金方方 綜述，婁金麗 審校

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京佑安醫(yī)院臨檢中心，北京 100069)

CD3分子為T淋巴細(xì)胞的分化抗原，胸腺內(nèi)的CD3分子的表達(dá)與胸腺細(xì)胞的成熟階段相關(guān)，CD3分子的出現(xiàn)是在個體發(fā)育期間逐漸發(fā)生，為T淋巴細(xì)胞亞群成熟分化的標(biāo)志。通過CD3/CD4/CD8T細(xì)胞常規(guī)流式檢測，LAMBERT等[1]在感染、腫瘤患者和健康人的外周血中觀察到一類具有CD3高表達(dá)現(xiàn)象的γδT細(xì)胞，并且在患者中表達(dá)水平升高。本文章中描述的CD3分子高表達(dá)T細(xì)胞(CD3bright T細(xì)胞)，均為外周成熟T細(xì)胞中CD3分子表達(dá)水平更高的一類細(xì)胞。通過T細(xì)胞表面CD3分子的表達(dá)水平，區(qū)分出一個有意義的細(xì)胞亞群，在感染和腫瘤的進(jìn)展中發(fā)揮重要作用。關(guān)于CD3bright T細(xì)胞的相關(guān)文獻(xiàn)較少，本文就近年來CD3bright T細(xì)胞的相關(guān)報道作一綜述。

1 CD3bright T細(xì)胞的生物學(xué)特性

1.1CD3bright T細(xì)胞的概述 CD3分子由γ、δ、ε、ζ和η 5種多肽鏈組成，以γεδε ζζ的形式存在，每條γ、δ和ε鏈各含有1個免疫受體酪氨酸激活基序(ITAM)，每條ζ鏈則包含有3個ITAM，即1個CD3分子含有10個ITAM。CD3分子與TCR緊密結(jié)合形成TCR-CD3多亞基復(fù)合物，并通過位于胞質(zhì)區(qū)的ITAM磷酸化，放大T細(xì)胞信號，激活下游信號傳導(dǎo)途徑及引發(fā)T細(xì)胞效應(yīng)反應(yīng)[2]。CD3分子是參與細(xì)胞的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、分化增殖、發(fā)揮效應(yīng)功能的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，在T淋巴細(xì)胞與其他免疫細(xì)胞和免疫分子的相互識別、免疫調(diào)節(jié)與免疫應(yīng)答過程中扮演重要角色。

通過常規(guī)T細(xì)胞檢測，外周T細(xì)胞中可觀察到一類具有CD3高表達(dá)現(xiàn)象的T細(xì)胞[1]。CD3分子高表達(dá)是否由于細(xì)胞制備過程中特定亞群活化造成的？根據(jù)PAGET等[3]的研究，在無細(xì)胞因子條件下培養(yǎng)外周單個核細(xì)胞，根據(jù)T細(xì)胞表面CD3分子的表達(dá)水平仍然可以區(qū)分出CD3分子常規(guī)表達(dá)和CD3分子高表達(dá)兩類細(xì)胞，表明CD3bright T細(xì)胞并不是由于細(xì)胞制備過程中特定細(xì)胞群的活化造成的。CD3bright T細(xì)胞在健康人群普遍存在，84%的健康人均可檢測到該細(xì)胞群，外周血中CD3bright T細(xì)胞約占T淋巴細(xì)胞的(3.15±2.60)%，且在免疫功能不全的獲得性免疫缺陷綜合征和腎移植患者中表達(dá)升高[1]。CD3bright T細(xì)胞表面不表達(dá)CD4分子，少部分表達(dá)CD8分子，主要為CD4-CD8-雙陰性T細(xì)胞，另外部分細(xì)胞表面表達(dá)CD8分子的CD3bright T細(xì)胞與常規(guī)的αβT細(xì)胞相比，其CD8分子水平也較低[1]。因此，CD3bright T細(xì)胞可能為γδT細(xì)胞中具有CD3高表達(dá)現(xiàn)象的細(xì)胞亞群。對純化的CD3brightT細(xì)胞進(jìn)行表型分析，證實CD3bright T細(xì)胞的TCR是由γ和δ兩條鏈組成[4]，屬于非特異性免疫細(xì)胞，在早期抵御病原體中可能發(fā)揮重要作用。對20例因脾外傷破裂患者的新鮮脾臟提取脾淋巴細(xì)胞，進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測分析發(fā)現(xiàn)，16例患者的脾臟中γδT細(xì)胞呈現(xiàn)CD3bright T細(xì)胞的分群現(xiàn)象，缺乏CD4、CD8、CD5的表達(dá)[5]，在TCRδ-/- 小鼠中觀察不到CD3高表達(dá)的分群現(xiàn)象，亦證明該群細(xì)胞為γδT細(xì)胞[3]。相關(guān)研究表明，CD3bright T細(xì)胞與γδT細(xì)胞的水平具有一定的相關(guān)性，外周血CD3bright T細(xì)胞數(shù)較高的人同時伴隨著γδT細(xì)胞升高，CD3bright T細(xì)胞可間接反映出γδT細(xì)胞的水平[1,4-7]，γδT細(xì)胞作為先天性與適應(yīng)性免疫反應(yīng)的橋梁，廣泛參與感染、過敏、自身免疫性疾病及腫瘤等的發(fā)生發(fā)展。T細(xì)胞檢測在臨床應(yīng)用多年，而提供給臨床的信息多局限于T細(xì)胞亞群的分群檢測，CD3bright T細(xì)胞的發(fā)現(xiàn)提示，常規(guī)的檢測或許能夠提供給臨床更多的信息。對γ鏈與δ鏈進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，小鼠外周中CD3bright T細(xì)胞均表達(dá)為Vγ6+Vδ1+TCR[3,8-9]，可將CD3高表達(dá)作為Vγ6+Vδ1+T細(xì)胞的生物標(biāo)記。結(jié)核性胸膜炎和肺癌患者胸腔積液及外周血中檢測到CD3bright T細(xì)胞[10-11]，可能為Vγ9+Vδ2+T細(xì)胞中具有CD3分子高表達(dá)的亞群。Vγ9+Vδ2+T細(xì)胞約占外周血CD3+T細(xì)胞的5%，是外周血γδT細(xì)胞的主要代表[12]。在結(jié)核感染患者胸腔積液中亦檢測到CD3bright T細(xì)胞，可能從外周血中遷移到炎癥部位，表明其可能具有較強的遷移能力。

