高倩倩 姜南 張建文

[摘要]目的：探討自體脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合透明質(zhì)酸在面部年輕化中的應(yīng)用效果。方法：將收治的40例面部年輕化就醫(yī)者，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對照組，每組20例。實(shí)驗(yàn)組行水光注射脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合透明質(zhì)酸治療，對照組水光注射透明質(zhì)酸。結(jié)合VISIA檢測評估面部情況，比較患者治療前后的斑點(diǎn)、毛孔、皺紋、皮膚紋理及紫外線色斑情況。結(jié)果：治療后，實(shí)驗(yàn)組在斑點(diǎn)、皺紋、皮膚紋理及紫外線色斑等方面的改善幅度與對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合透明質(zhì)酸能更好地改善老化皮膚，隨著技術(shù)的不斷發(fā)展以及經(jīng)驗(yàn)積累，其在面部年輕化方面將有更大的應(yīng)用空間。

[關(guān)鍵詞]脂肪源性干細(xì)胞;透明質(zhì)酸;皮膚年輕化;水光注射

[中圖分類號]R622? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號]1008-6455（2019）03-0027-04

Abstract： Objective? To investigate the effect of adipose-derived stem cells combined with hyaluronic acid in facial rejuvenation. Methods? 40 cases of facial rejuvenation were randomly divided into the experimental group and the control group， 20 cases in each group. The experimental group was injected with adipose-derived stem cells combined with hyaluronic acid by water injection. The control group was injected with hyaluronic acid. Face condition was assessed by VISIA， and the scores of spots， pores， wrinkles， skin textures and ultraviolet spots were compared before and after treatment. Results? After treatment， the improvement range of spots， wrinkles， skin texture and ultraviolet spots in the experimental group were significantly different from those in the control group， the differences were statistically significant（P<0.05）. Conclusion? Adipose-derived stem cells combined with hyaluronic acid can better improve the aging skin. With the development of technology and the accumulation of experience， it will have a greater application space in facial rejuvenation.

Key words： adipose-derived stem cells; hyaluronic acid; facial rejuvenation;? water injection

皮膚老化是影響面部年輕化的重要原因，而紫外線照射又是外源性皮膚老化的關(guān)鍵因素，長期接觸紫外線的皮膚表現(xiàn)為粗糙、皺紋加深、失去彈性，常伴有色素沉著或脫失[1]。隨著經(jīng)濟(jì)的高速發(fā)展，生活壓力及工作競爭逐漸增加，人們更加注重自我形象。在眾多面部年輕化的治療方案中，安全、微創(chuàng)、恢復(fù)快的水光注射深受求美者的青睞[2]，目前臨床上水光注射最常用的藥物是透明質(zhì)酸。2001年，Zuk等[3]第一次在脂肪組織中找到間充質(zhì)干細(xì)胞，稱為脂肪源性干細(xì)胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs），是一種具有多項(xiàng)分化潛能的干細(xì)胞，近年來成為干細(xì)胞中的“明星”細(xì)胞，成為各種損傷修復(fù)研究的重點(diǎn)[4-6]，其旁分泌功能對抗衰老更是近年來研究的熱點(diǎn)[7]。該實(shí)驗(yàn)將從就醫(yī)者自身抽取的脂肪細(xì)胞，通過體外培養(yǎng)制成干細(xì)胞懸液，聯(lián)合透明質(zhì)酸通過水光針注射到就醫(yī)者面部，觀察其對面部年輕化的作用效果。

1? 資料和方法

1.1 一般資料：選取2016年12月-2017年6月行面部年輕化的40例女性就醫(yī)者，年齡28～52歲，隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組與對照組，每組20例。實(shí)驗(yàn)組接受水光注射治療（基底液為透明質(zhì)酸+脂肪源性干細(xì)胞）;對照組接受水光注射儀治療（基底液為單純透明質(zhì)酸）。兩組就醫(yī)者性別、年齡等一般情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。所有就醫(yī)者均由醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)參與，在治療前均同意參與本研究，并簽署知情同意書。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 納入標(biāo)準(zhǔn)：①就醫(yī)者有主動(dòng)求美意識，無明顯手術(shù)禁忌證;②體檢無嚴(yán)重心、肝、腎疾病;③腹部、大腿存有一定數(shù)量的皮下脂肪。

1.2.2 排除標(biāo)準(zhǔn)：①免疫功能障礙性疾病者;②瘢痕體質(zhì)者;③對透明質(zhì)酸過敏者;④孕婦及哺乳期女性;⑤未滿18歲;⑥注射部位處于感染活動(dòng)期。

