馬東曉，馬一涵，何廣宏，李 艷

2.商丘市第四人民醫(yī)院，河南商丘 476000

3.河南省洛陽(yáng)正骨醫(yī)院(河南省骨科醫(yī)院)，河南洛陽(yáng) 471002

急性胃炎胃損傷和消化性潰瘍是臨床常見(jiàn)疾病，發(fā)病原因多，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。在胃損傷的治療過(guò)程中，中醫(yī)藥治療應(yīng)用廣泛。中醫(yī)認(rèn)為，急性胃損傷應(yīng)加強(qiáng)胃腸黏膜屏障功能，改善血液循環(huán)，發(fā)揮活血化瘀的作用，能夠促進(jìn)潰瘍及早愈合，增強(qiáng)預(yù)防復(fù)發(fā)的效果。蟲(chóng)草胃舒康(Chongcao Weishukang,CCWSK)由砂仁、田三七、烏賊骨、烏藥、白芨、川貝、蛹蟲(chóng)草等16味傳統(tǒng)中藥組成，具有活血化瘀、理氣止痛、收斂系統(tǒng)的作用。臨床上主要用于治療消化性潰瘍、藥物等引起的急慢性胃黏膜損傷及消化功能紊亂等癥狀。

本研究通過(guò)小鼠急性乙醇性胃損傷模型[1-3]探討蟲(chóng)草胃舒康對(duì)急性胃損傷的保護(hù)作用，為其臨床開(kāi)發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1材料

1.1.1動(dòng)物健康清潔級(jí)昆明小鼠50只，雌雄兼用，體質(zhì)量(33±3) g，由河南科技大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK(豫)2015-0004。

1.1.2試劑無(wú)水乙醇(上海市西隴化工有限公司，批號(hào)：20130609)；4%甲醛溶液(市場(chǎng)自購(gòu))；蟲(chóng)草胃舒康各味中藥(購(gòu)于洛陽(yáng)市百家藥店)；超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)測(cè)定試劑盒(南京市建成生物科技有限公司，批號(hào):20151030)；丙二醛(malondialdehyde,MDA)測(cè)定試劑盒(南京市建成生物科技有限公司，批號(hào):20151003)；樂(lè)天胃舒寧顆粒(甘肅省西峰制藥有限責(zé)任公司，批號(hào)：20150827)。

1.1.3儀器Epoch全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀，美國(guó)BioTek公司。

1.2實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1溶液及其配制無(wú)水乙醇蒸餾水配制成70%乙醇溶液。蟲(chóng)草胃舒康：取適量1.0 g·mL-1蟲(chóng)草胃舒康蒸餾水分別配制成6.25%和12.5%的蟲(chóng)草胃舒康溶液，備用。

1.2.2分組與給藥健康小鼠50只，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為正常組(生理鹽水)、模型組(生理鹽水)、陽(yáng)性對(duì)照藥(25%胃舒寧顆粒組)、6.25% CCWSK組(低劑量組)和12.5% CCWSK組(高劑量組)，均采用灌胃給藥，每天1次，共5 d。實(shí)驗(yàn)組小鼠70%乙醇(0.1 mL·10 g-1)灌胃誘導(dǎo)小鼠急性胃損傷。

1.2.3標(biāo)本采集與測(cè)定酒精灌胃4 h后對(duì)小鼠進(jìn)行眼球取血，檢測(cè)各組小鼠血清MDA和SOD，然后頸椎脫臼處死老鼠并分離組織，記錄胃損傷積分，積分方法采用Hou等、劉世艷等報(bào)道的方法[4-5]。

1.2.4檢測(cè)方法MDA測(cè)定：吸取0.3 mL MDA檢測(cè)工作液于0.5 mL離心管中，再加入0.1 mL的血漿?；旌弦涸?00 ℃水浴中保溫30 min后，立即置于冰浴中冷卻，10 000 r·min-1離心10 min，吸取300 μL血漿于96孔板中，測(cè)定樣品在532 nm處的吸光度。SOD測(cè)定：測(cè)定前將試劑一、二、四室溫放置，使試劑的溫度不低于室溫后再測(cè)定。試劑一、二、三，樣品，試劑四，雙蒸水按比例加入后充分混勻，室溫靜置30 min后，560 nm處測(cè)定各管吸光度。

2 結(jié)果

2.1蟲(chóng)草胃舒康的保護(hù)作用乙醇灌胃后，模型組的小鼠胃黏膜凹凸不平，黏膜受到損害，胃黏膜會(huì)充血、水腫以及毛細(xì)血管的擴(kuò)張，黏膜表面可見(jiàn)出血點(diǎn)甚至大片瘀斑，與正常組比較小鼠胃黏膜損傷積分和抑制率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明造模成功。CCWSK低、高劑量組小鼠胃黏膜損傷積分別為(18.2±2.3)分和(13.3±2.1)分，與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組小鼠胃黏膜損傷抑制率為14.95%，與模型組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，高劑量組小鼠胃黏膜損傷抑制率為37.85%，與模型組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (P<0.05)，如圖1。說(shuō)明蟲(chóng)草胃舒康對(duì)小鼠急性乙醇性胃損傷有保護(hù)作用，并且高劑量組保護(hù)作用更強(qiáng)，見(jiàn)表1。

