0 ℃、2 ℃、4 ℃、6 ℃、8 ℃，每隔30 min觀察試驗魚生存狀態(tài)。若在麻醉≤5 h魚就蘇醒，則直接置于清水中，停止觀察。保活5 h后，如果魚鰓無明顯張合，刺激無反應(yīng)，將魚置于暫養(yǎng)清水中復(fù)蘇，記錄復(fù)蘇24 h后存活魚的數(shù)量。存活率計算公式：
S= 100%×A2/A1
(1)
式中：S—存活率；A1—初始魚條數(shù)；A2—清水復(fù)蘇24 h后存活魚條數(shù)。
1.4 測定指標(biāo)及方法
1.4.1 血液指標(biāo)的測定
取血方法 每組魚采用尾部靜脈取血，注入10 mL離心管中，每毫升血液用20U肝素抗凝[10]，在4 ℃下靜置3 h后，3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，取上層血漿于-20 ℃冰箱中備用[11]。
血液指標(biāo)測定方法 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)采用紫外-賴氏法測定，肌酐(CREA)采用紫外-苦味酸法測定，尿素氮(BUN)含量采用紫外-脲酶法測定。以上指標(biāo)均用南京建成生產(chǎn)的試劑盒測定[12-13]。
1.4.2 肌肉指標(biāo)的測定
肌肉取樣 每組魚取血后，取其背部肌肉，一部分留待質(zhì)構(gòu)測量，一部分用高速絞肉機(jī)攪碎并混勻，真空冷凍干燥后粉碎，過40目篩，裝在若干獨立包裝袋中密封于-40 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
營養(yǎng)成分測定 蛋白質(zhì)含量采用GB 5009.5—2016[14]中自動凱氏定氮儀法進(jìn)行測定，脂肪含量采用GB 5009.6—2016[15]中索氏抽提法進(jìn)行測定，凍干肉粉中水解氨基酸含量參照GB 5009.124—2016[16]中食品中氨基酸的測定法，用氨基酸分析儀(茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀)測定。
質(zhì)構(gòu)測定 采用TA XT Plus質(zhì)構(gòu)儀來測定魚肉彈性、硬度以及咀嚼性。取魚背部肌肉，將魚肉切成20 mm×20 mm×10 mm的方塊，使用平底柱形探頭P/36R，樣品垂直于其厚度方向平放，每次測1個樣品，每組樣品測定8個平行樣，取平均值。測試條件：測試前速率1.0 mm/s，測試速率1.0 mm/s,測試后速率3.0 mm/s，壓縮比50%，停留時間間隔5 s。
1.6 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
2.1 無水?；钶^佳溫度范圍的確定
?；顪囟葘Π唿c叉尾鮰保活時間及存活率的影響見表1。由表1可知，在?；顪囟葹? ℃、2 ℃、4 ℃、6 ℃時，可以達(dá)到無水?；? h；當(dāng)?；顪囟壬? ℃時，無水保活2 h后試驗魚全部蘇醒，放入清水中，停止觀察，該組終止試驗。當(dāng)?；顪囟容^低(0 ℃)時，?；? h后在清水中復(fù)蘇24 h，試驗魚存活率只有60%；?；顪囟葹? ℃、4 ℃、6 ℃時，置于清水中復(fù)蘇24 h后，存活率可以≥80%。結(jié)果表明，2 ℃～6 ℃下?；睿；钚Ч^好，完全滿足?；? h且存活率≥80%的要求。當(dāng)?；顪囟容^低時，水溫從18 ℃降至較低溫度，溫差大，短時間內(nèi)溫度變化大，對魚體造成強(qiáng)烈瞬間應(yīng)激，造成魚體損傷，故在較低溫度下(0 ℃)?；? h后，試驗魚存活率較低。而溫度較高時，無水?；钸^程中周圍環(huán)境溫度較高，魚體新陳代謝速率較快，且丁香酚屬于較易揮發(fā)的麻醉劑，高溫加快了丁香酚在魚體內(nèi)的循環(huán)代謝速率，使麻醉劑被很快排出體外，失去麻醉效果，?；顣r間顯著縮短[6]。
表1 不同?；顪囟葘Π唿c叉尾鮰?；顣r間和存活率的影響
2.2 丁香酚麻醉保活對斑點叉尾鮰血液生化指標(biāo)的影響
2.2.1 對谷丙轉(zhuǎn)氨酶的影響