PAGET等[3]利用小鼠模型發(fā)現(xiàn)了CD3bright T細(xì)胞與常規(guī)γδT細(xì)胞相比所表達(dá)的表面標(biāo)記存在一定的差別，CD3bright T細(xì)胞缺乏常規(guī)γδT細(xì)胞表面標(biāo)記物CD27和NK1.1，并且充分表達(dá)產(chǎn)生白細(xì)胞介素(IL-17)的輔助性T細(xì)胞17(Th17細(xì)胞)相關(guān)細(xì)胞因子的受體(IL-1R1+IL-23R+IL-18R+)。CD27分子被認(rèn)為是γδT細(xì)胞不同功能的標(biāo)記，CD27+γδT細(xì)胞偏向于產(chǎn)生γ干擾素(IFN-γ)，而缺乏CD27的γδT細(xì)胞則產(chǎn)生IL-17[13]。與常規(guī)γδT細(xì)胞相比，CD3bright T細(xì)胞上與細(xì)胞存活有關(guān)的CD127(IL-7R)和CD25(IL-2R)表達(dá)水平更高，表明其可能具有更長的生存期，此外，IL-7R最近也被證明是γδT17細(xì)胞調(diào)節(jié)與增殖的關(guān)鍵細(xì)胞受體[14]。YOKOBORI等[15]分離純化了結(jié)核性胸膜炎患者胸腔積液中的CD3bright T細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞表面分化抗原趨化因子受體3(CXCR3)和趨化因子受體7(CCR7)表達(dá)增高，認(rèn)為該類細(xì)胞具有較強的遷移到微生物感染部位和反應(yīng)性淋巴結(jié)中的能力。另外，肺小細(xì)胞肺癌患者外周血中CD3bright T細(xì)胞的CD27和CD28表達(dá)減少，可能與細(xì)胞的活化與增殖能力降低有關(guān)[11]。與γδT17細(xì)胞類似，CD3bright T細(xì)胞還表達(dá)RORγt(維甲酸孤兒核受體γt)，它是IL-17產(chǎn)生的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子[14]，以及表達(dá)γδT細(xì)胞介導(dǎo)細(xì)胞毒性的常見標(biāo)志物NKG2D[3,8]。以上表型特點也提示，CD3bright T細(xì)胞在產(chǎn)生IL-17上可能發(fā)揮重要作用。

