23 程振濤23 文 明23 周碧君23

(1.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽(yáng) 550025； 2.貴州省動(dòng)物疫病研究室，貴州 貴陽(yáng) 550025；3.貴州省動(dòng)物疫病防控與獸醫(yī)公共衛(wèi)生重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，貴州 貴陽(yáng) 550025)

鴨疫里默氏桿菌病(Riemerella anatipestifer infection)又稱新鴨病、鴨敗血癥、鴨疫綜合癥、鴨疫敗血癥、鴨傳染性漿膜炎，是由鴨疫里默氏桿菌(Riemrellaanatipestifer，RA)引起的主要侵害雛鴨、雛火雞、鵝等多種禽類的急性或慢性、敗血性、接觸性傳染病[1]。1～8周齡雛鴨對(duì)RA易感，其中以2～3周齡雛鴨最易感[2]。該病以纖維素性心包炎、肝周炎和氣囊炎為主要病變特征，病死率高達(dá)90%，給養(yǎng)鴨業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。目前國(guó)際公認(rèn)的RA血清型有21個(gè)，各血清型之間缺乏交叉保護(hù)，使得不同國(guó)家和地區(qū)、同一地區(qū)不同時(shí)期或同一養(yǎng)殖場(chǎng)可同時(shí)存在多種血清型或亞型的混合感染[3]。藥物治療和疫苗免疫是目前控制該病的主要措施。RA對(duì)多種抗生素敏感，但生產(chǎn)中長(zhǎng)期大量應(yīng)用抗生素藥物致使其耐藥性增強(qiáng)，對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染，對(duì)人類健康也造成威脅[4]。多年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者都致力于RA疫苗的研究并作為防控該病的首選，目前國(guó)內(nèi)外研制的RA疫苗有滅活疫苗、弱毒活疫苗、亞單位疫苗和基因工程疫苗等。由于RA血清型眾多，許多商品化的RA疫苗應(yīng)用缺乏普適性，有一定區(qū)域局限性，影響了對(duì)疫情的防控。加大具有交叉保護(hù)性疫苗的研究力度及強(qiáng)化疫苗使用的宣傳和推廣將會(huì)進(jìn)一步擴(kuò)大疫苗的應(yīng)用范圍和影響力。本文綜述了近年來(lái)RA疫苗的研究現(xiàn)狀，并探討RA疫苗今后的研究方向，為RA疫苗的研制和科學(xué)選擇提供參考。

1 滅活疫苗

滅活疫苗是將人工分離培養(yǎng)的抗原(病原體)用甲醛等滅活后加入適當(dāng)佐劑制成。當(dāng)前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)中RA疫苗多為滅活疫苗，免疫效果都較理想[4]。不同產(chǎn)品間的差別主要在于血清型、佐劑和抗原含量不同。

1.1 單價(jià)滅活疫苗由于RA血清型眾多，還有待確認(rèn)的血清型或血清亞型，且各血清型間無(wú)明顯交叉保護(hù)力，因此對(duì)于單價(jià)疫苗來(lái)說(shuō)，必須根據(jù)不同地區(qū)間流行的血清型和流行菌株針對(duì)性地制備疫苗，才能獲得良好的保護(hù)效果。趙樸等[5]從病鴨分離RA并制備蜂膠滅活疫苗，免疫后3～7 d即可產(chǎn)生部分保護(hù)(1/10～4/10)，14 d可完全保護(hù)(10/10)，到90 d仍可完全保護(hù)(10/10)。楊靈芝等[6]以10型 RA GN52株為菌種，采用改進(jìn)的液體培養(yǎng)工藝進(jìn)行增菌后制備油乳劑滅活疫苗免疫3日齡雛鴨，免疫后7 d用同源菌株攻擊保護(hù)率可達(dá)70%，14 d達(dá)100%，至56 d免疫保護(hù)率仍可達(dá)80%；10日齡進(jìn)行第2次免疫，3 d后免疫保護(hù)率達(dá)100%。王小蘭等[7]用候選的YL4、JY4、CH3、CQ3、YXb12共5株RA分離株分別制備滅活油乳劑疫苗，分別于5日齡和18日齡對(duì)櫻桃谷鴨進(jìn)行2次免疫，免疫鴨均能產(chǎn)生高水平的RA特異性抗體，且對(duì)2LD50JY4或CH3攻毒能產(chǎn)生很好的保護(hù)效果，其中由CH3、CQ3、YXb12制備的滅活油乳劑疫苗對(duì)攻毒的保護(hù)率高達(dá)100%；同年又用SC-2、Yb2、Th4、JY-1、NJ-3菌株制備滅活油乳劑疫苗免疫5日齡雛鴨，2周后進(jìn)行加強(qiáng)免疫，2免10～14 d后進(jìn)行血清抗體檢測(cè)及攻毒保護(hù)試驗(yàn)，結(jié)果表明不同菌株制備的疫苗均可使免疫鴨產(chǎn)生高水平的RA特異性抗體和攻毒保護(hù)力，但是攻毒保護(hù)性差異較大，NJ-3免疫后的攻毒保護(hù)性最好。嵇辛勤等[8]選用血清2型RA地方優(yōu)勢(shì)流行株為菌種，制備了穩(wěn)定性和安全性較好的甲醛油乳劑滅活疫苗，免疫麻鴨后對(duì)其抗體滴度進(jìn)行檢測(cè)，免疫保護(hù)率達(dá)87.5%，高于商品化的同類滅活疫苗(62.5%)。