若魚體肝臟受損，則肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)會釋放到血液中，ALT顯著性上升[4,17]。如圖1，血液ALT活性在保活5 h后都顯著上升(P<0.05)。在0 ℃下，ALT增量最大(105.4%)；2 ℃下增量最小(47.82%)。在清水中復(fù)蘇24 h后，0 ℃和2 ℃保活組恢復(fù)至21.53和12.52 U/L，而4 ℃和6 ℃下仍較高。說明在較高溫度下?；?，肝臟發(fā)生不可逆損傷，而低溫下的恢復(fù)性較好。這可能是由于在丁香酚麻醉斑點叉尾鮰無水?；钸^程中，試驗魚在?；顪囟容^高時，麻醉不完全，魚較易蘇醒，代謝較強(qiáng)，肝臟受損嚴(yán)重，ALT含量顯著上升，且較難恢復(fù)。聶小寶等[18]研究不同溫度下無水?；铟\魚，在2 ℃無水?；瞽h(huán)境下保存效果最佳，對肝臟損傷最小。
圖1 不同溫度條件下血液谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性變化
2.2.2 對谷草轉(zhuǎn)氨酶的影響
谷草轉(zhuǎn)氨酶活性可以反映魚體心肌細(xì)胞及肝臟受損和代謝程度，是機(jī)體組織細(xì)胞膜完整性的一個重要標(biāo)志[19-20]。由圖2可知，麻醉?；詈?，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性升高，且?；顪囟仍礁?，AST升高越明顯，6 ℃組AST增加了44.91 U/L。在清水中復(fù)蘇24 h后，2 ℃組完全恢復(fù)到16.13 U/L，4 ℃、6 ℃組有一定程度的恢復(fù)，但0 ℃組持續(xù)增加至57.91 U/L。
圖2 不同溫度條件下血液谷草轉(zhuǎn)氨酶活性變化
在丁香酚麻醉保活過程中，?；顪囟仍礁撸珹ST活性越大，這可能是由于在較高溫下麻醉應(yīng)激及代謝程度較高，對心肌損傷較大，但隨著在清水中的復(fù)蘇，損傷得到一定程度的恢復(fù)。?；顪囟忍?0 ℃)，低溫應(yīng)激對魚體造成不可逆的損傷，很難恢復(fù)。這可能是由于長時間低溫?zé)o水環(huán)境使魚心肌收縮力加強(qiáng)，心肌細(xì)胞代謝加快，負(fù)荷超重，受損嚴(yán)重[21-22]。研究發(fā)現(xiàn)，鯽魚無水?；钜欢〞r間后，AST顯著升高，在清水中會有一定程度復(fù)蘇[23]。
2.2.3 對肌酐的影響
由圖3可見，?；? h后，肌酐(CREA)含量顯著上升(P<0.05)，尤其在0 ℃、6 ℃下，分別升高了58.51%和100.8%，復(fù)蘇24 h后仍高達(dá)87.67 μmol/L 和97.17 μmol/L； 2 ℃保活組，肌酐由?；钋暗?6.57 μmol/L升高到?；詈蟮?0.89 μmol/L，而清水中復(fù)蘇24 h后恢復(fù)至64.35 μmol/L。斑點叉尾鮰在低溫?zé)o水條件下?；?，腎功能會受到一定程度的損傷，腎臟對肌酐的過濾或排泄功能將弱化，導(dǎo)致肌酐含量顯著升高[24]，這也是長時間?；顣?dǎo)致魚體死亡的原因之一[25]。溫度是影響其損傷程度的重要因素，較高和較低溫度皆不利于斑點叉尾鮰的無水保活。
圖3 不同溫度條件下血液肌酐含量變化
2.2.4 對尿素氮的影響
尿素(BUN)氮同肌酐類似，是表征腎臟功能的重要指標(biāo)[26]。由圖4可知，麻醉?；? h后，尿素氮含量顯著升高(P<0.05)，升高率達(dá)40.3%～193%，尤其4 ℃和6 ℃組。不同?；顪囟认?，尿素氮含量差異顯著(P<0.05)，但變化趨勢相同。結(jié)合肌酐含量變化趨勢，麻醉無水?；钸^程會對腎臟造成不可逆的損傷，在清水中復(fù)蘇后也很難恢復(fù)。究其原因，在無水保活過程中，魚體腎功能機(jī)能發(fā)生障礙，腎臟代謝廢物功能受到抑制，血液中代謝產(chǎn)物不能被有效排除到體外，導(dǎo)致尿素氮和氨氮含量升高，引起氨氮中毒，進(jìn)一步加深損害程度，且這一損傷很難通過魚體自身調(diào)節(jié)恢復(fù)，使得整個?；罴盎謴?fù)過程中尿素氮都呈現(xiàn)上升趨勢[27-28]。
圖4 不同溫度條件下血液尿素氮活性變化
2.3 丁香酚麻醉?；顚Π唿c叉尾鮰機(jī)體營養(yǎng)成分和質(zhì)構(gòu)的影響
