葉秋英，許春，付名豐，丁嵐

1.江西醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校，江西 上饒 334000；2.江西醫(yī)專第一附屬醫(yī)院，江西 上饒 334000

銅綠假單胞菌，即綠膿桿菌，廣泛分布于自然界，存在于人體皮膚、腸道、呼吸道等連通外界的腔道中，銅綠假單胞菌為非發(fā)酵革蘭陰性桿菌，有鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，屬于條件致病菌，為醫(yī)院感染的一種主要病原菌[1]。對(duì)于惡性腫瘤患者、血液疾病患者、基礎(chǔ)性疾病患者，以及長(zhǎng)期應(yīng)用抗生素治療者，極易發(fā)生銅綠假單胞菌感染，進(jìn)一步引發(fā)菌血癥、敗血癥等，嚴(yán)重者出現(xiàn)死亡。本文將對(duì)銅綠假單胞菌多重耐藥情況進(jìn)行分析，為臨床實(shí)踐提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究涉及100株多重耐藥銅綠假單胞菌，研究時(shí)間為2017年2月-2019年1月。標(biāo)本類型包含痰液、血液、腹腔積水、傷口分泌物、腹水等。

1.2 方法 使用設(shè)備：全自動(dòng)細(xì)菌生化鑒定和藥敏分析儀（系統(tǒng)：vitek2compact系統(tǒng)；生產(chǎn)廠家：法國(guó)梅里埃）；PCR擴(kuò)增試劑盒、DNA marker擴(kuò)增試劑盒，生產(chǎn)廠家均為：上海生工公司。

所有患者均行微生物病原菌檢驗(yàn)：以臨床操作規(guī)范為指導(dǎo)，對(duì)患者標(biāo)本進(jìn)行收集，并立即送檢，確保檢驗(yàn)環(huán)境無(wú)菌，采用微生物檢驗(yàn)方法分離與檢查。以有關(guān)標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，進(jìn)一步試驗(yàn)，以紙片擴(kuò)散原理性藥敏試驗(yàn)檢驗(yàn)，檢查病原菌耐藥性，測(cè)量結(jié)果的判讀嚴(yán)格執(zhí)行臨床與實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)規(guī)定（2014年）。耐藥基因檢測(cè)：其目的基因?yàn)椋耗た椎鞍護(hù)prD2等基因。應(yīng)用煮沸法進(jìn)行多重耐藥菌株的DNA提取，選取單個(gè)菌落置Ep管內(nèi)，使用100 ℃煮沸約10 min，離心操作取上清液，作為PCR擴(kuò)增模板使用。PCR反應(yīng)體系由以下組成：50 uL的VIM-2基因檢驗(yàn)體積，0.25 uL的Tap酶、5 uL的10＊PCR buffere、5 uL的dNTP、5 uL的模板、1 uL的上游引物，1 uL的下游引物F，32.75 uL的超純水；反應(yīng)條件為：5 min的95 ℃預(yù)變性，1 min的95 ℃預(yù)變性，40 s的55 ℃退火，40 s的72 ℃延伸，10 min的72 ℃延伸，循環(huán)30個(gè)，中止保存環(huán)境為4 ℃。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物5 uL與瓊脂糖凝膠電泳（含12%的溴化乙錠）混合，對(duì)其結(jié)果詳細(xì)記錄。

1.3 觀察指標(biāo) 分析科室分布、標(biāo)本來(lái)源、耐藥模式分析。

2 結(jié)果

2.1 科室分布分析 100株多重耐藥銅綠假單胞菌中，科室分布重癥醫(yī)學(xué)科18例（18%），燒傷整形科15例（15%），呼吸科30例（30%），急診科7例（7%），心胸外科5例（5%），介入病房7例（7%），胃腸外科8例（8%）。

2.2 標(biāo)本來(lái)源分析 所有患者的標(biāo)本來(lái)源痰35例（35%），全血14例（14%），傷口分泌物23例（23%），胸腔積液或者腹水9例（9%），咽拭子10例（10%），其他9例（9%）。

2.3 耐藥模式分析 100株多重耐藥銅綠假單胞菌中，對(duì)頭孢菌素類、青霉素類具有耐藥性，另外，對(duì)于碳青霉烯類具有較高的耐藥率，多重耐藥銅綠假單胞菌耐藥率為13.2%，其中亞胺培南耐藥率最高為30.2%，其次為氨曲南20.1%，多黏菌素B未出現(xiàn)耐藥菌株。

3 討論

本次研究結(jié)果顯示：100株多重耐藥銅綠假單胞菌中，高發(fā)于呼吸科、重癥監(jiān)護(hù)室，主要由于該部分患者呼吸道伴隨基礎(chǔ)性疾病，以及傷口愈合不佳、長(zhǎng)期用藥者[2]。研究結(jié)果，標(biāo)本以痰液、傷口分泌物為主，這主要由于部分慢性疾病患者或者血液系統(tǒng)疾病患者，特別是老年患者易引發(fā)肺部感染，存在肺炎可能，用藥效果不佳，可采用痰液標(biāo)本進(jìn)行培養(yǎng)。臨床在治療感染性疾病時(shí)主要采用抗菌藥物，而長(zhǎng)期應(yīng)用抗菌藥物治療極易出現(xiàn)耐藥性[3]，或者引起腸道內(nèi)菌群失調(diào)，引發(fā)感染。在銅綠假單胞菌菌株的分離檢驗(yàn)中，存在產(chǎn)粘液性，對(duì)檢驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生影響，同時(shí)還不利于治療，這主要由于粘液形成為銅綠假單胞菌出現(xiàn)耐藥性的一個(gè)機(jī)制。因此應(yīng)用銅綠假單胞菌治療成為臨床關(guān)注的重點(diǎn)[4]。研究結(jié)果中，碳青霉烯類具有較高的耐藥率，多重耐藥銅綠假單胞菌耐藥率為13.2%，其中亞胺培南耐藥率最高為30.2%，其次為氨曲南20.1%，多黏菌素B未出現(xiàn)耐藥菌株。

綜上，銅綠假單胞菌感染建議少用碳青霉烯類藥物，同時(shí)在治療上需制定感染控制措施，持續(xù)耐藥監(jiān)測(cè)銅綠假單胞菌，避免多重耐藥性銅綠假單胞菌擴(kuò)散與流行。