1.2CD3bright T細(xì)胞的功能 CD3bright T細(xì)胞具有豐富的表型，與常規(guī)γδT細(xì)胞相同，均具有產(chǎn)生細(xì)胞因子的功能，但是產(chǎn)生細(xì)胞因子的能力有所不同。研究發(fā)現(xiàn)[3,8，16]，分布在小鼠肺、腹膜腔、子宮、肝臟、關(guān)節(jié)、淋巴組織的CD3bright T細(xì)胞均具有產(chǎn)生IL-17的能力，較常規(guī)的γδT17細(xì)胞產(chǎn)生IL-17的能力更強，且CD3bright T細(xì)胞具有活化(CD69+)和效應(yīng)記憶表型(CD62L-高CD44)，分泌細(xì)胞因子的過程快速高效。在一些腫瘤如卵巢癌[17]、乳腺癌[18]中，CD3bright T細(xì)胞更是IL-17的早期和主要來源。RORγt屬于維甲酸孤兒核受體的家族成員之一，是調(diào)控Th17細(xì)胞產(chǎn)生IL-17的主要轉(zhuǎn)錄因子，受STAT3的調(diào)節(jié)[19]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)[3]，CD3bright T細(xì)胞主要通過IL-1β和IL-23促進(jìn)STAT3的磷酸化水平，上調(diào)RORγt轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，從而誘導(dǎo)IL-17A的產(chǎn)生，同樣在細(xì)菌感染模型中證實了上述IL-23/IL-17免疫軸的存在[20]。另外，在小鼠卵巢癌腹膜轉(zhuǎn)移模型中[21]，大部分晚期腫瘤微環(huán)境中浸潤的CD3bright T細(xì)胞也被檢測出具有產(chǎn)生IFN-γ的能力，表明該群細(xì)胞具有一定的可塑性，但在大多數(shù)情況下不產(chǎn)生IFN-γ，這種可塑性行為受到嚴(yán)格的調(diào)控。在體外PMA(佛波酯)/離子霉素的刺激下，結(jié)核感染患者外周中CD3bright T細(xì)胞和常規(guī)γδT細(xì)胞都具有產(chǎn)生IFN-γ的能力，而IL-17的產(chǎn)生僅局限于常規(guī)γδT細(xì)胞[10,15]， 人外周CD3bright T細(xì)胞是否具有產(chǎn)生IL-17的能力，需進(jìn)一步探究。

2 CD3bright T細(xì)胞的應(yīng)用研究

2.1CD3bright T細(xì)胞與感染 CD3bright T細(xì)胞優(yōu)先分布在皮膚與肺，作為固有免疫細(xì)胞的一部分，提示其可能在黏膜相關(guān)免疫反應(yīng)中起重要作用。小鼠銀屑病模型中[3]，咪喹莫特(IMQ)可誘導(dǎo)皮膚銀屑病樣炎癥，炎癥皮膚中CD3bright T細(xì)胞明顯升高，其可能在銀屑病的炎癥免疫反應(yīng)中扮演重要角色。分布在肺主部的CD3bright T細(xì)胞要在肺的間質(zhì)，站在宿主防御微生物的前線，小鼠肺部感染期間該類細(xì)胞水平明顯升高，并且是IL-17的早期以及主要來源，中性粒細(xì)胞和肺泡巨噬細(xì)胞是刺激活化CD3bright T細(xì)胞的重要組分[20]。IL-17被廣泛認(rèn)為是對抗黏膜部位病原體的保護(hù)性細(xì)胞因子，CD3bright T細(xì)胞在皮膚炎癥和呼吸道病原體保護(hù)性免疫反應(yīng)中發(fā)揮重要作用。COULTER等[10]的研究中，與活動性結(jié)核病患者相比，潛伏感染者外周血中具有產(chǎn)生IFN-γ能力的CD3bright T細(xì)胞水平明顯較高。YOKOBORI等[15]則觀察到，在結(jié)核性胸膜炎患者中CD3bright T細(xì)胞比例增多，占外周血及胸腔積液中γδT細(xì)胞的主導(dǎo)地位。提示CD3bright T細(xì)胞可能直接參與了結(jié)核感染后機體的免疫反應(yīng)，并可能通過產(chǎn)生IFN-γ起免疫保護(hù)作用。在慢性乙型肝炎患者中，CD3bright T細(xì)胞陽性的患者對聚乙二醇化干擾素-α(peg-IFN-α)治療表現(xiàn)出相對較差的反應(yīng)[22]。CD3bright T細(xì)胞表達(dá)顯著高水平的抑制性分子NKG2A以及低水平的CD8，使用peg-IFN-α處理后，可迅速增加CD3bright T細(xì)胞上抑制性T細(xì)胞免疫球蛋白黏蛋白3(TIM-3)的表達(dá)，而TIM-3與IFN-γ產(chǎn)生呈負(fù)相關(guān)并可能導(dǎo)致其功能障礙。CD3bright T細(xì)胞為評估peg-IFN-α治療慢性乙型肝炎患者的療效提供了一種新的臨床輔助指標(biāo)。