由表2可知，經(jīng)過5 h的無水?；?，總蛋白含量降低率達(dá)0.9%～8.5%，尤其是6 ℃組。粗脂肪含量在無水?；詈箫@著下降(P<0.05)，6 ℃組下降了18.98%，而 2 ℃組下降幅度只有3.46%。據(jù)推測，造成魚體蛋白質(zhì)和脂肪等功能物質(zhì)含量降低的原因，是由于魚在無水?；钸^程中還有一定的能量消耗，在沒有外部能量補(bǔ)充的情況下，蛋白質(zhì)和脂肪作為能源物質(zhì)被消耗。?；顪囟容^高時，丁香酚麻醉下的魚體未能進(jìn)入深度麻醉，代謝旺盛，能量消耗加劇，而溫度降低到0 ℃時，由于?；钋?18 ℃)到?；畹牡蜏丨h(huán)境溫差較大，溫度驟降，使魚的應(yīng)激要強(qiáng)于其他組，魚體對能量的消耗增加，促進(jìn)供能物質(zhì)蛋白質(zhì)減少[22]，而在2 ℃下，溫度造成的能量消耗達(dá)到最低。
食品的質(zhì)構(gòu)特性是體現(xiàn)魚肉質(zhì)量的重要指標(biāo)[29]，可以表征無水?；钸^程對魚肉在食用口感特性方面的影響。由表2可知，經(jīng)過5 h無水?；睿?0 ℃?；罱M，硬度、彈性和咀嚼性分別下降21.4%，38.8%，16.4%，在清水中恢復(fù)24 h后，分別恢復(fù)至保活前的92.4%，58.5%和93.0%。6 ℃?；罱M質(zhì)構(gòu)參數(shù)變化趨勢最小。究其原因，可能是因為在較低溫度下魚體肌肉活動受限，但維持代謝需要消耗體內(nèi)供能物質(zhì)，肌肉蛋白質(zhì)在不斷被降解，肌肉細(xì)胞間的結(jié)合力在逐漸降低，成分發(fā)生變化，造成硬度、彈性和咀嚼性參數(shù)下降[29]。研究表明，魚類在受到應(yīng)激反應(yīng)時會導(dǎo)致肌肉組織的軟化[30]；Hultmann等[31]通過對鱈魚刺激發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激會使硬度值顯著減小。
表2 丁香酚麻醉斑點叉尾鮰在不同保活溫度下魚肉品質(zhì)的變化
注：A-D表示在同一測量時間下數(shù)值差異顯著；a-c表示在同一溫度下數(shù)值差異顯著
2.4 丁香酚麻醉?；顚Π唿c叉尾鮰機(jī)體水解氨基酸含量的影響
由表3可知，水解氨基酸總量在無水?；詈蟮陀诔跏妓?，但在2 ℃保活組，人體所需的7種必需氨基酸Lys、Met、Leu、Ile、Thr、Val、Phe值均較?；钋按蠓忍岣?，顯示斑點叉尾鮰在2 ℃保活有較高的蛋白質(zhì)營養(yǎng)價值。
表3 丁香酚麻醉斑點叉尾鮰在不同溫度下無水?；? h魚肉中水解氨基酸含量的變化
曾鵬等[32]研究發(fā)現(xiàn)，鯽魚冰溫離水儲藏后，必需氨基酸值大幅提高，多種氨基酸水解含量都高于對照組鮮魚，有利于營養(yǎng)吸收。4 ℃和6 ℃下，各氨基酸成分都有所下降，溫度越高，下降幅度越大。在2 ℃下，各必需氨基酸的增加可能與低溫?；罾溥m應(yīng)后魚體抗凍能力增加，魚體為抵御低溫和重新適應(yīng)正常環(huán)境體內(nèi)正常的代謝活動所致[33]。有文獻(xiàn)指出[34]，生活在極地的魚類通過產(chǎn)生抗凍糖肽起到降低冰點抗凍的作用，而4 ℃和6 ℃下無水?；?，氮基酸含量降低，可能是在此溫度下?；?，斑點叉尾鮰代謝率較低溫(0 ℃、2 ℃)要高，食物蛋白質(zhì)經(jīng)過消化吸收獲得氨基酸并參與體內(nèi)代謝，氨基酸為試驗魚基礎(chǔ)代謝提供能量物質(zhì)而消耗。據(jù)報道，支鏈氨基酸可以作為硬骨魚提供能量代謝的物質(zhì)，可為低溫下活魚的代謝提供能量[35]。
3 結(jié)論
丁香酚麻醉斑點叉尾鮰成功無水?；? h且存活率≥80%的溫度范圍為2 ℃～6 ℃；無水保活5 h后，AST、ALT活性均有顯著升高，而在清水中復(fù)蘇24 h后，2 ℃?；罱M可恢復(fù)至對照組值；肌酐和尿素氮在?；? h后顯著增加(P<0.05)，對腎臟造成的不可逆的損傷，在6 ℃下影響最大；蛋白質(zhì)和脂肪等作為能源物質(zhì)被消耗，?；? h后顯著下降(P<0.05)，溫度越高，下降越明顯；質(zhì)構(gòu)指標(biāo)中，硬度、咀嚼性會顯著下降(P<0.05)，但在清水中復(fù)蘇24 h后顯著上升(P<0.05)，彈性較難恢復(fù)；2 ℃下?；顣r，8種必需氨基酸含量增加。綜上表明，2 ℃下?；?，丁香酚麻醉斑點叉尾鮰無水保活對魚肉的生理生化指標(biāo)影響較小，且基本可以恢復(fù)到初始水平，是較適宜的無水?；顪囟?。該研究結(jié)果揭示了以丁香酚作為麻醉劑，斑點叉尾鮰無水保活運輸過程中不同溫度下的生理生化特點，為進(jìn)一步研究保活過程中斑點叉尾鮰新陳代謝特點提供數(shù)據(jù)支撐和參考。
