鄭 嬌,程 璐,李春艷,徐 慧,唐苗苗,徐 盈,陳必良,張建芳

(空軍軍醫(yī)大學第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科,西安 710032;*通訊作者,E-mail:zhzhhao@163.com)

隨著全面二胎政策的實施,高齡孕婦占妊娠人群的比例急劇增高。高齡孕婦是指預產(chǎn)期年齡≥35歲的孕婦,隨著生育年齡的增大,染色體異常發(fā)生風險明顯增高[1]。本文對2013-2018年來我院進行產(chǎn)前診斷的2 793例高齡孕婦羊水細胞檢查結(jié)果進行回顧性研究,分析高齡以及高齡合并胎兒其他異常的孕婦情況及其染色體核型結(jié)果,探討針對高齡孕婦產(chǎn)前篩查及診斷策略。

1 資料方法

1.1 臨床資料

本研究選取2013-07～2018-09來我院進行產(chǎn)前診斷的高齡孕婦共2 793例,年齡34-55歲,產(chǎn)前診斷孕周為18-33周。經(jīng)產(chǎn)前遺傳咨詢,孕婦及家屬簽署知情同意書后,進行羊水穿刺術(shù)及胎兒染色體核型分析。

1.2 樣本采集

經(jīng)B超引導定位,在無菌條件下,采用羊水專用穿刺針經(jīng)腹部穿刺,抽取30 ml羊水。

1.3 染色體核型分析

將新鮮的羊水移入15 ml離心管1 500 r/min離心5 min,去上清留沉淀0.5 ml,分別接種于兩個培養(yǎng)瓶中,加入羊水細胞培養(yǎng)基。由于羊水細胞生長方式為貼壁生長,5-7 d換液一次,一般培養(yǎng)8-10 d后收獲細胞。用0.25%胰酶消化細胞,將細胞移入離心管中2 000 r/min離心,用含1%檸檬酸鈉和0.075氯化鉀(1 ∶1)的低滲液低滲15 min后,用3 ∶1的固定液(甲醇 ∶冰醋酸)預固定,1 500 r/min離心棄上清,再以3 ∶2的固定液(甲醇 ∶冰醋酸)固定兩次后,常規(guī)制片,G顯帶,然后進行羊水細胞染色體核型分析。每份標本至少計數(shù)20個分裂相,分析5-10個核型。

2 結(jié)果

2.1 異常核型統(tǒng)計結(jié)果

2 793例高齡孕婦胎兒中,核型正常2 610例(93.4%),異常核型共183例(6.6%)。其中21三體綜合征共計118例,占染色體異常總數(shù)的64.5%,其中包含單純21三體113例、羅氏易位1例以及21三體嵌合體4例;18三體18例,占染色體異常總數(shù)9.8%;13三體2例,占異?？倲?shù)1.1%;性染色體異常共計29例,占染色體異常總數(shù)15.8%,其中2例45,X,10例47,XXY,8例47,XXX,3例47,XYY,1例47,XXX/46,XX,1例47,XYY/46,XY/45,X,1例47,XXY/46,XY,1例46,XY/46,XX,1例46,XN,i(Xq)/45,X,1例46,X,inv(Y)?;結(jié)構(gòu)異常14例,其中染色體易位7例,染色體片段缺失3例,12號染色體短臂等臂1例,衍生染色體3例;2例標記染色體即47,XN,+mar(見表1)。

表1染色體異常核型檢查結(jié)果

Table1Statisticsoffetalabnormalkaryotypes

異常核型例數(shù)構(gòu)成比(%)21三體11864.518三體189.813三體21.1性染色體異常2915.8結(jié)構(gòu)異常147.7標記染色體21.1