2.2CD3bright T細(xì)胞與腫瘤 CD3bright T細(xì)胞作為Vγ9+Vδ2+T細(xì)胞的一部分，在腫瘤細(xì)胞的免疫監(jiān)視中發(fā)揮重要作用。一方面，CD3bright T細(xì)胞可通過穿孔素-顆粒酶途徑裂解腫瘤細(xì)胞、清除Fas+和TRAIL-R+的腫瘤細(xì)胞、抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(ADCC作用)、提供早期炎性細(xì)胞因子如IFN-γ等途徑發(fā)揮直接的抗腫瘤作用[23]。在張通通等[4]的研究中，胃癌患者外周血中的CD3bright T細(xì)胞占T細(xì)胞百分比較健康對照組顯著降低，且胃癌Ⅳ期的患者CD3bright T細(xì)胞有低于Ⅰ～Ⅲ期的趨勢。在非小細(xì)胞肺癌患者中[11]，外周血中的CD3bright T細(xì)胞占γδT細(xì)胞的比例也顯著低于健康對照人群，在胸腔積液中進(jìn)一步降低，患者CD3bright T細(xì)胞上CD27和CD28的表達(dá)降低，表明其活化與增殖的能力減低，CD3bright T細(xì)胞可能直接參與了癌癥的進(jìn)展過程。另一方面，越來越多的證據(jù)表明，CD3bright T細(xì)胞可通過產(chǎn)生IL-17，促進(jìn)免疫抑制細(xì)胞的浸潤和遷移及促進(jìn)腫瘤部位血管的生成等進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。在乳腺癌小鼠模型中[24]，與野生型小鼠比較，IL-17A基因敲除的小鼠腫瘤生長明顯緩慢。在產(chǎn)生IL-17A的細(xì)胞中，CD3bright T細(xì)胞占主要地位，該產(chǎn)生過程可被Ⅰ型干擾素抑制進(jìn)而抑制腫瘤的生長。CD3 bright T細(xì)胞/Ⅰ型干擾素軸在促進(jìn)乳腺癌生長和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮關(guān)鍵作用。小鼠卵巢癌腹腔轉(zhuǎn)移模型中[25]，腹腔中聚集浸潤的CD3bright T細(xì)胞可通過產(chǎn)生IL-17，誘導(dǎo)小腹腔巨噬細(xì)胞浸潤到腫瘤微環(huán)境中，小腹腔巨噬細(xì)胞高表達(dá)il17ra、tie2和cd163，可促進(jìn)腫瘤血管的生長及腫瘤細(xì)胞的增殖，進(jìn)而促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。另外，CD3bright T細(xì)胞的升高還與腫瘤患者的預(yù)后相關(guān)。蕈樣真菌病(MF)和Sézary綜合征(SS)是常見的原發(fā)性皮膚T細(xì)胞淋巴瘤，通常表現(xiàn)為惰性病程，但也可進(jìn)展為侵襲性淋巴瘤，在MF/SS患者外周血中出現(xiàn)CD3bright T細(xì)胞的患者預(yù)后較差[26]，CD3bright T細(xì)胞可作為該類患者預(yù)后相關(guān)的輔助預(yù)測因子。

3 結(jié) 論

綜上所述，CD3bright T細(xì)胞為T細(xì)胞中具有CD3高表達(dá)現(xiàn)象的細(xì)胞亞群，主要為雙陰性γδT細(xì)胞，可能為Vγ9+Vδ2+T細(xì)胞，在外周中分布廣泛，且具有γδT17細(xì)胞的表型特征，與常規(guī)γδT細(xì)胞相比，具有反應(yīng)迅速、升高明顯、增殖能力強、持續(xù)時間長等免疫反應(yīng)特點。CD3bright T細(xì)胞可通過產(chǎn)生細(xì)胞因子IL-17及炎性介質(zhì)參與免疫反應(yīng)，還可促進(jìn)中性粒細(xì)胞等炎性細(xì)胞在組織中的浸潤，放大靶器官和腫瘤微環(huán)境的免疫反應(yīng)及炎癥性破壞，與感染性疾病和腫瘤等的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。之前的報道表明，產(chǎn)生IL-17的γδT細(xì)胞具有良好的抗腫瘤活性，而越來越多的證據(jù)顯示其亦可促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。目前，CD3bright T細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用亦存在爭論，具體機制尚不清楚。此外，CD3bright T細(xì)胞是否存在其他亞群、與其他免疫細(xì)胞相互作用的機制、如何向炎癥及腫瘤部位遷移、劇烈的炎癥刺激和腫瘤微環(huán)境對CD3bright T細(xì)胞又有什么樣的影響，這些值得進(jìn)一步探究。相信通過對CD3bright T細(xì)胞的進(jìn)一步研究，將有助于豐富對先天性免疫細(xì)胞在炎癥及腫瘤發(fā)生發(fā)展中作用的認(rèn)識。