馬桂娟，張 瑤，湯麗華，朱 捷，馬雪梅

（寧夏回族自治區(qū)食品檢測(cè)研究院，寧夏 銀川750001）

枸杞（Lycium barbarumL.）為茄科植物枸杞的成熟果實(shí)，枸杞籽油因其具有良好的保健作用而受到市場(chǎng)的廣泛親睞[1-2]。由于枸杞在生長(zhǎng)過(guò)程中，頻繁的使用農(nóng)藥，其殘留的危害也可能影響到枸杞籽油的安全性[3]。目前為止，尚未有關(guān)于枸杞籽油中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)的相關(guān)研究。食用植物油中的農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，必須盡可能的除去基質(zhì)中脂肪、有機(jī)酸、色素及其他高分子質(zhì)量的干擾物，否則基質(zhì)干擾很大，容易污染檢測(cè)儀器，降低儀器使用壽命。目前，農(nóng)藥殘留的前處理方法主要有固相萃取、液液萃取冷脫脂法、基質(zhì)固相分散法、凝膠滲透色譜等[4-13]。這些方法中有些操作繁瑣，有些只針對(duì)特定種類的農(nóng)藥，當(dāng)測(cè)定多組分農(nóng)藥殘留時(shí)，需要采用不同的前處理方法，大大加大了檢測(cè)難度及成本。

本研究將樣品經(jīng)乙腈提取，以QuEChERS（quick，easy，cheap，effective，rugged，and safe）方法為前處理技術(shù)，采用丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）、C18、硫酸鎂（MgSO4）吸附劑，優(yōu)化最佳配比，可較好去除油脂和色素等雜質(zhì)，大大地減小了樣品基質(zhì)干擾。提取溶液經(jīng)過(guò)濾后氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜（gas chromatography-tandem mass spectrometry，GC-MS/MS）檢測(cè)，在質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（multiple reaction monitoring，MRM）模式下，進(jìn)行基質(zhì)外標(biāo)法定量，可同時(shí)快速地檢測(cè)枸杞籽油中28種農(nóng)藥殘留量。該方法具有凈化效果好，快速、簡(jiǎn)便、實(shí)用等優(yōu)點(diǎn)，對(duì)枸杞籽油中多組分農(nóng)藥殘留有普遍適用性，對(duì)于完善枸杞籽油衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)體系起到重要的推動(dòng)作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

枸杞籽油：市售；PSA、C18、硫酸鎂（適用于QuEChERS方法的填料）：美國(guó)安捷倫公司；乙腈（色譜純）：賽默飛世爾科技有限公司；甲苯（色譜純）：天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；氯化鈉（色譜純）：國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

氧化樂(lè)果、克百威、甲霜靈、三唑酮、氟蟲腈、稻豐散、克菌丹、硫丹、殺撲磷、丙溴磷、氟硅唑、醚菌酯、三唑磷、丙環(huán)唑、異菌脲、聯(lián)苯菊酯、溴螨酯、乙螨唑、甲氰菊酯、氯氟氰菊酯、雙甲脒、咪鮮胺、噠螨靈、氯氰菊酯、氰戊菊酯、苯醚甲環(huán)唑、烯酰嗎啉、嘧菌酯（純度均＞98%）：德國(guó)Dr.Ehrenstorfer公司。

1.2 儀器與設(shè)備

7890B/7000C安捷倫三重四級(jí)桿氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀：美國(guó)安捷倫科技有限公司；3K15離心機(jī)：德國(guó)Sigma公司；IKAT25數(shù)顯型分散機(jī)：德國(guó)IKA公司；Vortex-Genie2漩渦混合器：美國(guó)SI儀器公司。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

準(zhǔn)確稱取28種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈配制成1.0 mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。用乙腈逐級(jí)稀釋成1.0 μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液；準(zhǔn)確移取混合標(biāo)準(zhǔn)中間溶液用空白基質(zhì)提取液稀釋成質(zhì)量濃度為5.0 μg/L、10.0 μg/L、20.0 μg/L、50.0 μg/L、100.0 μg/L、200.0 μg/L系列標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。

1.3.2 原始樣品的前處理

稱取2 g枸杞籽油于50 mL離心管中，加入10 mL乙腈，于13 000 r/min條件下均質(zhì)1 min，加入2 g氯化鈉，繼續(xù)均質(zhì)1 min，4 ℃條件下，以9 000 r/min離心5 min，取上清液2 mL，加入100 mg C18、100 mg PSA及100 mg MgSO4吸附劑凈化，渦旋離心，取上清液過(guò)0.22 μm的濾膜，供氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀測(cè)定。