□
猜你喜歡
褪黑素結(jié)合丁香酚處理對紅桃貯藏品質(zhì)的影響食品工業(yè)科技(2022年23期)2022-12-06 可愛的小斑點新作文·小學(xué)低年級版(2022年3期)2022-08-30 三維魚體參數(shù)化建模浙江大學(xué)學(xué)報（理學(xué)版）(2022年1期)2022-02-21 水產(chǎn)品流通環(huán)節(jié)丁香酚類麻醉劑殘留現(xiàn)狀及評價中國水產(chǎn)(2021年11期)2021-12-15 斑點豹智慧少年·故事叮當(dāng)(2021年5期)2021-08-23 淡水魚水平往復(fù)振動頭尾定向輸送方法農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(2021年4期)2021-05-09 丁香酚在羅非魚體內(nèi)的代謝和休藥期研究漁業(yè)研究(2020年5期)2020-10-28 淡水魚腹背定向裝置設(shè)計及試驗農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(2020年6期)2020-05-19 丁香酚誘導(dǎo)癌相關(guān)成纖維細(xì)胞 的凋亡及其機(jī)制的研究中小學(xué)信息技術(shù)教育(2019年1期)2019-03-04 豬身上起紅斑點怎么辦?今日農(nóng)業(yè)(2019年15期)2019-01-03
，， ， ， ，
(1 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)產(chǎn)品加工與核農(nóng)技術(shù)研究所，湖北省農(nóng)產(chǎn)品輻照工程技術(shù)研究中心，湖北 武漢 430064；2 四川省原子能研究院輻照保藏四川省重點實驗室，四川 成都 610101)
斑點叉尾鮰(Ictaluruspunctatus)，叉尾鮰屬，是一種溫水性淡水魚類，其肉質(zhì)鮮美、易養(yǎng)殖、抗病能力強(qiáng)，是中國淡水養(yǎng)殖和出口的重要品種之一，擁有廣闊的國內(nèi)外市場，2016年全國總產(chǎn)量達(dá)28.58萬t，并逐年穩(wěn)步上升[1]。中國90%以上的水產(chǎn)品以鮮銷為主，通常由于養(yǎng)殖區(qū)域與銷售市場距離遙遠(yuǎn)，?；钸\輸成為水產(chǎn)品鮮銷的關(guān)鍵環(huán)節(jié)[2]。傳統(tǒng)活魚運輸技術(shù)成本高、魚體死亡率大、水處理困難[3]。隨著消費者對水產(chǎn)品鮮活度的要求越來越高，開發(fā)新的水產(chǎn)品?；钸\輸方法， 確保水產(chǎn)品在運輸和銷售過程中的?；?、食用安全，已成為亟待解決的問題[4]。
無水?；钍且环N新型的活魚運輸方法，具有活魚運載量大、低污染、低成本、低損耗、質(zhì)量高的特點，在水產(chǎn)品?；钸\輸中得到越來越多的關(guān)注[5-6]。魚類運輸常使用麻醉劑降低魚類應(yīng)激反應(yīng)，減少對魚的損傷而提高運輸質(zhì)量。丁香酚是一種高效安全、殘留期短的麻醉劑，澳大利亞、智利、芬蘭、新西蘭等多國認(rèn)為其是合法的水產(chǎn)麻醉劑[4]。丁香酚作為麻醉劑長距離保活運輸單色鯛，可以降低其代謝率，減少氨氮排放量[7]；經(jīng)丁香酚麻醉的美洲鰣幼魚運輸應(yīng)激反應(yīng)明顯低于對照組[8]；丁香酚還可以顯著緩解?？~和雙帶雙鋸魚的運輸應(yīng)激[9]。斑點叉尾鮰在離水或受應(yīng)激的狀態(tài)下，硬鰭會豎起，對其他魚體及其自身都會造成傷害，其無水?；钸^程對麻醉及環(huán)境溫度有較高要求，而丁香酚麻醉斑點叉尾鮰的無水?；钸\輸目前鮮有報道。
