陳剛 呂仁廣 楊勇 王博 陳廣東 劉成會

膀胱癌是最常見的泌尿系腫瘤，我國男性膀胱癌發(fā)病率居惡性腫瘤的第七位，女性排在第十位以后[1]。膀胱癌包括尿路上皮癌、鱗狀細(xì)胞癌和腺細(xì)胞癌，其次還有較少見的小細(xì)胞癌、混合型癌、癌肉瘤及轉(zhuǎn)移性癌等，其中尿路上皮癌最為常見，占膀胱癌的90%以上[2，3]，其主要治療方法為經(jīng)尿道電切術(shù)，術(shù)后輔以膀胱內(nèi)灌注化療或免疫治療，但術(shù)后復(fù)發(fā)率非常高，為40%～80%[4]，且絕大多數(shù)于術(shù)后1～2年內(nèi)復(fù)發(fā)。這可能主要因其對常規(guī)的治療手段（如化療、放療及免疫治療等）敏感性較低所致。究其原因，主要在于腫瘤本身易復(fù)發(fā)及易于產(chǎn)生治療耐受。因此，深入探討膀胱癌的發(fā)病機制，尋求有效的治療方法有重要意義。

腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個多基因參與、多步驟發(fā)展的復(fù)雜過程，一方面和細(xì)胞增殖或分化異常有關(guān)，另一方面也與程序性細(xì)胞死亡的異常有關(guān)，是細(xì)胞增殖與程序性細(xì)胞死亡平衡失調(diào)的結(jié)果。程序性細(xì)胞死亡過程即細(xì)胞凋亡過程，若促進凋亡基因的表達(dá)減少或抑制凋亡的基因表達(dá)增多，都將促使細(xì)胞惡性增生，導(dǎo)致腫瘤發(fā)生。PDCD4 和PDCD5 是新近發(fā)現(xiàn)的兩種程序性細(xì)胞死亡因子。目前的研究表明，在小鼠正常肝臟中PDCD4 的表達(dá)水平最高，其次在睪丸、腦、肺、腎及脾，而在心臟和骨骼肌中表達(dá)水平較低[5]。在人類多種組織中PDCD4 均有表達(dá)，如結(jié)腸、肝、腦、肺、食管、腎臟、表皮、胰腺及卵巢等[6]。國外研究報道稱PDCD4 是腫瘤抑制基因，抑制腫瘤的轉(zhuǎn)化、進展及翻譯過程[7，8]。 研究發(fā)現(xiàn)PKB 是P13 信號傳導(dǎo)通路中重要的抑制因子，能夠調(diào)節(jié)PDCD4 蛋白的細(xì)胞亞定位。正常情況下，PDCD4 蛋白在細(xì)胞核及細(xì)胞漿中均有表達(dá)，而在外界環(huán)境發(fā)生改變時，如營養(yǎng)條件下降或細(xì)胞發(fā)生惡性增殖時，PDCD4 蛋白可由細(xì)胞核通過其兩端的核輸出信號（NES）轉(zhuǎn)移到胞漿中，PKB 激酶在其胞核與胞漿的轉(zhuǎn)運中發(fā)揮調(diào)節(jié)作用[9]。研究也同時表明，在人類50 多種組織中發(fā)現(xiàn)了PDCD5 mRNA 的表達(dá)，包括成年人的腎上腺、睪丸、心臟、胎盤和造血系統(tǒng)中，其在成年組織中的表達(dá)明顯高于胚胎組織。PDCD4 和PDCD5 均與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，因此這兩種因子現(xiàn)已成為腫瘤分子生物學(xué)研究的熱點。