1.2 多價(jià)滅活疫苗由于不同地區(qū)RA流行的血清型不一致，而且在不同時(shí)期流行的血清型也可能不同，包括在同一鴨場(chǎng)甚至是同1批鴨群可能同時(shí)存在多個(gè)血清型，各血清型之間無(wú)交叉保護(hù)，考慮到菌體培養(yǎng)及內(nèi)毒素等因素，疫苗生產(chǎn)中不可能加入全部血清型菌株，因此要發(fā)揮疫苗的最佳優(yōu)勢(shì)就應(yīng)充分了解和弄清當(dāng)?shù)亓餍芯甑难逍停苽浒餍醒逍偷亩鄡r(jià)疫苗進(jìn)行免疫。程安春等[9]將血清1、2、4、5型RA滅活制成四價(jià)鋁膠復(fù)合佐劑疫苗，免疫雛鴨后可有效抵抗血清1、2、4、5型RA強(qiáng)毒的感染。傅元華[10]、孟超等[11]分別選用血清1、2型 RA制備二價(jià)油乳劑滅活疫苗，可有效保護(hù)鴨和鵝不被同型RA感染。謝永平等[12]研制的血清1、2、3型RA三價(jià)油乳劑滅活疫苗免疫保護(hù)期達(dá)50 d，可滿足肉鴨養(yǎng)殖生產(chǎn)的需要。程增青等[13]選用血清1、2型RA菌株制成二價(jià)滅活疫苗，用5日齡櫻桃谷鴨分別進(jìn)行安全性和效力試驗(yàn)，結(jié)果顯示疫苗安全、有效，攻毒保護(hù)率可達(dá)90%以上。王小蘭等[14]采用血清1、2、10型RA(菌株分別為CH3、NJ-3和HXb2)制備RA三價(jià)滅活油乳劑疫苗，雛鴨經(jīng)1次免疫后可產(chǎn)生RA特異性抗體，且血清抗體水平可持續(xù)10周以上；免疫后10周進(jìn)行攻毒保護(hù)試驗(yàn)，可獲得100%的免疫保護(hù)率。程龍飛等[15]選用血清2、11型RA制成二價(jià)滅活油乳劑疫苗皮下接種7日齡番鴨，免疫后14 d產(chǎn)生良好保護(hù)，保護(hù)率超過80%，免疫持續(xù)期可達(dá)60 d。Kang Min等[16]選用血清1、2型RA制成二價(jià)滅活油乳劑疫苗免疫雛鴨，對(duì)同源RA血清型再次感染能起到顯著保護(hù)效果，免疫28 d后，IgA分析顯示氣管sIgA水平顯著升高，達(dá)到了良好的免疫效果。