本文研究了在無水保活過程中，不同?；顪囟葘Π唿c叉尾鮰的?；顣r間、存活率和血液生理生化和魚肉品質(zhì)指標(biāo)的影響；通過對斑點叉尾鮰機(jī)體生理生化指標(biāo)的分析，探索其最佳無水?；罟に嚰夹g(shù)，從而確定最適宜無水?；顥l件，明確使用丁香酚對魚肉營養(yǎng)品質(zhì)的影響，為實際應(yīng)用提供理論依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 材料與設(shè)備
中小型斑點叉尾鮰為試驗對象，購自嘉魚三湖漁業(yè)有限責(zé)任公司，選取的魚大小規(guī)格相近，體格健康，平均體質(zhì)量(526.23±10.56)g，體長(28.3±3.2)cm。
丁香酚(≥98%)購自Sigma-Aldrich公司；硼酸、硫酸、氫氧化鈉、鹽酸等試劑均為分析純，購自上海國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。谷草轉(zhuǎn)氨酶試劑盒(100管/96樣)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶試劑盒(100管/96樣)、尿素氮試劑盒(100管/50樣)、肌酐試劑盒(100管/50樣)均購自南京建成生物工程研究所，在酶標(biāo)儀及紫外可見分光光度計上進(jìn)行檢測。
Sigma 3k15高速冷凍離心機(jī)(美國Sigma 公司)；FD5-Serious真空冷凍干燥機(jī)(GOLD SIM 儀器公司)；LRH-250CL低溫生化培養(yǎng)箱(上海一恒科學(xué)儀器公司)；TA XT Plus質(zhì)構(gòu)儀(英國SMSTA公司)； HITACH UH5300紫外可見光光度計(日本日立公司)；TECAN SPARK酶標(biāo)儀(瑞士TECAN儀器公司)；K9860全自動凱氏定氮儀(濟(jì)南海能儀器公司)。
1.2 試驗設(shè)計
將斑點叉尾鮰置于充分曝氣的自來水中暫養(yǎng)2 d，水溫(18±0.5) ℃，pH(7.6±0.5)，暫養(yǎng)期間停食。本試驗對斑點叉尾鮰無水?；疃掏具\輸條件進(jìn)行研究，設(shè)定?；顣r間5 h。配置丁香酚溶液質(zhì)量濃度為60 mg/L，將禁食暫養(yǎng)的斑點叉尾鮰浸浴在丁香酚溶液中麻醉，觀察不同階段試驗魚(指代斑點叉尾鮰，下文同)的狀態(tài)。麻醉10 min后待試驗魚基本進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)，將其裝入塑料袋中，充入純氧后密封，置于生化培養(yǎng)箱中于不同溫度下模擬無水保活運輸。?；? h后，將休眠中的試驗魚轉(zhuǎn)移至?xí)吼B(yǎng)水體中復(fù)蘇24 h，觀察其復(fù)蘇狀態(tài)。為研究丁香酚麻醉保活過程中各階段斑點叉尾鮰的生理生化指標(biāo)及肌肉營養(yǎng)成分變化情況，分別測定?；钋?對照組)、?；? h后、復(fù)蘇24 h后(清水中復(fù)蘇24 h)各指標(biāo)的變化，設(shè)置3個重復(fù)，每個重復(fù)15條魚。
1.3 無水?；钶^佳溫度的確定
丁香酚麻醉斑點叉尾鮰無水?；? h后，以試驗魚存活率為指標(biāo)，研究其無水?；钶^佳溫度范圍。調(diào)節(jié)生化培養(yǎng)箱溫度為0 ℃、2 ℃、4 ℃、6 ℃、8 ℃，每隔30 min觀察試驗魚生存狀態(tài)。若在麻醉≤5 h魚就蘇醒，則直接置于清水中，停止觀察。保活5 h后，如果魚鰓無明顯張合，刺激無反應(yīng)，將魚置于暫養(yǎng)清水中復(fù)蘇，記錄復(fù)蘇24 h后存活魚的數(shù)量。存活率計算公式：
S= 100%×A2/A1
(1)
式中：S—存活率；A1—初始魚條數(shù)；A2—清水復(fù)蘇24 h后存活魚條數(shù)。
1.4 測定指標(biāo)及方法
1.4.1 血液指標(biāo)的測定
取血方法 每組魚采用尾部靜脈取血，注入10 mL離心管中，每毫升血液用20U肝素抗凝[10]，在4 ℃下靜置3 h后，3 000 r/min轉(zhuǎn)速離心10 min，取上層血漿于-20 ℃冰箱中備用[11]。
血液指標(biāo)測定方法 谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)采用紫外-賴氏法測定，肌酐(CREA)采用紫外-苦味酸法測定，尿素氮(BUN)含量采用紫外-脲酶法測定。以上指標(biāo)均用南京建成生產(chǎn)的試劑盒測定[12-13]。