本研究選取膀胱癌組織石蠟切片標(biāo)本60 例和癌旁非瘤組織60 例，采用免疫組織化學(xué)兩步法檢測PDCD4 蛋白和PDCD5 蛋白在上述組織中的表達(dá)情況，尋找其在膀胱癌中表達(dá)的規(guī)律，并將PDCD4 和PDCD5 蛋白表達(dá)結(jié)果與膀胱癌的組織學(xué)分類、TNM 分期、組織學(xué)分級和轉(zhuǎn)移情況等進行相關(guān)性分析，以期尋找判斷膀胱癌侵襲性及估計預(yù)后可靠的分子標(biāo)記物和抗腫瘤治療新靶點。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集2012年6月～2017年6月我院泌尿外科手術(shù)切除的膀胱癌組織及其配對的癌旁非瘤組織石蠟切片標(biāo)本各60 例。其中男35 例，女25 例；年齡27～79 歲，平均58 歲；其中尿路上皮癌42 例，鱗狀細(xì)胞癌10 例，腺細(xì)胞癌8 例；按TNM 分期非肌層浸潤性膀胱癌（Tis、Ta、T1）45 例，肌層浸潤性膀胱癌（T2 以上）15 例；按照組織學(xué)分級，高分化38 例，中分化17 例，低分化5 例；病理學(xué)或影像學(xué)檢查伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者6 例，無轉(zhuǎn)移者54 例。60 例與其配對的癌旁非瘤組織作為對照。所有患者術(shù)前未行放、化療及生物免疫治療，所有膀胱癌標(biāo)本均經(jīng)病理證實。

1.2 主要儀器與試劑石蠟包埋機（常州中威公司），組織脫水機（湖北孝感儀器廠），石蠟切片機（德國萊卡公司），水浴箱（上海一恒科技有限公司），微波爐（日本松下電器公司），冰箱（德國SIEMENS 公司），電熱恒溫培養(yǎng)箱（上海華辰醫(yī)用儀表公司），移液器（賽默飛世爾科技公司），顯微鏡Olympus BX51（日本Olympus 公司），Image-proplus 顯微圖象處理系統(tǒng)（美國Media Cybernetics 公司），PDCD4 抗體和PDCD5 抗體（北京博奧森生物技術(shù)有限公司），Super Sensitive TM 即用型超敏免疫組化二抗試劑盒（巴傲得生物科技有限公司），抗體稀釋液（北京中杉金橋生物技術(shù)公司），PBS 和枸櫞酸鹽緩沖液（北京中杉金橋生物技術(shù)公司），蘇木素、鹽酸酒精、80%乙醇、95%乙醇、無水乙醇、二甲苯、中性樹脂（腫瘤實驗室提供）。

1.3 方法將固定好的腫瘤組織經(jīng)自動脫水機脫水、透明、浸蠟、包埋、切片，采用免疫組織化學(xué)超敏 法，以PBS 代 替 一 抗（PDCD4 抗 體、PDCD5 抗體）作為陰性對照。將石蠟切片置入60℃烤箱中烤片2h；石蠟切片置于二甲苯Ⅰ中浸泡20min；石蠟切片置于二甲苯Ⅱ中浸泡20min；100%乙醇中浸泡5min×2 次；95%乙醇中浸泡5min；80%乙醇中浸泡5min；雙蒸水沖洗5min×2 次；抗原修復(fù)：微波熱修復(fù)，0.01M 枸櫞酸鈉緩沖液（pH=6）1 000ml燒杯中放入600～800ml 枸櫞酸鈉緩沖液，蓋上鋁鉑紙，以免液體蒸發(fā)過多，高火至液體沸騰，放入塑料片架（內(nèi)放片子），此時調(diào)成中火，維持5min×4次；微波修復(fù)完畢后，放于室溫自然冷卻（內(nèi)盛塑料片架的燒杯從微波爐里取出），至少30min；PBS 沖洗5min×3 次；用內(nèi)源性過氧化物酶阻斷劑封閉10min，用于阻斷組織內(nèi)可能含有的內(nèi)源性過氧化物酶；封閉液室溫孵育5min，用于清除非特異性背景（注意：此步驟時間不能超過10min，并且根據(jù)實際情況，是否需要此步封閉）；甩干切片上的多余血清（不要用PBS 洗）；用抗體稀釋液稀釋一抗（PDCD4抗體、PDCD5 抗體）至1∶100，滴加到切片上，置入濕盒中放入4℃冰箱中孵育過夜（預(yù)實驗證明 1：100 濃度稀釋一抗，4℃過夜，染色效果較為理想）；過夜后在室溫復(fù)溫45min；PBS 沖洗5min×3 次；用一抗放大劑室溫孵育10min，PBS 沖洗5min×3 次；用辣根過氧化物酶聚合物室溫孵育10min，PBS 沖洗5min×3 次（注意：辣根過氧化物酶對光敏感，應(yīng)避光孵育）；取30μlDAB 濃縮液到1mlDAB 反應(yīng)物中，混勻后加到組織上，室溫反應(yīng)5min 或根據(jù)顯色情況及時用PBS 沖洗終止反應(yīng)（注意：稀釋液可4℃保存2 周）；雙蒸水沖洗5min×2 次；蘇木素復(fù)染10s；用大量自來水充分沖洗5min；用1%鹽酸酒精洗2s；自來水沖洗返藍(lán)；雙蒸水沖洗5min；80%乙醇中浸泡5min；95%乙醇中浸泡5min；100%乙醇中浸泡5min×2 次；石蠟切片置于二甲苯Ⅲ中浸泡10min；滴加適當(dāng)?shù)闹行詷渲诮M織上，蓋上蓋玻片封片；拍照，觀察。