2.2 高齡孕婦合并不同產(chǎn)前指征與染色體異常的關(guān)系

本研究通過總結(jié)2 793例高齡孕婦中,單純高齡以及高齡孕婦合并胎兒B超異常、無創(chuàng)DNA檢測結(jié)果異常、有不良孕產(chǎn)史等進行分類統(tǒng)計并分析各類中胎兒羊水核型染色體結(jié)果異常例數(shù)及在異?？倲?shù)中所占比例(見表2)。單純高齡中有99例異常核型,其中包含染色體易位8例(見表3);缺失46,XN,del(22)(q13.1)1例;衍生染色體3例(見表3);標記染色體47,XN,+mar 2例;性染色體異常共15例;21三體綜合征66例;18三體綜合征14例。高齡合并血清學異常中異常核型5例皆為21三體綜合征。高齡合并羊水量異常中異常核型3例皆為21三體綜合征。高齡合并心臟發(fā)育異常有4例異常核型,其中3例為21三體綜合征;1例為47,XXX。高齡合并腸管發(fā)育異常包含1例21三體以及1例18三體。高齡合并骨骼發(fā)育異常僅1例核型結(jié)果異常,其結(jié)果為mos 47,XN,+idic(12)(q12)[40]/46,XN[10]即就是Pallister-Killian綜合征。高齡合并神經(jīng)系統(tǒng)異常有異常核型1例,為18三體綜合征。高齡合并腎發(fā)育異常的核型結(jié)果皆正常。高齡合并無創(chuàng)異常有異常核型55例,其中21三體38例;13三體2例;18三體2例;8例47,XXY;4例47,XXX;1例47,XYY。高齡合并不良孕產(chǎn)史有2例異常核型,其中一例為46,XN,del(15)(q22)/46,XN;另外一例為46,XN,del(11)(q11)/46,XN。高齡合并其他異常含有1例21三體綜合征,1例18三體綜合征。

表2不同產(chǎn)前診斷指征異常核型檢出情況表

Table2Abnormalkaryotypeindifferentprenataldiagnosis

產(chǎn)前診斷指征n異常核型(例)異常檢出率(%)單純高齡2237994.4高齡合并血清學異常36513.8高齡合并羊水量異常3339.1高齡合并心臟發(fā)育異常10144.0高齡合并腸管發(fā)育異常9222.2高齡合并骨骼發(fā)育異常1616.3高齡合并神經(jīng)系統(tǒng)異常5911.7高齡合并腎發(fā)育異常1600高齡合并無創(chuàng)異常1005555.0高齡合并不良孕產(chǎn)史4924.1高齡合并其他異常13721.5

表3檢出異常核型中結(jié)構(gòu)異常核型表

Table3Structuralabnormalkaryotypesindetectedabnormalkaryotypes

結(jié)構(gòu)異常 核型例數(shù)易位 46,XN,t(3;8)(p14;q22)146,XN,t(10;18)(q22.3;q23)146,XN,t(4;7)(q35;p15)146,XN,t(4;16)(q23;q23)145,XN,t(14;21)(p11;q11)146,XN,t(3;5)(q25.1;q23)/46,XN146,XN,t(1;16)(p33;q22.1)/46,XN1缺失 46,XN,del(22)(q13.1)146,XN,del(15)(q22)/46,XN146,XN,del(11)(q11)/46,XN1衍生染色體46,XN,9qh+,-18,+der(18)t(18;18)(p11.3;q11.2)146,XN,-15,+der(15)t(1;15)(q44;q26)147,XN,+der(22)(q11q23)1

3 討論

高齡妊娠或高齡合并其他高危檢查指征如血清學異常、超聲異常、無創(chuàng)異常、不良孕產(chǎn)史或是夫妻雙方染色體異常等是進行產(chǎn)前診斷的重要臨床指征。目前,隨著社會結(jié)構(gòu)的變化,晚婚晚育以及二胎政策的實施,高齡孕婦的數(shù)量急劇增加,高齡孕婦出現(xiàn)不良孕產(chǎn)史、妊高癥、低體重兒的發(fā)生率明顯增高[2]。因高齡導致的出生缺陷率也隨之升高,我們也將迎來新的挑戰(zhàn)。