1.3 方法

1.3.1 脂肪干細(xì)胞的制備：供區(qū)一般選擇大腿外側(cè)部脂肪。碘伏常規(guī)消毒，吸脂部位常規(guī)局部麻醉（腫脹麻醉液為2%利多卡因15ml+生理鹽水500ml+0.1%腎上腺素0.5ml），麻醉時(shí)應(yīng)充分浸潤，麻醉范圍應(yīng)超出標(biāo)記線1cm。選擇大小適宜的吸脂針，連接20ml螺旋注射器，負(fù)壓控制在20ml注射器5ml左右真空，止血鉗固定，由深層向淺層逐層呈扇形反復(fù)抽吸，盡量保證脂肪的完整，減少損傷，抽取100ml純脂肪。

脂肪組織送至干細(xì)胞分離室，參考Zuk等[3]的膠原酶消化法提取培養(yǎng)干細(xì)胞，具體過程如下：脂肪組織用無菌生理鹽水反復(fù)沖洗，直至無血色殘留。用眼科鑷剔除可見的血管和纖維結(jié)締組織，揀選出脂肪顆粒，眼科剪充分剪碎，分裝50ml離心管中，1 200r/min離心5min（離心半徑13cm）。離心后棄上層油脂及下層沖洗液，將脂肪層重新收集至離心管中，向脂肪組織中加入無菌的體積分?jǐn)?shù)0.1%的Ⅰ型膠原酶，置于37℃恒溫?fù)u床震蕩消化45min，脂肪成糊狀，以1 200r/min，離心10min。離心后組織由上而下分為3層，依次為脂肪層、生理鹽水層、沉淀層。取各個(gè)離心管內(nèi)沉淀層于同一離心管內(nèi)，以70μm篩網(wǎng)過濾，1 200r/min離心5min，棄上清，加入生理鹽水20ml，以1 200r/min離心5min，調(diào)整細(xì)胞濃度備用。每次分離后去少量細(xì)胞進(jìn)行體外標(biāo)準(zhǔn)條件下細(xì)胞培養(yǎng)，傳代培養(yǎng)，取P3代細(xì)胞，觀察細(xì)胞貼壁生長活性，進(jìn)行流式細(xì)胞儀鑒定、細(xì)菌培養(yǎng)排除污染，以證實(shí)提取的細(xì)胞群含脂肪來源干細(xì)胞。每例就醫(yī)者獲取的細(xì)胞總數(shù)≥1×107，細(xì)胞濃度≥（0.5～1.0）×109/L。

1.3.2 水光注射治療：就醫(yī)者取仰臥位，在面部皮膚涂3～5mm厚的復(fù)方利多卡因乳膏，保持30min，冬季在復(fù)方利多卡因乳膏上覆蓋1層保鮮膜。麻醉效果顯現(xiàn)后用無菌紗布清除麻藥，消毒皮膚。將裝有藥液（實(shí)驗(yàn)組為非交聯(lián)透明質(zhì)酸2.5ml、脂肪源性干細(xì)胞懸液2.5ml通過震蕩混勻;對照組為單純非交聯(lián)透明質(zhì)酸5ml）的注射器固定在水光槍上。根據(jù)注射不同部位調(diào)整參數(shù)，調(diào)試水光針針頭長0.8～1.2mm，注射時(shí)左手繃緊皮膚，由上到下，由外到內(nèi)進(jìn)行注射，保持針頭與皮膚垂直，過程中動(dòng)作輕柔。操作完畢后外敷冷藏過的醫(yī)院面膜30～60min。

1.4 觀察指標(biāo)：進(jìn)行治療前及治療后2周、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月對就醫(yī)者面部皮膚進(jìn)行VISIA檢測（該檢測報(bào)告結(jié)果以百分位數(shù)分值表示，百分位數(shù)分值描述與患者同年齡、同性別、同皮膚類型的其他人相比較的皮膚特征評分，分值越高越好），根據(jù)面部評估報(bào)告結(jié)果，對就醫(yī)者治療前后的斑點(diǎn)、皺紋、皮膚紋理、紫外線色斑情況進(jìn)行比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：數(shù)據(jù)錄入SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，以Levene檢驗(yàn)進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn)，方差齊性資料比較采用t檢驗(yàn)，非方差齊性資料比較采用兩個(gè)獨(dú)立樣本W(wǎng)ilcoxon秩和檢驗(yàn)，若P<0.05則認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1 治療后相關(guān)指標(biāo)比較：治療前兩組就醫(yī)者在斑點(diǎn)、皺紋、皮膚紋理及紫外線色斑情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。治療后2周，兩組就醫(yī)者斑點(diǎn)、皺紋、皮膚紋理及紫外線色斑情況均較治療前有所改善，且實(shí)驗(yàn)組明顯優(yōu)于對照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。治療后1個(gè)月，實(shí)驗(yàn)組斑點(diǎn)、皺紋、皮膚紋理及紫外線色斑情況均較治療前有所改善，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;對照組各指標(biāo)評分與治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表2。治療后3個(gè)月，實(shí)驗(yàn)組斑點(diǎn)、皺紋、皮膚紋理及紫外線色斑情況與治療前比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。治療后6個(gè)月，實(shí)驗(yàn)組斑點(diǎn)、皺紋、皮膚紋理及紫外線色斑情況與治療前比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），見表4。