1.3 聯(lián)合滅活疫苗當(dāng)前國(guó)內(nèi)肉鴨養(yǎng)殖散養(yǎng)戶較多，由于缺乏良好的飼養(yǎng)管理、養(yǎng)殖環(huán)境污染嚴(yán)重、受應(yīng)激因素刺激等，很容易被各種條件性致病菌(特別是大腸桿菌)感染發(fā)病，往往同時(shí)伴發(fā)或繼發(fā)RA，從臨床癥狀不易進(jìn)行鑒別診斷。為更好應(yīng)對(duì)這種混合感染，同時(shí)又要減少免疫接種次數(shù)過多引起的應(yīng)激，進(jìn)行多種病原聯(lián)苗的接種就顯得尤為重要。李振清等[17]用血清10型RA LQ09、血清1型RA YC11和鴨大腸桿菌優(yōu)勢(shì)血清型菌株O78型LQ06、O92型BX02作為菌種，采用液體培養(yǎng)工藝進(jìn)行增菌后，制備鴨疫里默氏桿菌-大腸桿菌二聯(lián)油乳劑滅活疫苗，對(duì)3日齡肉雛鴨免疫可產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，免疫后10日齡用同源菌株攻擊保護(hù)率達(dá)70%，17日齡達(dá)80%，24日齡至出欄達(dá)100%；對(duì)7日齡肉雛鴨免疫也可產(chǎn)生良好的免疫應(yīng)答，免疫后14日齡用同源菌株攻擊保護(hù)率達(dá)80%，21日齡直至出欄達(dá)100%。秦緒偉等[18]選用血清1型RA和血清O78型大腸桿菌制備傳染性漿膜炎-大腸桿菌病二聯(lián)滅活疫苗，經(jīng)性狀檢驗(yàn)、無(wú)菌檢驗(yàn)、安全檢驗(yàn)、效力檢驗(yàn)全部合格，肉鴨1日齡免疫后14 d保護(hù)率均為90%以上，能有效保護(hù)低日齡商品肉鴨不受血清1型RA、血清O78型大腸桿菌的侵襲，免疫后7周仍有保護(hù)力。劉曉文等[19]選用鴨坦布蘇病毒GDNS2010.1株、鴨源大腸桿菌O1株、血清2型RA強(qiáng)毒株研制成鴨坦布蘇病毒-鴨大腸桿菌-RA三聯(lián)滅活疫苗，通過不同免疫次數(shù)試驗(yàn)表明，免疫1次可產(chǎn)生抗體，免疫2次達(dá)到較好的保護(hù)效果，免疫3次保護(hù)率可達(dá)到100%，且能有效預(yù)防鴨坦布蘇病毒、鴨大腸桿菌和RA引起的麻鴨產(chǎn)蛋下降。

在滅活疫苗生產(chǎn)過程中，通常添加各種佐劑作為非特異性免疫增強(qiáng)劑以增強(qiáng)疫苗的免疫保護(hù)效果，常用的佐劑主要有油乳劑、鋁膠、蜂膠和黃芪多糖等，佐劑不同，疫苗的保護(hù)效果也不盡相同。陳潔等[20]從安全性和保護(hù)效果兩方面對(duì)血清1型RA油乳劑、蜂膠及黃芪多糖滅活疫苗的保護(hù)效果進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)3種佐劑疫苗的保護(hù)率分別為92%、84%、96%，說(shuō)明黃芪多糖滅活疫苗的保護(hù)效果最佳。吉鳳濤等[21]對(duì)血清1、2、7型RA三價(jià)蜂膠滅活苗和油乳劑滅活苗的免疫保護(hù)效果進(jìn)行評(píng)價(jià)，發(fā)現(xiàn)雛鴨免疫蜂膠滅活苗第3天即可產(chǎn)生部分抵抗力，疫苗的完全保護(hù)作用可持續(xù)至120 d；接種油乳劑滅活苗的雛鴨于免疫后10 d才開始表現(xiàn)出部分抵抗力，但疫苗的完全保護(hù)作用也可持續(xù)至免疫后120 d。比較2種佐劑疫苗的效果可以看出，蜂膠滅活苗具有產(chǎn)生誘導(dǎo)免疫保護(hù)作用速度快、免疫持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)，而油乳劑滅活苗雖然免疫持續(xù)期較長(zhǎng)，但誘導(dǎo)產(chǎn)生保護(hù)力的速度較慢。Zhang Yuewei等[22]采用左旋噻米唑(LMS)作為免疫增強(qiáng)劑進(jìn)行改善小鴨的免疫系統(tǒng)，結(jié)果顯示Th1型細(xì)胞因子(IFN-γ、IL-2)、Th2型細(xì)胞因子(IL-4、IL-10)和T淋巴細(xì)胞的增殖率均高于正常組。

滅活疫苗安全性好，不散毒，便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸，但不能將內(nèi)源性蛋白抗原遞呈給免疫系統(tǒng)，因而不能誘生細(xì)胞毒性T細(xì)胞反應(yīng)(CTL)，而CTL可能在保護(hù)性免疫中起主導(dǎo)作用，故其保護(hù)效力不如弱毒活疫苗；由于滅活疫苗抗原成分含量不高以及滅活過程中主要抗原決定簇的丟失，因而常常需要多次接種；另外，應(yīng)用佐劑可能對(duì)機(jī)體產(chǎn)生副作用，一些國(guó)家限制使用油佐劑。

