左凌云 張斌 錢晶晶 郁金紅 楊陽 韋成

高爾基體蛋白73(GP73)是位于細(xì)胞高爾基體順面的一種Ⅱ型整合膜蛋白。GP73在正常肝組織中主要表達(dá)于膽管上皮細(xì)胞，而肝細(xì)胞很少表達(dá)或不表達(dá)[1-2]，但在各種原因引發(fā)的肝臟疾病中，幾乎所有肝細(xì)胞均有表達(dá)，特別是結(jié)締組織周邊和肝硬化結(jié)節(jié)部位表達(dá)尤其強(qiáng)烈。但目前有關(guān)該標(biāo)志物在自身免疫性肝病，尤其是自身免疫性肝炎的變化特征的研究資料尚缺乏。本研究旨在觀察自身免疫性肝炎，尤其是不同程度肝損傷時(shí)，該蛋白的變化特征及可能的臨床意義。

資料與方法

一、研究對(duì)象

收集南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬南京第二醫(yī)院2012年1月至2018年5月的62例自身免疫性肝炎、70例慢性乙型肝炎臨床資料，包括患者年齡、性別、病程、癥狀、體征、實(shí)驗(yàn)室檢查、肝穿刺結(jié)果等。研究選取的患者均已完善相關(guān)檢查，排除前列腺癌[3]、肺癌[4]以及Wilson病[5]等其他可能引起血清GP73升高的疾病，同時(shí)也排除酒精性肝損傷、代謝性肝損傷、非乙型病毒性肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、血吸蟲性肝病、膽源性肝損傷、肝臟腫瘤等疾病。AIH確診由 IAIHG(國際自身免疫性肝炎小組)2008年制定的簡化診斷積分系統(tǒng)[6]診斷。慢性乙型肝炎診斷包括HBsAg陽性超過6月，HBV DNA定量>500拷貝/mL，ALT>40 U/L，腹部超聲未提示肝硬化、肝占位，血小板、WBC正常。兩組均選取ALT<400 U/L，TBil<34 μmol/L的患者，以避免因肝功能不匹配引起的GP73異常。

二、實(shí)驗(yàn)方法

(一)血常規(guī)分析、凝血功能測(cè)定、肝功能 分別采用儀器sysmex XN-1000、sysmex CA-7000、HITACHI 7600-120 series測(cè)定，試劑均為配套試劑。

(二)自身免疫性抗體、HBsAg定量、HBV DNA定量、免疫球蛋白定量 分別采用EUROIMMUN歐盟中國自身抗體譜IgG檢測(cè)試劑盒(間接免疫熒光法)，I-2000免疫儀及配套試劑測(cè)定，儀器ABI7500配套HBV核酸擴(kuò)增熒光定量檢測(cè)試劑盒測(cè)定，免疫球蛋白由HITACHI 7600 series自動(dòng)分析儀及配套試劑測(cè)定。

(三)血清GP73檢測(cè) 采用Golgi protein 73 (GP73)assay kit (ELISA)(北京熱景生物技術(shù)股份有限公司)，按照制造商提供的操作說明書進(jìn)行。

(四)病理檢查 62 例自身免疫性肝炎患者均接受肝組織活檢和病理學(xué)檢查，本研究獲得本院倫理委員會(huì)通過，并經(jīng)患者知情同意。病理標(biāo)本經(jīng)過2位病理專家確診為自身免疫性肝炎；肝細(xì)胞壞死程度根據(jù)病理學(xué)進(jìn)行分級(jí)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

受試者工作曲線分析(ROC)用于明確血清GP73水平對(duì)較嚴(yán)重肝損傷的診斷價(jià)值。診斷的特異性和敏感性根據(jù)最大曲線下面積(AUC)確定。血清 GP73 水平與不同生物化學(xué)指標(biāo)的關(guān)系采用相關(guān)分析。以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

一、患者的基本人口學(xué)資料

自身免疫性肝炎患者62例，年齡35～59歲，平均年齡為42歲，男性10人，女性52人。同時(shí)收集于本院慢性乙型肝炎對(duì)照人群70例，年齡(19～56)歲，平均35歲，男42例，女28例。兩組患者乏力、腹脹、陽性體征、病程差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、自身免疫性肝炎患者血清GP73水平的變化特征

為明確自身免疫性肝炎患者血清GP73水平的變化特征，對(duì)62例自身免疫性肝炎患者(觀察組)和70例健康對(duì)照人群(對(duì)照組)的血清GP73水平進(jìn)行對(duì)照分析。與 70例慢性乙型肝炎患者[(64.57±21.53)ng/mL]相比，62 例自身免疫性肝炎患者的血清 GP73 水平[(189.6±57.24)ng/mL]顯著升高(P<0.001)。