1.3.3 儀器條件

氣相色譜條件：DB-5MSUI毛細(xì)管色譜柱（30m×0.25mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度280 ℃；不分流進(jìn)樣；載氣為氦氣（純度99.999%），流速1.0 mL/min；程序升溫：60 ℃下保持1 min，以40 ℃/min升至170 ℃，不保持，再以10 ℃/min升至310 ℃，不保持，全部程序時(shí)間21 min，自動(dòng)進(jìn)樣，進(jìn)樣量1 μL。

質(zhì)譜條件：接口溫度290 ℃；電子電離（electronic ionization，EI）源；溶劑延遲4.0 min；四級(jí)桿溫度150 ℃；增益10；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)。枸杞籽油中28種農(nóng)藥的定量和定性離子、碰撞能量等參數(shù)詳見表1。

表1 28種農(nóng)藥的質(zhì)譜分析參數(shù)Table 1 Mass spectrum analysis parameters of 28 pesticides

續(xù)表

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測(cè)農(nóng)藥的選擇

鑒于枸杞籽油是以枸杞籽為主要原材料的加工產(chǎn)品，前期對(duì)目前市場(chǎng)中枸杞常用農(nóng)藥的品種進(jìn)行調(diào)查，并對(duì)120批次枸杞中農(nóng)藥殘留量進(jìn)行評(píng)估[14]，針對(duì)枸杞中陽(yáng)性農(nóng)藥對(duì)枸杞籽油進(jìn)行分析檢測(cè)。

2.2 質(zhì)譜條件優(yōu)化

分別采用單離子監(jiān)測(cè)（single ion monitor，SIM）模式與MRM模式進(jìn)行28種農(nóng)藥含量的測(cè)定。在SIM模式下，由于部分目標(biāo)物響應(yīng)較低、干擾大，難以準(zhǔn)確定性；采用MRM模式，其針對(duì)性強(qiáng)，靈敏度高，對(duì)于較低含量的樣品能準(zhǔn)確的定性定量。因此，本研究選用MRM模式進(jìn)行檢測(cè)。在MRM模式下，質(zhì)量濃度為100 μg/L的28種農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)溶液總離子流圖見圖1。

2.3 基質(zhì)效應(yīng)

基質(zhì)效應(yīng)是在提取基質(zhì)中的目標(biāo)物時(shí)，基質(zhì)中的干擾物影響目標(biāo)化合物的離子化，使得目標(biāo)化合物在儀器上的響應(yīng)發(fā)生了增強(qiáng)或者抑制的現(xiàn)象[15]?；|(zhì)效應(yīng)的存在一方面可能導(dǎo)致樣品產(chǎn)生假陽(yáng)性或者假陰性的問(wèn)題，另一方面會(huì)對(duì)待測(cè)物的準(zhǔn)確定量產(chǎn)生嚴(yán)重干擾。本研究在采用純?nèi)軇┡渲频臉?biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量時(shí)，28種農(nóng)藥在枸杞籽油中均為不同程度的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)。為提高目標(biāo)化合物測(cè)定的準(zhǔn)確度，本研究使用不含農(nóng)藥的空白基質(zhì)提取液配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，降低基質(zhì)干擾的影響。

2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線、線性范圍及檢出限

在優(yōu)化的條件下，以質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，定量離子峰面積為縱坐標(biāo)，將配制的5.0 ng/mL、10.0 ng/mL、20.0 ng/mL、50.0 ng/mL、100.0 ng/mL、200.0 ng/mL系列濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。28種農(nóng)藥的線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)、線性范圍及檢出限（limit of detection，LOD）（信噪比S/N≥10）見表2。結(jié)果表明，28種農(nóng)藥在基質(zhì)中的線性范圍良好，相關(guān)系數(shù)R2均≥0.996，檢出限在10～50 μg/kg。

續(xù)表

2.5 不同比例的凈化填料對(duì)回收率的影響

不同比例的三種常用吸附劑PSA、C18、MgSO4對(duì)農(nóng)藥殘留的影響，結(jié)果見圖2。

圖2 不同吸附劑組合對(duì)28種農(nóng)藥回收率的影響Fig. 2 Effect of different sorbent combinations on recovery rate of the 28 pesticide

由圖2可知，當(dāng)添加50 mg C18、50 mg PSA、100 mg MgSO4時(shí)，由于凈化效果不明顯，仍存在明顯的基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，使得所有化合物的回收率均偏高，只有44.4%以上的農(nóng)藥回收率在70%～120%，氧化樂(lè)果、克菌丹、三唑磷、氯氟氰菊酯、咪鮮胺、氯氰菊酯、嘧菌酯等的回收率偏高明顯，均＞120%。當(dāng)采用200 mg C18、200 mgPSA、100 mg MgSO4吸附劑組合時(shí)，有70.4%以上的農(nóng)藥回收率在70%～120%。而當(dāng)采用100 mg C18、100 mg PSA、100 mg MgSO4吸附劑組合時(shí)，有88.9%以上的農(nóng)藥回收率在70%～120%。因此，選擇PSA、C18和硫酸鎂用量各為100 mg，可以取得較好的凈化效果。