2 弱毒活疫苗

弱毒活疫苗的抗原是致弱的活病原微生物，機(jī)體能迅速產(chǎn)生免疫力，但在獸用活疫苗產(chǎn)品中病毒類較多，細(xì)菌類較少，特別是RA活疫苗報(bào)道更少。由于人工致弱毒株偶爾會(huì)出現(xiàn)毒力返強(qiáng)現(xiàn)象、毒株間的交叉保護(hù)性差、易與野毒株發(fā)生重組等問題，或由于操作不當(dāng)易造成人工散毒，RA弱毒苗的應(yīng)用存在局限性，所以國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)此研究較少。Sandhu T S等[23]利用篩選的自然弱毒株血清1、2、5型 RA菌株制成三價(jià)弱毒活疫苗，免疫北京鴨進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn)室及生產(chǎn)應(yīng)用研究，1日齡北京鴨經(jīng)飲水或氣霧免疫1次均能產(chǎn)生有效保護(hù)力，免疫保護(hù)期最少可至42日齡；經(jīng)實(shí)驗(yàn)攻毒和野外感染試驗(yàn)表明2種方法均可產(chǎn)生較好的保護(hù)作用；免疫后在飼料中添加0.044%金霉素或0.02%磺胺二甲氧嘧啶不會(huì)影響疫苗的效果。與油乳劑滅活苗相比，應(yīng)用該疫苗不僅可以減輕疫苗注射造成的應(yīng)激，還能減少注射次數(shù)，確保胴體品質(zhì)。王小蘭等[24]應(yīng)用Yb2ΔpncA制備的血清2型RA弱毒活疫苗免疫7日齡櫻桃谷鴨，1次免疫可以獲得80%的免疫保護(hù)率，2次免疫可以獲得90%的免疫保護(hù)率，表明Yb2ΔpncA可以作為RA弱毒活疫苗的候選菌株。

弱毒活疫苗不僅可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫，而且還能誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞免疫，免疫效果較滅活疫苗更好，但弱毒活疫苗可發(fā)生潛在感染，并有散毒的危險(xiǎn)，故應(yīng)特別注意弱毒苗菌株的安全性問題。

3 亞單位疫苗

亞單位疫苗主要是采用提取或其他生物工程方法將RA病原體中引發(fā)機(jī)體免疫應(yīng)答的主要成分制備而成的疫苗。此類疫苗一方面減輕了常規(guī)全菌體疫苗存在的免疫副反應(yīng)問題，另一方面為進(jìn)行精確免疫及多種病原體的聯(lián)合免疫提供了新的發(fā)展思路，同時(shí)還為解決RA各血清型間的交叉保護(hù)性問題提供了一種新的方式。在RA亞單位疫苗方面主要開展了以莢膜或外膜蛋白為亞單位成分的免疫研究，但大多還處在試驗(yàn)階段，保護(hù)效果差異也很大，這可能與采用的提取方式及疫苗制備方式有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究。

3.1 莢膜免疫原性蘇敬良等[25]對(duì)血清1型RA莢膜提取物的免疫原性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明莢膜粗提物和經(jīng)過苯酚抽提純化后的莢膜提取物經(jīng)2次免疫7日齡北京鴨后，對(duì)同源細(xì)菌的攻毒保護(hù)率分別為90%、70%。呂敏娜等[26]將RA菌液分別用十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)-無(wú)水乙醇法和高濃度氯化鈉浸提法提取莢膜多糖，用經(jīng)95%酒精浸提7 d以上的蜂膠作佐劑，制備成RA莢膜多糖亞單位疫苗，免疫雛鴨未見不良反應(yīng)，免疫5日齡雛鴨14 d后用RA-L強(qiáng)毒株攻擊，保護(hù)率達(dá)80%；免疫7日齡雛鴨6、12 d后分別以RA-L強(qiáng)毒株攻擊，保護(hù)率分別為60%、100%；免疫8周后保護(hù)率仍可達(dá)88.3%；高濃度氯化鈉浸提法的免疫效果比十六烷基三甲基溴化銨-無(wú)水乙醇提取法的免疫效果好。齊冬梅等[27]用制成的血清1型RA莢膜油乳佐劑疫苗免疫雛鴨后，對(duì)同源菌株的攻擊保護(hù)率可達(dá)90%；通過與其他血清1型RA不同佐劑滅活疫苗免疫效力的比較發(fā)現(xiàn)，莢膜油乳劑苗的保護(hù)效果最佳，其次為油乳劑滅活苗、蜂膠滅活苗、無(wú)佐劑滅活苗。上述研究工作的開展為亞單位疫苗的研究提供了候選抗原，也為該類疫苗的研制奠定了基礎(chǔ)。