三、血清GP73水平與患者肝功能損傷之間的相關(guān)性

為明確自身免疫性肝炎患者血清GP73水平與肝功能損傷間的相關(guān)性，本研究選取幾個(gè)主要的肝功能指標(biāo)，血清ALT活性、AST活性、TBil以及凝血酶原活動(dòng)度(PTA)與血清GP73水平間的相關(guān)性進(jìn)行相應(yīng)的線性回歸分析。其中 42例血清ALT>200 U/L的患者，其血清 GP73 水平[(142.8±56.4)ng/mL] 顯著高于20 例血清ALT<200 U/L者[(113.6±68.41)ng/mL]，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.004)。PTA<60% 的患者中，有85%(9 /11)的患者血清GP73>142 ng/mL。

四、GP73在診斷自身免疫性肝炎與慢性乙型肝炎組的ROC曲線

針對(duì)于ANA、GP73鑒別自身免疫性肝炎以及慢性乙型肝炎，ANA的AUC為0.683，標(biāo)準(zhǔn)誤0.55，95%可信區(qū)間為(0.575～0.792)，診斷價(jià)值較低；GP73的AUC為0.801,標(biāo)準(zhǔn)誤0.049，95%可信區(qū)間為(0.704～0.897)診斷價(jià)值中等。

討 論

GP73在正常肝組織中幾乎不表達(dá)，但在各種原因引發(fā)的肝臟疾病中，幾乎所有肝細(xì)胞均有表達(dá)，特別是結(jié)締組織周邊和肝硬化結(jié)節(jié)部位表達(dá)尤其強(qiáng)烈，而本研究對(duì)于慢性乙型肝炎以及自身免疫性肝炎的GP73水平同時(shí)進(jìn)行了分析，均發(fā)現(xiàn)高于該指標(biāo)正常值上限。有研究顯示，GP73的表達(dá)水平與自身免疫性肝病的治療進(jìn)程呈相關(guān)性，在自身免疫性肝炎的各個(gè)階段，從纖維間隔形成前的疾病早期至肝硬化早期均可出現(xiàn)界面性肝炎(碎屑樣壞死)，肝細(xì)胞的免疫損害仍在持續(xù)存在，皮質(zhì)激素的免疫調(diào)節(jié)僅可使活動(dòng)性肝硬化得到緩解，位于竇周間隙的肝星狀細(xì)胞是肝纖維化時(shí)細(xì)胞外基質(zhì)的最主要來源細(xì)胞[7]。GP73在激活的星狀細(xì)胞中過度表達(dá)，提示這種蛋白參與控制肝臟纖維化的起始和進(jìn)程。在非病毒調(diào)節(jié)機(jī)制中，IFN-γ和TNF-α這兩種多向性的細(xì)胞因子對(duì)GP73起主要調(diào)節(jié)作用。最后導(dǎo)致大約100個(gè)基因開始轉(zhuǎn)錄，從而對(duì)病毒感染、細(xì)胞生長和凋亡調(diào)節(jié)起重要作用。GP73為高爾基體中的一個(gè)固定糖蛋白，導(dǎo)致HBV復(fù)制增加，HBV復(fù)制又激發(fā)了GP73蛋白的表達(dá)。本研究發(fā)現(xiàn)，GP73在自身免疫性肝炎的表達(dá)水平高于其在慢性乙型肝炎中的表達(dá)水平，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GP73在慢性乙型肝炎和自身免疫性肝炎所致肝硬化的肝組織中表達(dá)差異可能由GP73在這兩種肝病中增高途徑不同有關(guān)，即與自身免疫性肝炎依賴的非病毒途徑引起的GP73表達(dá)增高要高于HBV病毒途徑。陳文莉等[8]研究顯示血清GP73升高與肝功能相關(guān)，這與本組結(jié)論相符。

本研究表明，一定程度上血清 GP73 是診斷自身免疫性肝炎的良好標(biāo)志物之一。由于6年多時(shí)間只積攢了62例病例，這對(duì)于多因素、多階段長期慢性肝病患者來說，只有加大研究病例，尤其是縱向多時(shí)間點(diǎn)病例，細(xì)分層、多指標(biāo)聯(lián)合動(dòng)態(tài)檢測(cè)，才能進(jìn)一步說明 GP73 水平在自身免疫性肝炎早期鑒別診斷和預(yù)后判斷中的意義。