2.2? 不良反應(yīng)發(fā)生情況：注射過程中40例就醫(yī)者針眼處均出現(xiàn)不同程度少量出血，經(jīng)局部按壓止血未用止血藥物，注射過程中疼痛均能耐受，治療組1例就醫(yī)者面部腫脹稍明顯，給予重復(fù)冰敷后緩解，40例就醫(yī)者均未發(fā)生感染。治療后兩組就醫(yī)者自覺面部皮膚均較前改善。實(shí)驗(yàn)組典型病例見圖1～2。

3? 討論

水光注射是通過空心針將營養(yǎng)物質(zhì)及藥物精準(zhǔn)注入皮膚特定層次[8]。目前臨床上常用于水光注射的物質(zhì)主要是透明質(zhì)酸[2]。透明質(zhì)酸是一種以葡萄糖醛酸和N-乙酰氨基葡萄糖胺為雙糖單位交替而成的粘多糖，其生理學(xué)功能是為組織提供機(jī)械支持、彈性連接、溶質(zhì)傳送、潤滑、保存水分[9]。

面部皮膚年輕化的新視角[10]在于從細(xì)胞和分子水平進(jìn)行調(diào)控、延緩細(xì)胞衰老。本實(shí)驗(yàn)將自體脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合透明質(zhì)酸通過水光針注射到皮膚真皮層，通過ADSCs在注射部位分泌的TGF-β可抑制B16黑色素瘤細(xì)胞中黑色素酶的合成及絡(luò)氨酸酶的活性和相關(guān)蛋白的表達(dá)[11]，還可通過減少凋亡相關(guān)的成纖維細(xì)胞逆轉(zhuǎn)氧化應(yīng)激引起的細(xì)胞凋亡，降低光老化皮膚中黑色素的含量[12]，抗氧化劑可抑制黑色素形成的氧化反應(yīng)，干擾色素和黑素小體的轉(zhuǎn)移分布，在皮膚發(fā)揮美白效應(yīng)[13]。ADSCs可以改善中波紫外線引起的人體皮膚成纖維細(xì)胞增殖能力下降、膠原纖維含量降低及表皮皺紋等問題[14]，減少膠原蛋白的降解及組織損傷，從而預(yù)防及改善光老化引起的皺紋形成。ADSCs在與同環(huán)境細(xì)胞相互作用過程中，通過旁分泌由細(xì)胞內(nèi)向細(xì)胞外分泌某些細(xì)胞因子[15]。這些因子通過旁分泌作用于相應(yīng)的靶細(xì)胞，控制和影響其生存，促進(jìn)周圍血管生成，成纖維細(xì)胞增生、遷移及膠原蛋白的合成，這些因素相互影響最終改善老化失去彈性的皮膚[16]。在進(jìn)行自體脂肪源性干細(xì)胞相關(guān)治療后，就醫(yī)者皮膚中的膠原含量會(huì)顯著提高，對皮膚的生長因子、自體脂肪源性干細(xì)胞有保護(hù)作用，從根本上改善就醫(yī)者的面部皮膚。自體脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合透明質(zhì)酸通過水光針注射到皮膚真皮層，真正做到注射均勻、微創(chuàng)、并發(fā)癥少，因?yàn)閮H涉及到皮膚真皮層，對機(jī)體的正常結(jié)構(gòu)組織幾乎無影響，能使求美者真正做到優(yōu)雅的老去，這也是更多的求美者要求的，能被更多的求美者所接受。

綜上所訴，ADSCs用于微創(chuàng)面部年輕化的發(fā)展前景很廣闊，但該實(shí)驗(yàn)研究的樣本較少，觀察周期較短，由于費(fèi)用較高，就醫(yī)者長期依從性差，研究內(nèi)容不夠完善和具體，值得臨床工作者進(jìn)一步研究和探索。

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[收稿日期]2018-05-24

本文引用格式：高倩倩，姜南，張建文.脂肪源性干細(xì)胞聯(lián)合透明質(zhì)酸在皮膚年輕化中的療效觀察 [J].中國美容醫(yī)學(xué)，2019，28（3）：27-30.