3.2 外膜蛋白免疫原性蘇敬良等[28]試驗(yàn)表明，RA的44 kD外膜蛋白可能是該菌的主要免疫原性蛋白之一；用外膜蛋白加弗氏佐劑免疫10日齡北京鴨，首免后2周進(jìn)行2免，可誘導(dǎo)產(chǎn)生加強(qiáng)的抗體反應(yīng)，抗體維持4周以上，經(jīng)2免后對(duì)同源菌株攻擊的保護(hù)率為100%。張克新等[29]用54 kD外膜蛋白與弗氏完全佐劑充分乳化，免疫8日齡雛鴨后第14 d進(jìn)行2免，分別在首免前1 d，首免后第7、14 d，2免后第7、14、21、28 d采血檢測(cè)，首免后第14 d可檢測(cè)到有抗體產(chǎn)生，2免后第14 d抗體水平最高，平均效價(jià)達(dá)到640倍，第28 d時(shí)平均抗體效價(jià)仍可達(dá)到320倍。Huang Bin等[30]將血清15型菌株分子量為42 kD的重組外膜蛋白A(OmpA)和血清19型菌株分子量為45 kD的RA表面蛋白P45N' 免疫雛鴨，并通過免疫印記和ELISA法對(duì)免疫效果進(jìn)行追蹤，結(jié)果顯示重組蛋白能夠誘導(dǎo)免疫鴨產(chǎn)生抗體，但后續(xù)攻毒試驗(yàn)中免疫鴨并沒有受到很好的保護(hù)。Chu Chun-Yen等[31]評(píng)估了含有OmpA的亞單位疫苗和含有CpG寡脫氧核苷酸(ODN)的質(zhì)粒結(jié)構(gòu)提供的免疫應(yīng)答和保護(hù)作用，結(jié)果表明CpG ODN可在初次免疫后14 d內(nèi)增強(qiáng)OmpA引起的體液免疫和細(xì)胞免疫，同源攻毒結(jié)果顯示OmpA+CpG ODN疫苗免疫保護(hù)率達(dá)90%，可作為1種抗RA的亞單位疫苗進(jìn)一步開發(fā)。

3.3 菌蛻疫苗細(xì)菌菌蛻是革蘭氏陰性菌被噬菌體PhiX174的裂解基因E裂解后形成的完整細(xì)菌空殼。由于菌蛻具有完整的膜抗原結(jié)構(gòu)，可同時(shí)誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫，且成本低廉，易于大規(guī)模生產(chǎn)，制成的凍干苗在室溫下可長(zhǎng)期保存，免疫時(shí)因其本身就具有佐劑的性質(zhì)，無(wú)需加入佐劑，因此菌蛻是1種非常理想的新型疫苗體系，能直接作為疫苗使用。董洪亮等[32]利用MAP制備的RA CH3菌蛻疫苗對(duì)櫻桃谷鴨免疫有很好的保護(hù)效果，能有效抵抗同型RA侵害，并且從免疫保護(hù)水平來(lái)看免疫效果要優(yōu)于甲醛滅活苗。

由于亞單位疫苗不含有核酸物質(zhì)，因此與弱毒活疫苗相比安全性較高，并且有可能找到1種具有共同抗原的蛋白，以解決RA多種血清型之間缺乏交叉保護(hù)的問題；除此之外還有一大優(yōu)勢(shì)，即可與抗生素同用。缺點(diǎn)是免疫原性相對(duì)較差，且制造成本高，限制了其在臨床上的廣泛應(yīng)用。

