袁明明，任曉燕，陶玉梅，陳婷婷，蔡南南，金曉霞，衛(wèi)穎澤，何 松

0 引 言

乳腺癌作為我國女性最常見的惡性腫瘤之一，近年來發(fā)病率呈上升趨勢，新增病例占所有乳腺癌的12.2%，占全球乳腺癌病死率的9.6%［1-2］。2011年St.Gallen國際乳腺癌會議將乳腺癌分為5種分子分型：Luminal A型、HER2陰性Luminal B型、HER2陽性Luminal B型、HER2過表達(dá)型、三陰型。2017年進(jìn)一步完善，并根據(jù)不同分子類型推薦不同的治療方案［3］。乳腺癌易感基因 1（breast cancer suscepti?bility gene 1，BRCA1）是乳腺癌最常見的危險因素之一，具有功能性BRCA1突變的女性患乳腺癌的風(fēng)險高達(dá)80%［4］。乳腺癌中約10%具有遺傳性，40%～50%的遺傳性乳腺癌病例歸因于BRCA1基因的突變［5］。除了在遺傳性乳腺癌中發(fā)揮作用之外，BRCA1還參與了散發(fā)性浸潤性乳腺癌和卵巢癌的發(fā)生發(fā)展。針對BRCA1基因突變DNA修復(fù)缺陷的靶向治療也展現(xiàn)出遠(yuǎn)大前景［6］。本研究旨在探討B(tài)RCA1在散發(fā)性浸潤性乳腺癌中的表達(dá)情況及其相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料回顧性分析2015年1月至2017年12月南通市腫瘤醫(yī)院病理科散發(fā)性浸潤性乳腺癌病例標(biāo)本618份。散發(fā)性乳腺癌病例定義為沒有直系親屬患有乳腺癌的家族史的病例。所有患者術(shù)前均未行放療、化療等任何治療。年齡29～89歲，中位年齡55歲。標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚切片，HE染色。

1.2 免疫組織化學(xué)染色一抗ER（EP1/兔單克隆抗體，稀釋度1∶400）、PR（EP2/兔單克隆抗體，稀釋度1∶1200）購自北京中杉金橋有限公司。HER2（A0485/兔多克隆抗體，稀釋度1∶800）、Ki67（MIB-1/鼠單克隆抗體，稀釋度1∶600）及EnVision試劑盒購自DAKO公司。BRCA1（MS110/鼠單克隆抗體，即用型）及EliVisionTMplus試劑盒購自邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。ER、PR、HER2及Ki67均采用En?Vision（二步法）完成，BRCA1采用EliVisionTMplus（二步法）完成，操作步驟按照操作手冊及試劑說明書進(jìn)行。Ki67使用檸檬酸鹽修復(fù)液修復(fù)抗原，其余指標(biāo)均采用EDTA修復(fù)。所有患者均設(shè)陽性和陰性對照。ER、PR以子宮內(nèi)膜做陽性對照，BRCA1、HER2以乳腺癌已知陽性做對照，Ki67以闌尾做陽性對照，PBS代替一抗做陰性對照。

1.3 結(jié)果判定浸潤性乳腺癌區(qū)域出現(xiàn)定位明確的棕黃色顆粒判定為特異性陽性反應(yīng)。BRCA1、ER、PR、Ki67陽性定位在細(xì)胞核，HER2陽性定位在細(xì)胞膜。BRCA1參照Nielsen標(biāo)準(zhǔn)［7］：陽性細(xì)胞數(shù)≤5%為陰性（-），6%～20%為弱陽性（+），＞20%為強(qiáng)陽性（++）。ER、PR、HER2的免疫組化染色評分參照2013年美國臨床腫瘤學(xué)會/美國病理學(xué)家學(xué)會推薦：ER、PR以1%作為陽性表達(dá)的臨界值，HER2以＞10%浸潤癌細(xì)胞呈現(xiàn)強(qiáng)而完整的細(xì)胞膜染色定義為陽性（3+），0和1+定義為陰性反應(yīng)。HER2免疫組化評分為2+的患者均再行熒光原位雜交，檢測有無HER2基因擴(kuò)增，分為HER2陽性和HER2陰性。

1.4 分型標(biāo)準(zhǔn)組織學(xué)分型標(biāo)準(zhǔn)及組織學(xué)分級參照2012年乳腺腫瘤WHO分類。分子分型標(biāo)準(zhǔn)參照2017年St.Gallen國際乳腺癌會議共識［3］采用免疫組織化學(xué)替代分型。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行分析。計量資料采用均數(shù)和標(biāo)準(zhǔn)差（xˉ±s）描述，計數(shù)資料采用頻數(shù)描述，等級資料多組間比較采用kruskal-wal?lis秩和檢驗，兩變量相關(guān)性采用等級相關(guān)檢驗。以P≤0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 BRCA1、ER、PR等在乳腺癌中的表達(dá)BRCA1陽性率為44.2%（273/618），其中弱陽性（+）、強(qiáng)陽性（++）分別為30.3%、13.9%。ER、PR、HER2陽性率分別為60.8%（376/618）、54.7%（338/618）、24.9%（154/618）。Ki67增殖指數(shù)≤30%為70.7%（437/618），＞30%為29.3%（181/618）。陽性細(xì)胞HER2定位于細(xì)胞膜，其余定位于細(xì)胞核，呈棕黃色顆粒。見圖1。