孕婦產(chǎn)前診斷的指征越多,出現(xiàn)染色體異常的機會也隨之增加[3-5]。本研究總結(jié)染色體異常核型結(jié)果表明三體綜合征所占異常核型總數(shù)的比例最高,尤其是21三體綜合征[6]。這主要是因為隨著年齡的增長,女性卵巢功能衰退,卵子老化引起質(zhì)量下降,減數(shù)分裂期染色體分裂不均或不分裂,染色體畸變風險大幅增加。其中包括高齡婦女卵母細胞體內(nèi)調(diào)控基因改變,使著絲粒相關(guān)蛋白合成缺陷;或是卵細胞減數(shù)分裂重組交換錯誤,最終導致染色體異常發(fā)生風險明顯增高[7,8]。

衍生染色體是一種由兩條以上染色體的重排或者是由于一條染色體發(fā)生多種畸變而產(chǎn)生的結(jié)構(gòu)重排的染色體。多是由于胎兒父母存在染色體易位在減數(shù)分裂過程中不平衡分裂導致的,本研究中有3例染色體異常為衍生染色體,其中46,XN,9qh+,-18,+der(18)t(18;18)(p11.3;q11.2)該胎兒染色體微陣列分析結(jié)果為arr[GRCh37]18q11.2q23(23,295,110-74,955,167)x3,arr[GRCh37]18q23(74,967,857-78,013,728)x3,arr[GRCh37]18p11.32(136,227-1,426,361)x1即18號染色體長臂大部分三體,Decipher、ISCA、Clinvar等數(shù)據(jù)庫及參考文獻顯示該區(qū)域的重復與先心病、神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育異常、智力低下、肌張力高等多種臨床表現(xiàn)相關(guān)[9,10]。核型為46,XN,-15,+der(15)t(1;15)(q44;q26)胎兒染色體微陣列分析結(jié)果為arr[GRCh37]1q44(244,635,855-249,224,684)x3,arr[GRCh37]15q26.1q26.3(91,559,244-102,429,040)x1,顯示15號染色體15q26.1q26.3區(qū)域有約10.87 Mb的缺失,該缺失區(qū)域包含IGF1R、CHD2、RGMA等22個OMIM基因,參考文獻表明CHD2基因單倍劑量不足與智力低下、癲癇相關(guān),Pubmed、ISCA、Clinvar、Decipher等數(shù)據(jù)庫及參考文獻顯示該區(qū)域缺失的患者有癲癇、語言障礙、行為異常、先心病、顱面部異常等臨床表現(xiàn)[11,12]。核型結(jié)果為47,XN,+der(22)(q11q23)胎兒經(jīng)過全基因組SNP微陣列分析結(jié)果為arr22q11.1q11.21(16,079,545-20,743,536)×3,顯示22號染色體q11.1q11.21區(qū)帶發(fā)生4.67 Mb重復,該區(qū)域內(nèi)基因有POTEH、OR11H1、CCT8L2、TPTE、XKR3、HSFYP1、GAB4、CECR7、IL17RA等,與腭裂及心臟發(fā)育不全等臨床表現(xiàn)相關(guān)。

異常核型mos 47,XN,+idic(12)(q12)[40]/46,XN[10]即就是12號染色體短臂等臂嵌合體,該12短臂四體的異常核型是Pallister-Killian綜合征的典型表現(xiàn),其患者可能有顱面部異常(如大前額、眼距寬、鼻梁短而扁平、鼻孔前傾、短頸)、發(fā)育遲緩、智力障礙、聽力低下、癲癇、肌張力低、皮膚色素沉著、上下肢不勻稱且較短、先天性心臟病等臨床表現(xiàn)。在產(chǎn)前,PKS胎兒可能存在的超聲異常情況如下:膈疝、胎兒水腫、胎兒超重、腦室增大、先天性心臟缺陷、胃部顯示不清以及骨骼發(fā)育異常等。

綜上所述,高齡是染色體異常發(fā)生的重要產(chǎn)前診斷檢查指征之一,所以對高齡孕婦進行有效的遺傳咨詢指導,充分告知風險是十分必要的。隨著產(chǎn)前診斷技術(shù)的發(fā)展,充分地將NIPT、羊水細胞核型分析及分子生物學手段運用于高齡孕產(chǎn)婦的產(chǎn)前診斷中去,從而防止出生缺陷,提高人口素質(zhì)。