1.4.2 肌肉指標(biāo)的測定
肌肉取樣 每組魚取血后，取其背部肌肉，一部分留待質(zhì)構(gòu)測量，一部分用高速絞肉機(jī)攪碎并混勻，真空冷凍干燥后粉碎，過40目篩，裝在若干獨立包裝袋中密封于-40 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>
營養(yǎng)成分測定 蛋白質(zhì)含量采用GB 5009.5—2016[14]中自動凱氏定氮儀法進(jìn)行測定，脂肪含量采用GB 5009.6—2016[15]中索氏抽提法進(jìn)行測定，凍干肉粉中水解氨基酸含量參照GB 5009.124—2016[16]中食品中氨基酸的測定法，用氨基酸分析儀(茚三酮柱后衍生離子交換色譜儀)測定。
質(zhì)構(gòu)測定 采用TA XT Plus質(zhì)構(gòu)儀來測定魚肉彈性、硬度以及咀嚼性。取魚背部肌肉，將魚肉切成20 mm×20 mm×10 mm的方塊，使用平底柱形探頭P/36R，樣品垂直于其厚度方向平放，每次測1個樣品，每組樣品測定8個平行樣，取平均值。測試條件：測試前速率1.0 mm/s，測試速率1.0 mm/s,測試后速率3.0 mm/s，壓縮比50%，停留時間間隔5 s。
1.6 數(shù)據(jù)處理
2 結(jié)果與分析
2.1 無水?；钶^佳溫度范圍的確定
?；顪囟葘Π唿c叉尾鮰保活時間及存活率的影響見表1。由表1可知，在?；顪囟葹? ℃、2 ℃、4 ℃、6 ℃時，可以達(dá)到無水?；? h；當(dāng)?；顪囟壬? ℃時，無水保活2 h后試驗魚全部蘇醒，放入清水中，停止觀察，該組終止試驗。當(dāng)?；顪囟容^低(0 ℃)時，?；? h后在清水中復(fù)蘇24 h，試驗魚存活率只有60%；?；顪囟葹? ℃、4 ℃、6 ℃時，置于清水中復(fù)蘇24 h后，存活率可以≥80%。結(jié)果表明，2 ℃～6 ℃下?；睿；钚Ч^好，完全滿足?；? h且存活率≥80%的要求。當(dāng)?；顪囟容^低時，水溫從18 ℃降至較低溫度，溫差大，短時間內(nèi)溫度變化大，對魚體造成強(qiáng)烈瞬間應(yīng)激，造成魚體損傷，故在較低溫度下(0 ℃)?；? h后，試驗魚存活率較低。而溫度較高時，無水?；钸^程中周圍環(huán)境溫度較高，魚體新陳代謝速率較快，且丁香酚屬于較易揮發(fā)的麻醉劑，高溫加快了丁香酚在魚體內(nèi)的循環(huán)代謝速率，使麻醉劑被很快排出體外，失去麻醉效果，?；顣r間顯著縮短[6]。
表1 不同?；顪囟葘Π唿c叉尾鮰?；顣r間和存活率的影響
2.2 丁香酚麻醉保活對斑點叉尾鮰血液生化指標(biāo)的影響
2.2.1 對谷丙轉(zhuǎn)氨酶的影響
若魚體肝臟受損，則肝臟中谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)會釋放到血液中，ALT顯著性上升[4,17]。如圖1，血液ALT活性在保活5 h后都顯著上升(P<0.05)。在0 ℃下，ALT增量最大(105.4%)；2 ℃下增量最小(47.82%)。在清水中復(fù)蘇24 h后，0 ℃和2 ℃保活組恢復(fù)至21.53和12.52 U/L，而4 ℃和6 ℃下仍較高。說明在較高溫度下?；?，肝臟發(fā)生不可逆損傷，而低溫下的恢復(fù)性較好。這可能是由于在丁香酚麻醉斑點叉尾鮰無水?；钸^程中，試驗魚在?；顪囟容^高時，麻醉不完全，魚較易蘇醒，代謝較強(qiáng)，肝臟受損嚴(yán)重，ALT含量顯著上升，且較難恢復(fù)。聶小寶等[18]研究不同溫度下無水?；铟\魚，在2 ℃無水?；瞽h(huán)境下保存效果最佳，對肝臟損傷最小。
圖1 不同溫度條件下血液谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性變化
2.2.2 對谷草轉(zhuǎn)氨酶的影響