1.4 陽性結(jié)果判斷所有免疫組化的切片分別由兩名未接觸過患者的病理專家獨立評分。PDCD4 和PDCD5 的表達(dá)以細(xì)胞核或細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性，根據(jù)細(xì)胞陽性比例和著色強度綜合制定免疫組織化學(xué)半定量記分法推算二者的表達(dá)情況。

陽性判斷標(biāo)準(zhǔn)：①根據(jù)陽性細(xì)胞所占百分?jǐn)?shù)定為0～3 分，共四級（A 項）：0%為0 分、＜10%為1 分、10%～50%為2 分、＞50%為3 分。②根據(jù)細(xì)胞染色深淺定為0～3 分，共四級（B 項）：0 分為細(xì)胞核或細(xì)胞漿上無棕黃色顆粒，與背景無區(qū)別；1 分為細(xì)胞核或細(xì)胞漿上有淡棕黃色顆粒，高于背景底色，也明顯高于陰性對照；2 分為細(xì)胞核或細(xì)胞漿上有著色較清晰的棕黃色顆粒，介于強弱之間；3 分為細(xì)胞核或細(xì)胞漿上有大量的深棕黃色顆粒，陽性染色強。③判定標(biāo)準(zhǔn)綜合A 項+B 項判定方法定為四級標(biāo)準(zhǔn)：0～1 分為陰性（-）；2～3 分為弱陽性（+）；4～5 分為中等強度陽性（++）；6 分為強陽性（+++）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法應(yīng)用SPSS 16.0 統(tǒng)計學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)處理。PDCD4 和PDCD5 蛋白在膀胱癌組織中表達(dá)陽性率的比較采用卡方檢驗，而PDCD4 和PDCD5 蛋白在膀胱癌組織中表達(dá)染色結(jié)果的比較采用秩和檢驗。采用Spearman 等級相關(guān)分析PDCD4 和PDCD5 在膀胱癌組織表達(dá)的相關(guān)性，設(shè)置檢驗水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 PDCD4 蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)

2.1.1 PDCD4 蛋白在膀胱癌組織及癌旁非瘤組織中的表達(dá) 免疫組織化學(xué)染色特異性良好，PDCD4蛋白在細(xì)胞核及細(xì)胞漿中均有表達(dá)，其結(jié)果顯示，在癌旁非瘤組織中PDCD4 蛋白表達(dá)的陽性率為100.0%（60/60），分別為中陽性30.0%（18/60），強陽性70.0%（42/60）。而在膀胱癌組織中PDCD4蛋白表達(dá)的陽性率為80.0%（48/60），分別為弱陽性23.3%（14/60），中陽性25.0%（15/60），強陽性31.7%（19/60）。膀胱癌組織中PDCD4 蛋白的表達(dá)水平明顯低于癌旁非瘤組織中PDCD4 蛋白的表達(dá)水平（P＜0.05）。各類型膀胱癌組織中PDCD4 蛋白表達(dá)的陽性率，尿路上皮癌為81.0%（34/42），鱗狀細(xì)胞癌80.0%（8/10），腺細(xì)胞癌75.0%（6/8）。膀胱癌組織中PDCD4 蛋白的表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分類無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1、圖1。

