趙艷 雷振宏 王棟 王玉龍 郭巖軍 李軍

【摘 ? 要】 為給連翹種質(zhì)資源評價及其有效成分的開發(fā)利用提供參考依據(jù)。對3種不同果實(shí)表面斑點(diǎn)占比果型連翹植株（共40株）果實(shí)形態(tài)參數(shù)，青翹內(nèi)連翹苷、連翹酯苷A檢測和分析。測定結(jié)果表明，斑點(diǎn)占比居中的有效成分含量高于其他兩類。育種可以優(yōu)先考慮斑點(diǎn)居中種源。

【關(guān)鍵詞】 青翹;斑點(diǎn);連翹苷;連翹酯苷

Study on the quality of different spots Green Fructus forsythiae

Zhao Yan ? Lei Zhenhong ? Wang Dong ? Wang Yulong ? Guo Yanjun ? Li Jun

（Shanxi Zhendong Daodi Druges Development Co.，Ltd. ? 047100 ）

[Abstract] To provide reference for the germplasm resources evaluation of forsythia forsythia and the development and utilization of its effective components.The fruit morphology parameters of three different fruit types of forsythia plants （A total of 40） were tested and analyzed，Detection and analysis of forsythin and Forsythiasid A.The results showed that the content of effective components in the speckle fraction was higher than the other two types.The spot centered provenance can be given priority in breeding.

[Keywords] Green Fructus forsythiae; spots; forsythin; Forsythiasid A

連翹來源于木犀科植物連翹Forsythia suspense （Thunb.）Vahl的干燥果實(shí)，常用大宗藥材，有“瘡家圣藥”之稱的美譽(yù)，最 早記載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為下品。連翹味苦，性微寒。具有清熱解毒，消腫散結(jié)，疏散風(fēng)熱之功效[1]。主治溫?zé)帷彲?、瘰疬、丹毒、斑疹、流感等。連翹還有抗菌、強(qiáng)心、利尿、鎮(zhèn)吐等藥理作用，有抗微生物、抗肝損傷、抗炎、保護(hù)心血管系統(tǒng)等作用，臨床上常用連翹治療急性風(fēng)熱感冒、癰腫瘡毒、淋巴結(jié)結(jié)核、尿路感染等證。

晉東南地區(qū)地形與氣候均交獨(dú)特，是中藥材連翹的重要產(chǎn)區(qū)之一，但存在的品種資源卻是十分混雜。其中有大、中、小果型之分，也存在長葉、邊緣有齒、邊緣光滑等葉型，外觀斑點(diǎn)有無、多少也有差異。根據(jù)植物體內(nèi)活性成分的積累受遺傳因素及環(huán)境的雙重影響，形態(tài)變異滯后于生理生化變異的一般規(guī)律，可以推測，連翹植株變異在次生代謝產(chǎn)物上有所反應(yīng)映[2]。為給連翹種質(zhì)資源評價及其有效成分的開發(fā)利用提供依據(jù)，測定了該地區(qū)同一栽培群體下果實(shí)斑點(diǎn)不同連翹植株的形態(tài)參數(shù)，并對其果實(shí)中的連翹苷、連翹酯苷A的含量及相關(guān)性進(jìn)行了初步分析，現(xiàn)將研究結(jié)果分析報(bào)道如下。

1 ?材料與方法

1.1 ?儀器與試劑

Aglient1260高效液相色譜儀（四元泵、紫外檢測器、在線脫氣機(jī)、柱溫箱）;BSA124S電子天平（賽多利斯科學(xué)儀器）;KQ-500DB型數(shù)控超聲波清洗機(jī)（昆山市超聲儀器有限公司）;HY-3A多功能調(diào)速振蕩器（江蘇金壇市金城國勝實(shí)驗(yàn)儀器廠）;FW80高速萬能粉碎機(jī)（天津市泰斯特儀器有限公司）。

試驗(yàn)用水為雙蒸水，乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純;連翹苷對照品（批號：含量為96.8%），連翹酯苷A對照品（批號：含量為92.9%），供含量測定用，均購自中國藥品生物品檢定所。

1.2 ?材料

材料來源于山西振東集團(tuán)綠化園區(qū)定植的40株連翹植株，連翹植株經(jīng)山西省長治學(xué)院植物學(xué)金山教授、鐵軍教授鑒定為木犀科連翹Forsythia suspense （Thunb.）Vahl。采摘時間為2018年8月25日，每株隨機(jī)采果100個，將果實(shí)混勻按斑點(diǎn)面積比例不同分成三個組：Y≥60%、60%>Y>30%、Y≦30%，Y=斑點(diǎn)面積：果實(shí)表面積×100%。分別水煮8min，85℃烘箱干燥，待檢[3]。

1.3 ?方法

1.3.1條件 ? 色譜柱為Luna5uC18（2）100A（250mm×4.6mm，5μm），連翹苷測定流動相為乙腈-水（25：75，V：V），檢測波長為277nm，柱溫為室溫，流速為1.0mL/min;連翹酯苷A測定流動相為乙腈-0.4%冰醋酸溶液（15：85，V：V），檢測波長為330nm，柱溫為室溫，流速為1.0mL/min。HY-3A多功能調(diào)速振蕩器，頻率為125Hz。

1.3.2 ?對照品溶液的制備 ? ?精密稱取連翹苷對照品11.47mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得;精密稱取連翹酯苷A對照14.97mg，置10mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得（臨用配置）。