谷草轉(zhuǎn)氨酶活性可以反映魚體心肌細(xì)胞及肝臟受損和代謝程度，是機(jī)體組織細(xì)胞膜完整性的一個重要標(biāo)志[19-20]。由圖2可知，麻醉?；詈?，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)活性升高，且?；顪囟仍礁?，AST升高越明顯，6 ℃組AST增加了44.91 U/L。在清水中復(fù)蘇24 h后，2 ℃組完全恢復(fù)到16.13 U/L，4 ℃、6 ℃組有一定程度的恢復(fù)，但0 ℃組持續(xù)增加至57.91 U/L。
圖2 不同溫度條件下血液谷草轉(zhuǎn)氨酶活性變化
在丁香酚麻醉保活過程中，?；顪囟仍礁撸珹ST活性越大，這可能是由于在較高溫下麻醉應(yīng)激及代謝程度較高，對心肌損傷較大，但隨著在清水中的復(fù)蘇，損傷得到一定程度的恢復(fù)。?；顪囟忍?0 ℃)，低溫應(yīng)激對魚體造成不可逆的損傷，很難恢復(fù)。這可能是由于長時間低溫?zé)o水環(huán)境使魚心肌收縮力加強(qiáng)，心肌細(xì)胞代謝加快，負(fù)荷超重，受損嚴(yán)重[21-22]。研究發(fā)現(xiàn)，鯽魚無水?；钜欢〞r間后，AST顯著升高，在清水中會有一定程度復(fù)蘇[23]。
2.2.3 對肌酐的影響
由圖3可見，?；? h后，肌酐(CREA)含量顯著上升(P<0.05)，尤其在0 ℃、6 ℃下，分別升高了58.51%和100.8%，復(fù)蘇24 h后仍高達(dá)87.67 μmol/L 和97.17 μmol/L； 2 ℃保活組，肌酐由?；钋暗?6.57 μmol/L升高到?；詈蟮?0.89 μmol/L，而清水中復(fù)蘇24 h后恢復(fù)至64.35 μmol/L。斑點叉尾鮰在低溫?zé)o水條件下?；?，腎功能會受到一定程度的損傷，腎臟對肌酐的過濾或排泄功能將弱化，導(dǎo)致肌酐含量顯著升高[24]，這也是長時間?；顣?dǎo)致魚體死亡的原因之一[25]。溫度是影響其損傷程度的重要因素，較高和較低溫度皆不利于斑點叉尾鮰的無水保活。
圖3 不同溫度條件下血液肌酐含量變化
2.2.4 對尿素氮的影響
尿素(BUN)氮同肌酐類似，是表征腎臟功能的重要指標(biāo)[26]。由圖4可知，麻醉?；? h后，尿素氮含量顯著升高(P<0.05)，升高率達(dá)40.3%～193%，尤其4 ℃和6 ℃組。不同?；顪囟认?，尿素氮含量差異顯著(P<0.05)，但變化趨勢相同。結(jié)合肌酐含量變化趨勢，麻醉無水?；钸^程會對腎臟造成不可逆的損傷，在清水中復(fù)蘇后也很難恢復(fù)。究其原因，在無水保活過程中，魚體腎功能機(jī)能發(fā)生障礙，腎臟代謝廢物功能受到抑制，血液中代謝產(chǎn)物不能被有效排除到體外，導(dǎo)致尿素氮和氨氮含量升高，引起氨氮中毒，進(jìn)一步加深損害程度，且這一損傷很難通過魚體自身調(diào)節(jié)恢復(fù)，使得整個?；罴盎謴?fù)過程中尿素氮都呈現(xiàn)上升趨勢[27-28]。
圖4 不同溫度條件下血液尿素氮活性變化
2.3 丁香酚麻醉?；顚Π唿c叉尾鮰機(jī)體營養(yǎng)成分和質(zhì)構(gòu)的影響
由表2可知，經(jīng)過5 h的無水?；?，總蛋白含量降低率達(dá)0.9%～8.5%，尤其是6 ℃組。粗脂肪含量在無水?；詈箫@著下降(P<0.05)，6 ℃組下降了18.98%，而 2 ℃組下降幅度只有3.46%。據(jù)推測，造成魚體蛋白質(zhì)和脂肪等功能物質(zhì)含量降低的原因，是由于魚在無水?；钸^程中還有一定的能量消耗，在沒有外部能量補(bǔ)充的情況下，蛋白質(zhì)和脂肪作為能源物質(zhì)被消耗。?；顪囟容^高時，丁香酚麻醉下的魚體未能進(jìn)入深度麻醉，代謝旺盛，能量消耗加劇，而溫度降低到0 ℃時，由于?；钋?18 ℃)到?；畹牡蜏丨h(huán)境溫差較大，溫度驟降，使魚的應(yīng)激要強(qiáng)于其他組，魚體對能量的消耗增加，促進(jìn)供能物質(zhì)蛋白質(zhì)減少[22]，而在2 ℃下，溫度造成的能量消耗達(dá)到最低。