2.1.2 PDCD4 蛋白在不同組織學(xué)分級及TNM 分期中的表達(dá) PDCD4 蛋白在膀胱癌組織不同組織學(xué)分級中高分化（Grade1）的陽性表達(dá)率為100.0%（38/38），中分化（Grade2）的陽性表達(dá)率為82.4%（14/17），低分化或未分化（Grade3）的陽性表達(dá)率為20.0%（1/5），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且膀胱癌組織組織學(xué)分級越高，PDCD4 蛋白的陽性表達(dá)率越低，應(yīng)用等級相關(guān)分析的方法進行整體比較，結(jié)果證實PDCD4 蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.370，P=0.004），見表2。

PDCD4 蛋白在膀胱癌組織不同TNM 分期中Tis、Ta、T1 期的陽性表達(dá)率為100.0%（45/45），T2 期以上的陽性表達(dá)率為66.7%（10/15），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且膀胱癌組織TNM分期越高，PDCD4 蛋白的陽性表達(dá)率越低，應(yīng)用等級相關(guān)分析的方法進行整體比較，結(jié)果證實PDCD4 蛋白的表達(dá)與TNM 分期呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.437，P＜0.001）。見表2。

表1 PDCD4 蛋白在膀胱癌組織及癌旁非瘤組織中的表達(dá)

圖1 PDCD4 在膀胱非瘤組織和癌組織中的表達(dá)（×400）

表2 PDCD4 蛋白在不同組織學(xué)分級及TNM 分期中的表達(dá)

2.1.3 PDCD4 蛋白的表達(dá)與不同性別、年齡、腫瘤大小、有無轉(zhuǎn)移膀胱癌的關(guān)系 PDCD4 蛋白在男性中的陽性表達(dá)率為80.0%（28/35），在女性中的陽性表達(dá)率為80.0%（20/25），膀胱癌組織中PDCD4 蛋白的表達(dá)與性別無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。PDCD4 蛋白在＜60 歲患者中的陽性表達(dá)率為81.8%（27/33），在≥60 歲的患者中的陽性表達(dá)率為77.8%（21/27），膀胱癌組織中PDCD4 蛋白的表達(dá)與年齡無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。PDCD4 蛋白在腫瘤≤1cm 患者中的陽性表達(dá)率為92.6%（25/27），在腫瘤＞1cm 患者中的陽性表達(dá)率為69.7%（23/33），兩者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。PDCD4 蛋白在無轉(zhuǎn)移的膀胱癌的患者中的陽性表達(dá)率為88.9%（48/54），在有轉(zhuǎn)移的膀胱癌患者中的陽性表達(dá)率為50.0%（3/6），兩者比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。

表3 PDCD4 蛋白的表達(dá)與不同性別、年齡、腫瘤大小及 有無轉(zhuǎn)移膀胱癌的關(guān)系

2.2 PDCD5 蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)

2.2.1 PDCD5 蛋白在膀胱癌組織及癌旁非瘤組織中的表達(dá) 免疫組織化學(xué)染色特異性良好，PDCD5蛋白在細(xì)胞核及細(xì)胞漿中均有表達(dá)，其結(jié)果顯示，在癌旁非瘤組織中PDCD5 蛋白表達(dá)的陽性率為100.0%（60/60），分別為中陽性25.0%（15/60），強陽性75.0%（45/60）。而在膀胱癌組織中PDCD5蛋白表達(dá)的陽性率為80.0%（48/60），分別為弱陽性25.0%（15/60），中陽性26.7%（16/60），強陽性28.3%（17/60）。膀胱癌組織中PDCD5 蛋白的表達(dá)水平明顯低于癌旁非瘤組織中PDCD5 蛋白的表達(dá)水平，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。各類型膀胱癌組織中PDCD5 蛋白表達(dá)的陽性率分別為尿路上皮癌81.0%（34/42），鱗狀細(xì)胞癌80.0%（8/10），腺細(xì)胞癌75.0%（6/8）。經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，膀胱癌組織中PDCD4 蛋白的表達(dá)與腫瘤的組織學(xué)分類無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4，圖2。