圖1 散發(fā)性浸潤性乳腺癌患者各基因蛋白的表達(dá)（×200）Figure 1 Expressions of BRCA1，ER，PR，HER2 and Ki67 in sporadic invasive breast cancer（×200）

2.2 BRCA1表達(dá)與臨床病理特征的相關(guān)性三陰型乳腺癌BRCA1陽性表達(dá)率明顯低于其他4型（P＜0.05）。伴髓樣特征的癌BRCA1陽性表達(dá)率明顯低于其他4種乳腺癌（P＜0.05）。見表1。

表1 散發(fā)性浸潤性乳腺癌患者BRCA1與臨床病理特征的相關(guān)性Table 1 Correlation of the expression of BRCA1 with the clinicopathologic parameters of breast cancer

2.3 BRCA1表達(dá)與ER、PR、HER2及Ki67表達(dá)的相關(guān)性BRCA1表達(dá)在ER、HER2及Ki67中差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。BRCA1和HER2在乳腺癌中的表達(dá)呈顯著正相關(guān)（r=0.117，P＜0.01）。見表2。

表2 散發(fā)性浸潤性乳腺癌患者BRCA1與臨床各指標(biāo)表達(dá)的相關(guān)性Table 2 Correlation of the expression of BRCA1 with clin?cical indexes of breast cancer

3 討 論

BRCA1定位于染色體17q21，全長100 kb，含有24個外顯子【8】。BRCA1涉及細(xì)胞周期的調(diào)控、基因轉(zhuǎn)錄以及DNA的損傷修復(fù)［9-10］。本研究顯示在618例散發(fā)性浸潤性乳腺癌中，BRCA1表達(dá)定位于細(xì)胞核，55.8%的病例表達(dá)缺失，30.3%病例為弱表達(dá)。BRCA1表達(dá)下調(diào)促進(jìn)了散發(fā)性浸潤性乳腺癌發(fā)生發(fā)展進(jìn)程。

本研究中三陰型乳腺癌占所有亞型的19.3%，其患者發(fā)病年齡較年輕，腫瘤分化程度差，易發(fā)生復(fù)發(fā)及轉(zhuǎn)移，預(yù)后差于其他亞型。BRCA1基因突變與三陰型乳腺癌有著密切聯(lián)系［11］。散發(fā)性三陰型乳腺癌與BRCA1相關(guān)性乳腺癌之間組織學(xué)形態(tài)和分子特征存在很大的相似性。本研究中，三陰型乳腺癌相比于其他亞型乳腺癌，BRCA1表達(dá)降低，這與國內(nèi)外報道BRCA1基因改變的檢測結(jié)果［12］相符。Gonzalez?Angulo 等［13］研究發(fā)現(xiàn)三陰型乳腺癌中BRCA1基因突變的發(fā)生率為19.5%，并且患有BRCA1突變的三陰型乳腺癌患者復(fù)發(fā)風(fēng)險顯著降低。本研究中19例伴髓樣特征的乳腺癌中BRCA1的表達(dá)率為21.1%，且均為弱表達(dá)，低于其他類型乳腺癌。19例伴髓樣特征的乳腺癌中13例為三陰型乳腺癌，4例為HER2過表達(dá)型，其BRCA1表達(dá)的降低與分子分型也有關(guān)聯(lián)。對于伴髓樣特征的散發(fā)性浸潤性乳腺癌患者，BRCA1基因檢測可用于識別獨立分子亞型潛在的突變攜帶者［14］。

同時，本研究證實了BRCA1表達(dá)與ER、HER2表達(dá)及Ki67增殖指數(shù)密切相關(guān)，進(jìn)一步印證了與乳腺癌分子分型的相關(guān)性。據(jù)報道散發(fā)性浸潤性乳腺癌BRCA1基因的丟失在ER陰性病例中比ER陽性病例中更常見［15］。ER陰性乳腺癌風(fēng)險與BRCA1基因突變?nèi)橄侔╋L(fēng)險間存在顯著的相關(guān)性［16］。散發(fā)性浸潤性乳腺癌中BRCA1表達(dá)與HER2的研究報道較少，且結(jié)果并不一致。本研究表明，兩者之間存在顯著關(guān)聯(lián)，并呈正相關(guān)。研究結(jié)果的差異可能與采用的抗體、研究的個體以及對免疫組化的評判標(biāo)準(zhǔn)不同有關(guān)。

三陰型乳腺癌的治療一直是國內(nèi)外研究熱點。針對BRCA1基因突變引起的DNA雙鏈損傷修復(fù)機(jī)制開發(fā)的一類新型抗腫瘤藥物—PARP［poly（ADP-ribose）polymerase］抑制劑，例如 olaparib，veliparib，iniparib等，部分已進(jìn)入臨床試驗階段，并取得一定療效［17-18］。本研究顯示三陰型乳腺癌中BRCA1表達(dá)下調(diào)，BRCA1基因靶向藥物或許將為其治療提供新的途徑［19］。

總之，本研究發(fā)現(xiàn)BRCA1在三陰型及伴有髓樣特征的乳腺癌中表達(dá)下調(diào)，并與ER、HER2表達(dá)及Ki67增殖指數(shù)密切相關(guān)，影響散發(fā)性浸潤性乳腺癌的發(fā)生發(fā)展。進(jìn)一步深入研究BRCA1表達(dá)下調(diào)的機(jī)制及對BRCA1基因靶向藥物的研發(fā)，將對散發(fā)性浸潤性乳腺癌患者的臨床結(jié)果預(yù)測及個體化精準(zhǔn)治療帶來新的機(jī)遇。