食品的質(zhì)構(gòu)特性是體現(xiàn)魚肉質(zhì)量的重要指標(biāo)[29]，可以表征無水?；钸^程對魚肉在食用口感特性方面的影響。由表2可知，經(jīng)過5 h無水?；睿?0 ℃?；罱M，硬度、彈性和咀嚼性分別下降21.4%，38.8%，16.4%，在清水中恢復(fù)24 h后，分別恢復(fù)至保活前的92.4%，58.5%和93.0%。6 ℃?；罱M質(zhì)構(gòu)參數(shù)變化趨勢最小。究其原因，可能是因為在較低溫度下魚體肌肉活動受限，但維持代謝需要消耗體內(nèi)供能物質(zhì)，肌肉蛋白質(zhì)在不斷被降解，肌肉細(xì)胞間的結(jié)合力在逐漸降低，成分發(fā)生變化，造成硬度、彈性和咀嚼性參數(shù)下降[29]。研究表明，魚類在受到應(yīng)激反應(yīng)時會導(dǎo)致肌肉組織的軟化[30]；Hultmann等[31]通過對鱈魚刺激發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激會使硬度值顯著減小。
表2 丁香酚麻醉斑點叉尾鮰在不同保活溫度下魚肉品質(zhì)的變化
注：A-D表示在同一測量時間下數(shù)值差異顯著；a-c表示在同一溫度下數(shù)值差異顯著
2.4 丁香酚麻醉?；顚Π唿c叉尾鮰機(jī)體水解氨基酸含量的影響
由表3可知，水解氨基酸總量在無水?；詈蟮陀诔跏妓?，但在2 ℃保活組，人體所需的7種必需氨基酸Lys、Met、Leu、Ile、Thr、Val、Phe值均較?；钋按蠓忍岣?，顯示斑點叉尾鮰在2 ℃保活有較高的蛋白質(zhì)營養(yǎng)價值。
表3 丁香酚麻醉斑點叉尾鮰在不同溫度下無水?；? h魚肉中水解氨基酸含量的變化
曾鵬等[32]研究發(fā)現(xiàn)，鯽魚冰溫離水儲藏后，必需氨基酸值大幅提高，多種氨基酸水解含量都高于對照組鮮魚，有利于營養(yǎng)吸收。4 ℃和6 ℃下，各氨基酸成分都有所下降，溫度越高，下降幅度越大。在2 ℃下，各必需氨基酸的增加可能與低溫?；罾溥m應(yīng)后魚體抗凍能力增加，魚體為抵御低溫和重新適應(yīng)正常環(huán)境體內(nèi)正常的代謝活動所致[33]。有文獻(xiàn)指出[34]，生活在極地的魚類通過產(chǎn)生抗凍糖肽起到降低冰點抗凍的作用，而4 ℃和6 ℃下無水?；?，氮基酸含量降低，可能是在此溫度下?；?，斑點叉尾鮰代謝率較低溫(0 ℃、2 ℃)要高，食物蛋白質(zhì)經(jīng)過消化吸收獲得氨基酸并參與體內(nèi)代謝，氨基酸為試驗魚基礎(chǔ)代謝提供能量物質(zhì)而消耗。據(jù)報道，支鏈氨基酸可以作為硬骨魚提供能量代謝的物質(zhì)，可為低溫下活魚的代謝提供能量[35]。
3 結(jié)論
丁香酚麻醉斑點叉尾鮰成功無水?；? h且存活率≥80%的溫度范圍為2 ℃～6 ℃；無水保活5 h后，AST、ALT活性均有顯著升高，而在清水中復(fù)蘇24 h后，2 ℃?；罱M可恢復(fù)至對照組值；肌酐和尿素氮在?；? h后顯著增加(P<0.05)，對腎臟造成的不可逆的損傷，在6 ℃下影響最大；蛋白質(zhì)和脂肪等作為能源物質(zhì)被消耗，?；? h后顯著下降(P<0.05)，溫度越高，下降越明顯；質(zhì)構(gòu)指標(biāo)中，硬度、咀嚼性會顯著下降(P<0.05)，但在清水中復(fù)蘇24 h后顯著上升(P<0.05)，彈性較難恢復(fù)；2 ℃下?；顣r，8種必需氨基酸含量增加。綜上表明，2 ℃下?；?，丁香酚麻醉斑點叉尾鮰無水保活對魚肉的生理生化指標(biāo)影響較小，且基本可以恢復(fù)到初始水平，是較適宜的無水?；顪囟?。該研究結(jié)果揭示了以丁香酚作為麻醉劑，斑點叉尾鮰無水保活運輸過程中不同溫度下的生理生化特點，為進(jìn)一步研究保活過程中斑點叉尾鮰新陳代謝特點提供數(shù)據(jù)支撐和參考。
□
猜你喜歡
食品工業(yè)科技(2022年23期)2022-12-06
新作文·小學(xué)低年級版(2022年3期)2022-08-30
浙江大學(xué)學(xué)報（理學(xué)版）(2022年1期)2022-02-21
中國水產(chǎn)(2021年11期)2021-12-15
智慧少年·故事叮當(dāng)(2021年5期)2021-08-23
農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(2021年4期)2021-05-09
漁業(yè)研究(2020年5期)2020-10-28
農(nóng)業(yè)工程學(xué)報(2020年6期)2020-05-19
中小學(xué)信息技術(shù)教育(2019年1期)2019-03-04
今日農(nóng)業(yè)(2019年15期)2019-01-03