表4 PDCD5 蛋白在膀胱癌組織及癌旁非瘤組織中的表達(dá)

圖2 PDCD5 在膀胱非瘤組織和癌組織中的表達(dá)（×400）

2.2.2 PDCD5 蛋白在不同組織學(xué)分級及TNM 分期中的表達(dá) PDCD5 蛋白在膀胱癌組織不同組織學(xué)分級中高分化（Grade1）的陽性表達(dá)率為100.0%（38/38），中分化（Grade2）的性表達(dá)率為76.5%（13/17），低分化或未分化（Grade3）的陽性表達(dá)率為20.0%（1/5），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且膀胱癌組織組織學(xué)分級越高，PDCD5 蛋白的陽性表達(dá)率越低，應(yīng)用等級相關(guān)分析的方法進行整體比較，結(jié)果證實PDCD5 蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.403，P=0.001）。見表5。

表5 PDCD5 蛋白在不同組織學(xué)分級及TNM 分期中的表達(dá)

PDCD5 蛋白在膀胱癌組織不同TNM 分期中Tis、Ta、T1 期的陽性表達(dá)率為100.0%（45/45），T2期以上的陽性表達(dá)率為60.0%（9/15），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），且膀胱癌組織TNM 分期越高，PDCD5 蛋白的陽性表達(dá)率越低，應(yīng)用等級相關(guān)分析的方法進行整體比較，結(jié)果證實PDCD5 蛋白的表達(dá)與TNM 分期呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.523，P＜0.001）。

2.2.3 PDCD5 蛋白的表達(dá)與不同性別、年齡、腫瘤大小、有無轉(zhuǎn)移膀胱癌患者的關(guān)系 PDCD5 蛋白在男性中的陽性表達(dá)率為77.1%（27/35），在女性中的陽性表達(dá)率為76.0%（19/25），膀胱癌組織中PDCD5 蛋白的表達(dá)與性別無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。PDCD5 蛋白在＜60 歲患者中的陽性表達(dá)率為78.8%（26/33），在≥60 歲的患者中的陽性表達(dá)率為81.5%（22/27），膀胱癌組織中PDCD5 蛋白的表達(dá)與年齡無關(guān)，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。PDCD5 蛋白在腫瘤≤1cm 的患者中的陽性表達(dá)率為88.9%（24/27），在腫瘤＞1cm 患者中的陽性表達(dá)率為66.7%（22/33），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。PDCD5 蛋白在無轉(zhuǎn)移的膀胱癌的患者中的陽性表達(dá)率為87.0%（47/54），在有轉(zhuǎn)移的膀胱癌患者中的陽性表達(dá)率為66.7%（4/6），差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表6。

表6 PDCD5 蛋白的表達(dá)與不同性別、年齡、腫瘤大小及 有無轉(zhuǎn)移膀胱癌的關(guān)系

2.3 膀胱癌組織中PDCD4 蛋白和PDCD5 蛋白表達(dá)的相關(guān)性60 例膀胱癌組織中有45 例PDCD4蛋白和PDCD5 蛋白同時表達(dá)陽性，10 例兩者同時表達(dá)陰性，經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)分析，PDCD4 蛋白和PDCD5蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.748，P＜0.001）。