2.6 回收率試驗(yàn)

加標(biāo)量分別為0.025 mg/kg和0.10 mg/kg，用枸杞籽油空白基質(zhì)樣品進(jìn)行加標(biāo)回收試驗(yàn)，結(jié)果見表3。由表3可知，低濃度加標(biāo)回收率范圍為60.10%～128.03%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（relative standard deviation，RSD）為2.02%～17.9%；高濃度加標(biāo)回收率范圍為63.20%～105.10%，RSD為1.53%～9.82%。結(jié)果表明，該檢測(cè)方法準(zhǔn)確度較好。

表3 28種農(nóng)藥加標(biāo)回收率試驗(yàn)結(jié)果Table 3 Results of adding standard recovery rates of 28 pesticides

2.7 樣品檢測(cè)

由于枸杞生長(zhǎng)過(guò)程易交替發(fā)生病蟲害，且種類頗多，因此防治難度非常大。根據(jù)前期對(duì)枸杞干果中農(nóng)藥殘留量的檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，枸杞籽油中檢出的農(nóng)藥在枸杞干果中均被檢出。因此，枸杞籽油中的農(nóng)藥殘留是來(lái)自于枸杞果中。同時(shí)可以看出菊酯類在枸杞籽油中的檢出率較高，可能是由于菊酯類農(nóng)藥廣泛使用于枸杞蚜蟲防治，枸杞蚜蟲對(duì)擬除蟲菊酯藥劑氰戊菊酯、氯氟氰菊酯、氰菊酯已產(chǎn)生低至中等水平抗性[19]。由于不能有效的控制枸杞蚜蟲病，缺乏管理技術(shù)，農(nóng)戶的不規(guī)范用藥，因此在正常水平上加大劑量使用，導(dǎo)致大量的枸杞果干中存在較高殘留，而枸杞籽油中的部分菊酯農(nóng)殘可能是枸杞干果中引入的[20]。對(duì)市售23個(gè)枸杞籽油樣品中的農(nóng)藥殘留量進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果見表4。

表4 枸杞籽油及枸杞干果陽(yáng)性樣品農(nóng)藥殘留水平Table 4 Levels of pesticide residues in goji seed oil and positive samples of goji dried fruit

由表4可知，氯氟氰菊酯、氯氰菊酯、氰戊菊酯均有不同程度檢出，其余農(nóng)藥均未檢出。

與枸杞果中陽(yáng)性樣品農(nóng)藥殘留量相比較，枸杞籽油陽(yáng)性樣品農(nóng)藥殘留量明顯降低，其中氯氟氰菊酯殘留量下降7.6倍，氯氰菊酯殘留量由0.470 mg/kg下降至0.346 mg/kg，氰戊菊酯殘留量下降了2倍，可能是由于枸杞籽油一般都是經(jīng)過(guò)枸杞鮮果打漿后清洗出枸杞籽作為油料種子，在這個(gè)過(guò)程中可能使殘留在油料種子中的農(nóng)藥分解、吸附。但從枸杞到枸杞籽，從枸杞籽油料到成品油加工過(guò)程中農(nóng)藥種類和殘留量的變化情況仍不清楚，值得進(jìn)一步研究。

3 結(jié)論

本研究建立了氣相色譜三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜法（GCMS/MS）同時(shí)測(cè)定枸杞籽油中28種農(nóng)藥殘留的方法。枸杞籽油經(jīng)乙腈提取，以QuEChERS法為前處理技術(shù)，優(yōu)化PSA、C18、MgSO4用量各為100 mg，在質(zhì)譜多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式下，進(jìn)行基質(zhì)外標(biāo)法定量。結(jié)果表明，28種農(nóng)藥在5～200 μg/L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程相關(guān)系數(shù)（R2）均＞0.996，樣品在添加水平為0.100 mg/kg下的平均回收率為63.20%～105.10%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為1.53%～9.82%。該方法前處理操作簡(jiǎn)便，有機(jī)溶劑用量很少，對(duì)環(huán)境和人體友好；準(zhǔn)確度、精密度高，能夠滿足枸杞籽油中28種農(nóng)藥殘留的定性和定量分析。本方法的建立為枸杞及枸杞籽油中農(nóng)藥殘留的監(jiān)控、風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估等的研究提供了一種快速、高效、可靠的分析手段。