1.3.3 ?供試品溶液的制備 ? ?連翹苷供試品溶液制備：取供試樣品粉末（過三號篩）約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15mL，稱定重量，浸漬過夜，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）25min，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液5mL，蒸至近干，加中性氧化鋁0.5g拌勻，轉(zhuǎn)移至中性氧化鋁柱（100-120目，1g，內(nèi)徑為1.0-1.5cm）上，用70%乙醇80mL洗脫，搜集洗脫液，濃縮至干，殘?jiān)?0%甲醇溶解 ，轉(zhuǎn)移至5mL量瓶中，并稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

連翹酯苷A供試品溶液制備：取供試樣品粉末（過三號篩）約0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇15mL，密塞，稱定重量，超聲處理（功率250W，頻率40kHz）30min，放冷，再稱定重量，用70%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，即得[1]。

1.3.4 ?線性關(guān)系考察 ? ?分別精密量取濃度為1.11030mg/mL的連翹苷、1.39071mg/mL的連翹酯苷A對照品溶液3、5、8、10、12、15μL進(jìn)樣分析，測定峰面積，以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得連翹苷回歸方程為（y=2219.4x+591.86，R2=0.9997），表明連翹苷進(jìn)樣量在3.33-13.32μg具有良好的線性關(guān)系;連翹酯苷A回歸方程為（y=1771x+599.59，R2=0.9997），進(jìn)樣量在4.17-6.69μg具有良好的線性關(guān)系。

1.3.5 ?精密度試驗(yàn) ? ?精密吸取對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，連翹苷峰面積的RSD為0.8%，連翹酯苷A峰面積的RSD為0.1%，表明該方法的精密度良好。

1.3.6 ?重復(fù)性試驗(yàn) ? ?取供試品（同一批號），按供試品溶液的制備方法制備6份供試液，分別進(jìn)樣10μL，連翹苷峰面積的RSD為1.6%，連翹酯苷A峰面積的RSD為0.3%。

1.3.7 ?穩(wěn)定性試驗(yàn) ? ?精密吸取同一種供試品溶液在0、4、6、8、10、12h內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣6次，每次10μL，計(jì)算連翹苷峰面積的RSD為1.5%，連翹酯苷A峰面積的RSD為0.2%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2 ?結(jié)果與分析

2.1 ?果實(shí)性狀測定

根據(jù)分組，測定不同組的果實(shí)縱徑、橫徑、百果均重、折干率（100%×干果重/鮮果重）等，評價不同斑點(diǎn)果實(shí)的性狀，每項(xiàng)5次重復(fù)，去除最高、最低值，取均值。結(jié)果見表1。

三種斑點(diǎn)果實(shí)的連翹在該地區(qū)均有分布，Y≦30%較少，其余兩種分布較為普遍。從表1可以得出，三種斑點(diǎn)類型橫縱徑和百果重差距不大，折干率Y≥60%較小，60%>Y>30%次之，Y≦30%最大。

2.2 ?有效成分含量測定

根據(jù)2015版《中國藥典》通則2201項(xiàng)下方法測定，結(jié)果見表2：

從表2可以得出，三種果型的連翹苷、連翹酯苷A含量均高于藥典標(biāo)準(zhǔn)，60%>Y>30%的連翹苷、連翹酯苷A的含量均高于其他兩種類型。

三類型的有效成分含量較以往均較低，分析其原因，2018年4月5日，一場大雪突襲，氣溫急降，隨后的冰凍，導(dǎo)致正在開花的連翹受到了嚴(yán)重的凍害，花瓣枯萎或者直接掉落，晉東南主產(chǎn)區(qū)青翹的產(chǎn)量急劇下降，好多植株顆粒無收，只有背風(fēng)坡地或溝底有零星果實(shí)，質(zhì)量較以往差距很大，試驗(yàn)還需后期繼續(xù)跟進(jìn)。

3 ?討論

連翹以果實(shí)入藥，青翹以其清熱解毒功效，成為78個中成藥的原料藥，需求量很大，具有很好的藥用價值和經(jīng)濟(jì)價值[1]。表面斑點(diǎn)是連翹的固有性狀，能夠反映連翹的內(nèi)在質(zhì)量[5]。連翹果實(shí)表面斑點(diǎn)的成因還未有明確報(bào)道，多在外因方面有些猜測，比如海拔、坡面、氣候等外因[2]。本研究得出青翹斑點(diǎn)多和少對應(yīng)的連翹苷、連翹酯苷A含量有相關(guān)性，表面斑點(diǎn)過多、多少，含量檢測結(jié)果都不高，具體的量化關(guān)系還需擴(kuò)大樣本數(shù)量，進(jìn)一步深入研究。本研究旨在針對連翹的良種繁育，選出優(yōu)良品種，增加主產(chǎn)區(qū)的競爭優(yōu)勢。

參考文獻(xiàn)：

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.一部[M].北京：中? ? ?國醫(yī)藥科技出版社，2015：170.

[2] 王海莉.不同環(huán)境條件對連翹生長發(fā)育過程的影響[J].中醫(yī)? ? ? 學(xué)報(bào)，2014，29（11）：1630-1631+1634.

[3] 趙艷，等.青翹炮制工藝研究及其標(biāo)準(zhǔn)化操作規(guī)程（SOP）的? ? ? 制定[J].園藝與種苗，2016，（1）：3-5+29.

[4] 夏偉，等.連翹不同果形質(zhì)量評價[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，? ? ?2018，23（6）：60-64.

[5] 劉辰，等.連翹表面斑點(diǎn)生長規(guī)律及影響因子的影響[J].山? ? ? 東化工，2018，47（10）：95-97.