3 討論

膀胱癌是泌尿系統(tǒng)最常見的惡性腫瘤，發(fā)病率居泌尿系統(tǒng)惡性腫瘤的首位，由于膀胱癌多中心性起源及多發(fā)性的特點，40%～80%行保留膀胱手術(shù)的患者術(shù)后復(fù)發(fā)[2]，其中10%的患者發(fā)展為浸潤性癌或轉(zhuǎn)移。膀胱癌發(fā)生轉(zhuǎn)移后，多數(shù)患者在2年內(nèi)死亡。為避免腫瘤復(fù)發(fā)、延緩腫瘤的進展或根除殘余病灶，術(shù)后一般都輔助膀胱內(nèi)灌注治療，采用合適的藥物對延遲和預(yù)防淺表性膀胱腫瘤的復(fù)發(fā)極為必要。影響膀胱癌預(yù)后最重要的因素是病理分期，此外腫瘤的大小、組織學(xué)分級、患者行為狀態(tài)評分、腫瘤中是否存在組織壞死、生化指標(biāo)異常等因素也與膀胱癌的預(yù)后有關(guān)。目前有關(guān)膀胱癌的研究表明，腫瘤的發(fā)生和發(fā)展是一個多基因參與、多階段發(fā)展的復(fù)雜過程，實際上是多種腫瘤相關(guān)基因表達(dá)失?；蚨喾N腫瘤抑制基因失活所致[10，11]。因此，研究生物因子在膀胱癌組織中的表達(dá)可能為臨床提供必要的診斷、預(yù)后指標(biāo)和治療標(biāo)準(zhǔn)。

PDCD4 最早由Shibahara 等[12]在小鼠體內(nèi)發(fā)現(xiàn)，在小鼠體內(nèi)大部分細(xì)胞發(fā)生凋亡時該基因表達(dá)上調(diào)。人的PDCD4 基因定位于染色體的10q25.2，含13 個外顯子，它的DNA 全長26.9 kb， cDNA 全長約3.5kb，其中編碼區(qū)約1.4kb[13]。目前研究發(fā)現(xiàn)PDCD4 蛋白在細(xì)胞核內(nèi)合成，并轉(zhuǎn)運至胞漿中發(fā)揮作用，在蛋白序列上含有兩個保守的α 螺旋結(jié)構(gòu)區(qū)-MA3（mitogen activated3），使其可以通過MA3 的結(jié)構(gòu)域競爭性地結(jié)合到eIF4A 上，從而抑制解螺旋酶活性，抑制腫瘤細(xì)胞的翻譯過程[14]。本實驗免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示PDCD4 蛋白在細(xì)胞核及細(xì)胞漿中均有表達(dá)，而在外界環(huán)境發(fā)生改變時，如營養(yǎng)條件下降或細(xì)胞發(fā)生惡性增殖時，PDCD4 蛋白可由細(xì)胞核通過其兩端的核輸出信號（NES）轉(zhuǎn)移到胞漿中。目前來自人腫瘤的研究結(jié)果說明PDCD4 是一種新的抑癌基因，它的下調(diào)或缺失與多種癌癥的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系，如肺癌、胃癌、膠質(zhì)瘤、卵巢癌、肝癌、黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌、大腸腺癌、神經(jīng)細(xì)胞瘤、口腔腫瘤等。這些研究結(jié)果均提示PDCD4 有可能成為腫瘤基因治療的新靶點。

PDCD5 是北京大學(xué)人類疾病基因研究中心從正常培養(yǎng)的白血病細(xì)胞株TF-l 細(xì)胞中克隆得到的高表達(dá)的程序性細(xì)胞死亡相關(guān)新基因，當(dāng)時命名為TFAR19（TF-1 cell apoptosis related gene 19）。后經(jīng)國際人類基因命名委員會建議，命名為PDCD5。PDCD5 基因定位于染色體的19q13.11，基因全長約有6kb，由6 個外顯子和5 個內(nèi)含子組成，分為3個結(jié)構(gòu)域，外顯子6 可能是一個編碼與促凋亡活性密切相關(guān)的功能結(jié)構(gòu)域，cDNA 全長為559bp，包括AATAAA 加尾信號和polyA 尾，其中25-399bp 有一個編碼125 個氨基酸的讀碼框架，在25bp 處有一個ATG 起始密碼子。PDCD5 基因的表達(dá)受多種因素調(diào)控，現(xiàn)有資料表明PDCD5 是凋亡促進劑，而不是凋亡誘導(dǎo)劑[15，16]。PDCD5 作為一個凋亡調(diào)控分子，與腫瘤的預(yù)后、耐藥以及治療都有著密切的關(guān)系。