A:正常對(duì)照組；B:模型組；C:陽(yáng)性對(duì)照組；D:CCWSK低劑量組；E:CCWSK高劑量組。圖1 蟲(chóng)草胃舒康對(duì)小鼠急性乙醇性胃損傷模型胃組織的影響

2.2蟲(chóng)草胃舒康對(duì)小鼠SOD、MDA的影響乙醇灌胃后，模型組小鼠血漿SOD和MDA與正常組相比出現(xiàn)顯著的升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；低劑量組小鼠血漿SOD和MDA分別為(383±65) U·mL-1和(9.69±1.69) nmol·mL-1，與模型組相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；高劑量組小鼠血漿SOD和MDA分別為(481±50) U·mL-1和(8.21±1.25) nmol·mL-1，與模型組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明蟲(chóng)草胃舒康可以增強(qiáng)小鼠在乙醇性胃損傷過(guò)程中氧自由基的清除能力，具有降低氧化應(yīng)激損傷的作用，見(jiàn)表2。

表1 蟲(chóng)草胃舒康乙醇小鼠急性胃損傷模型的保護(hù)作用

表2 蟲(chóng)草胃舒康對(duì)小鼠急性乙醇胃損傷模型血清SOD、MDA的影響

3 討論

過(guò)量飲酒甚至酗酒可引發(fā)非常嚴(yán)重的社會(huì)問(wèn)題，我國(guó)每年大約11萬(wàn)多人死于酒精毒性作用，急性乙醇攝取影響?zhàn)さ鞍坠丫厶墙Y(jié)構(gòu)的合成，誘發(fā)氧自由基導(dǎo)致黏膜脂質(zhì)過(guò)氧化，可引起胃黏膜糜爛、出血甚至潰瘍形成。急性乙醇攝取可引起炎癥因子和細(xì)胞因子的釋放，對(duì)胃黏膜造成二次傷害，乙醇對(duì)胃黏膜的損傷是一個(gè)多途徑的復(fù)雜過(guò)程，目前臨床上治療的方案仍較局限。研究乙醇性急性的胃黏膜損害具有重要的臨床意義和社會(huì)意義[6-7]。

SOD為自由基清除劑，是黏膜的保護(hù)因子之一，其活力高低反映機(jī)體清除自由基的能力[8]。它廣泛存在于生物體的各種組織中，能清除自由基O2.-(超氧陰離子自由基)，而O2.-具有細(xì)胞毒性，可使脂質(zhì)過(guò)氧化，損傷細(xì)胞膜，引起炎癥等疾病。MDA為氧自由基攻擊生物膜不飽和脂肪酸發(fā)生脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)的終產(chǎn)物，可反映胃黏膜受自由基攻擊所致?lián)p傷的程度[8]。CCWSK的病理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，其有減少局部炎癥水腫的作用，為CCWSK保護(hù)急性乙醇性胃損傷提供了理論依據(jù)。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用小鼠乙醇灌胃建立急性乙醇性胃損傷模型，研究CCWSK對(duì)其改善作用及其機(jī)制。在正常情況下，胃黏膜表面有一層動(dòng)態(tài)的黏液-HCO3-屏障，起著物理隔離與中和胃腔內(nèi)向黏膜表面滲透的H+的作用，以保護(hù)上皮細(xì)胞，避免直接受損[9]。乙醇屬于脂溶性，大量高濃度的乙醇會(huì)直接破壞細(xì)胞的結(jié)構(gòu)，引起組織缺血缺氧而導(dǎo)致黏膜組織的損傷[10]。吳靈飛等的實(shí)驗(yàn)研究表明，給大鼠灌胃乙醇后胃黏膜出現(xiàn)糜爛或出血，顯示了這種損傷效應(yīng)[11]。本實(shí)驗(yàn)的研究表明：模型組小鼠胃黏膜損傷明顯，血清中MDA含量升高、SOD活力下降，表明脂質(zhì)過(guò)氧化反應(yīng)、炎癥反應(yīng)參與了乙醇致小鼠胃黏膜損傷的病理過(guò)程；CCWSK低、中劑量給藥組病理?yè)p傷積分均比模型組低而損傷抑制率均比模型組要高，而且CCWSK低劑量組損傷抑制率低于高劑量組，說(shuō)明CCWSK可以提高小鼠的損傷抑制能力，并且有劑量相關(guān)性。CCWSK對(duì)胃損傷動(dòng)物血清SOD、MDA水平的影響結(jié)果顯示，血清中MDA含量下降、SOD活力升高，說(shuō)明血清中SOD含量增加、MDA含量下降，可能與CCWSK清除自由基而抗脂質(zhì)過(guò)氧化、炎癥反應(yīng)并對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用相關(guān)。對(duì)CCWSK抗炎作用的實(shí)驗(yàn)研究顯示，該藥具有抗炎作用[12-13]，說(shuō)明CCWSK對(duì)胃黏膜的保護(hù)作用可能與降低血漿MDA含量、增加血漿SOD的含量有關(guān)[14-15]。但其對(duì)炎癥因子的影響等機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。