4 基因工程疫苗

作為獸用疫苗，亞單位疫苗由于成本過高而不太實(shí)用，基因工程疫苗則是較為理想的發(fā)展方向。在研制基因工程疫苗時(shí)，在親本菌株的選擇上要么是分離本地毒力較強(qiáng)的優(yōu)勢(shì)血清型，產(chǎn)生最大限度的保護(hù)；要么使用的疫苗含有多種血清型，盡可能地包括多種保護(hù)性抗原，可以提供更全面的保護(hù)。目前從RA中分離出的蛋白有：pCF1質(zhì)粒的VapD1和VapD2基因編碼的蛋白、pCF2質(zhì)粒中插入序列ISRal編碼的氨基酸殘基轉(zhuǎn)移酶、CAMP溶血素、OmpA、潛在表面蛋白(P45)、DNA復(fù)制蛋白(RC-PAs)等。Subramaniam等[33]克隆表達(dá)了RA中編碼42 kD主要保護(hù)性外膜蛋白的OmpA基因，發(fā)現(xiàn)OmpA是1個(gè)保守且具有很強(qiáng)抗原性的蛋白，因而對(duì)于保護(hù)RA的感染很有價(jià)值，且不受血清型的限制。雷云等[34]成功構(gòu)建了真核重組質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-dIL-2-OmpA和pcDNA3.1(+)-OmpA，免疫雛鴨后能刺激鴨體產(chǎn)生RA特異性抗體，對(duì)血清1、2型RA均有一定的交叉免疫保護(hù)作用；pcDNA3.1(+)-dIL-2-OmpA免疫鴨后誘導(dǎo)產(chǎn)生的抗體水平和提供的免疫保護(hù)效率要高于pcDNA3.1(+)-OmpA免疫組鴨。袁彪等[35]成功構(gòu)建了RAwza基因缺失株并證明了該基因與莢膜的形成相關(guān)；其研究結(jié)果得出wza基因的缺失導(dǎo)致RA的毒力下降了大約421倍，表明wza基因是RA的1個(gè)毒力基因。Zhao Xinxin等[36]通過敲除RACH-1(B739-2187)基因可以顯著減少RA的毒力并為野毒株的再次感染提供100%的保護(hù)，表現(xiàn)出理想弱毒活疫苗的特性。Liu M等[37]研究表明B739_1343是RA-CH-1的毒力因子，用高劑量(100倍LD50)的野生型RA-CH-1菌株攻擊雛鴨，免疫突變菌株RA-CH-1ΔB739_1343所制活疫苗可使免疫保護(hù)率達(dá)83.33%，表明突變菌株RA-CH-1ΔB739_1343可進(jìn)一步作為抗RA的潛在弱毒活疫苗候選毒株。Dou Yafeng等[38]通過篩選隨機(jī)Tn4351轉(zhuǎn)座子突變體文庫(kù)獲得了RA突變株RA1062，并且其M949_RS01035基因被滅活，試驗(yàn)攻毒結(jié)果表明用滅活的RA1062菌苗免疫鴨可以有效地交叉保護(hù)免受毒力型血清1、2、10型RA的攻擊。該研究表明M949_RS01035基因參與細(xì)菌表型，RA的毒力和基因調(diào)控，突變株RA1062可用作交叉保護(hù)疫苗候選物。這些結(jié)果為RA基因工程疫苗研究奠定了基礎(chǔ)。目前對(duì)RA核酸疫苗研究的報(bào)道相對(duì)較少。黃國(guó)安等[39]以血清2型RA毒力蛋白相關(guān)基因VapD1為抗原基因構(gòu)建了DNA疫苗，雛鴨經(jīng)肌肉注射免疫后能抵抗同型RA毒株攻擊，但免疫保護(hù)效果不及VapD1編碼的蛋白質(zhì)亞單位疫苗。隨著對(duì)RA基因組的深入研究，將有更多的抗原基因用作DNA疫苗；RA核酸疫苗的研究，包括基因組功能研究、抗原基因的優(yōu)化、表達(dá)載體的選擇、核酸疫苗的佐劑應(yīng)用、疫苗的運(yùn)送體系等方面將更加深入。

5 展望

由于RA血清型眾多，增加了RA免疫預(yù)防的難度，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行RA血清型的監(jiān)測(cè)工作，確定某地區(qū)的優(yōu)勢(shì)血清型，可為研制安全可靠的新一代多價(jià)疫苗提供指導(dǎo)。近年來(lái)，對(duì)RA的研究已經(jīng)深入到分子生物學(xué)水平，RA相關(guān)的免疫原性基因和致病基因?qū)⒅饾u被發(fā)現(xiàn)，疫苗的研發(fā)也逐漸多元化，亞單位苗、基因缺失弱毒苗和基因工程苗等新型疫苗有望在生產(chǎn)中得到實(shí)際應(yīng)用。目前養(yǎng)鴨生產(chǎn)中對(duì)鴨疫里默氏桿菌病的防控仍有許多亟待解決的問題，探索研制出安全、有效、使用方便、適用性廣的疫苗至關(guān)重要。