本實驗進一步認(rèn)識了PDCD4 和PDCD5 在膀胱癌發(fā)生、發(fā)展中的作用，為今后的研究提供了真實可靠的依據(jù)。我們應(yīng)用免疫組織化學(xué)兩步法在蛋白水平檢測了PDCD4 和PDCD5 在膀胱癌組織及癌旁非瘤組織中的表達(dá)情況，其結(jié)果顯示PDCD4蛋白和PDCD5 蛋白在細(xì)胞核及細(xì)胞漿中均有表達(dá)。在癌旁非瘤組織中PDCD4 蛋白表達(dá)的陽性率為100.0%（60/60），而在膀胱癌組織中PDCD4蛋白表達(dá)的陽性率為80.0%（48/60），膀胱癌組織中PDCD4 蛋白的表達(dá)水平明顯低于癌旁非瘤組織中的表達(dá)水平（P＜0.05）。在癌旁非瘤組織中PDCD5 蛋白表達(dá)的陽性率為100.0%（60/60），而在膀胱癌組織中PDCD5 蛋白表達(dá)的陽性率為80.0%（48/60），膀胱癌組織中PDCD5 的表達(dá)水平明顯低于癌旁非瘤組織中的表達(dá)水平（P＜0.05）。PDCD4蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.370，P=0.004），與TNM 分期呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.437，P＜0.001）；PDCD5 蛋白的表達(dá)與組織學(xué)分級呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.403，P=0.001），與TNM 分期呈顯著負(fù)相關(guān)（r=-0.523，P=0.001）。最后進行了分組統(tǒng)計結(jié)果，顯示不同性別、年齡的膀胱癌患者PDCD4和PDCD5 的表達(dá)均差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；而不同腫瘤大小和有無轉(zhuǎn)移的膀胱癌患者PDCD4和PDCD5 的表達(dá)差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。本實驗研究發(fā)現(xiàn)60 例膀胱癌組織中有45 例PDCD4蛋白和PDCD5 蛋白同時表達(dá)陽性，10 例兩者同時表達(dá)陰性，應(yīng)用Spearman 等級相關(guān)分析結(jié)果示，PDCD4 蛋白和PDCD5 蛋白在膀胱癌組織中的表達(dá)呈正相關(guān)（r=0.748，P＜0.05）。以上實驗結(jié)果說明，PDCD4 和PDCD5 可能在不同程度上參與了膀胱癌發(fā)生、發(fā)展過程中的細(xì)胞凋亡的調(diào)控。細(xì)胞凋亡是一個復(fù)雜的基因調(diào)控過程，靠凋亡促進因子和抑制因子相互作用來保持平衡，細(xì)胞最終是否走向凋亡取決于促進因子和抑制因子相互作用的最終結(jié)果。該實驗說明各種因素所致的膀胱上皮細(xì)胞演變?yōu)槟[瘤細(xì)胞后，其凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)呈現(xiàn)下降水平，且隨著腫瘤的演變，凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)呈進行性下降。

綜上所述，PDCD4 和PDCD5 是兩個與膀胱癌相關(guān)的抑癌基因。在膀胱癌中的表達(dá)均存在不同程度的下降或缺失，并與膀胱癌的分化惡性程度相關(guān)。鑒于抑癌基因PDCD4 和PDCD5 的特殊生物學(xué)特性及其與膀胱癌關(guān)系的復(fù)雜性，可以預(yù)測這兩種因子在膀胱癌的診斷和治療上可能產(chǎn)生積極的作用，可以充分利用分子生物學(xué)的技術(shù)調(diào)控PDCD4和PDCD5 的基因表達(dá)，阻滯細(xì)胞增殖，促進細(xì)胞凋亡，將有可能發(fā)揮抑制膀胱尿路上皮細(xì)胞生長的作用，從而達(dá)到治療膀胱癌的目的，這將可能成為人類膀胱腫瘤基因治療的突破口。