郎天瓊,羅國(guó)勇,王 劍,張敬杰

(貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院,貴州 貴陽(yáng)550025)

烏桕(Sapium sebiferum)為大戟科烏桕屬喬木,又名柏子樹(shù)、木子樹(shù)、臘子樹(shù),主要分布于我國(guó)黃河以南各省區(qū),包括云南、湖北、廣西、貴州等地[1]。作為我國(guó)最早被熟知和利用的經(jīng)濟(jì)樹(shù)種之一,烏桕既可用于園林綠化,也可作為提取天然黑色染料、桕油和類(lèi)可可脂的工業(yè)原料[2]。此外,烏桕還具有極高的藥用價(jià)值。作為常用苗藥,烏桕又名烏交晾,其根皮可治療水腫脹滿(mǎn)、二便不通、晚期血吸蟲(chóng)病；莖皮則用于治療熱經(jīng)引起的便秘、腳氣濕瘡或風(fēng)疹塊；種子主治年老體虛引起的便秘,正可謂全身是寶[3]?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究發(fā)現(xiàn),烏桕具有多種生理活性,如體外抑菌、抗炎、降低膽固醇水平等[2,4]?；瘜W(xué)成分研究表明,烏桕中主要含有三萜、二萜和酚酸類(lèi)成分[4-6]。其中酚酸類(lèi)成分,如黃酮類(lèi),被認(rèn)為是其抗菌活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ),并與其抗炎功效息息相關(guān)[4,7]。因此,為進(jìn)一步明確烏桕的活性成分,本項(xiàng)目對(duì)烏桕枝葉的酚酸類(lèi)成分進(jìn)行了研究,從中共分離鑒定出9個(gè)酚酸類(lèi)化合物：5,6,7,8-四甲氧基香豆素(1)、6,7,8-三甲氧基香豆素(2)、7-O-甲基東莨菪內(nèi)酯(3)、東莨菪內(nèi)酯(4)、3,3'-O-二甲基鞣花酸-4-O-α-L-鼠李糖苷(5)、3,3'-O-二甲基鞣花酸(6)、栗木酯苷(7)、3,3'-bisdemethylpinoresinol(8)和沒(méi)食子酸乙酯(9)。其中,化合物5、7、8為首次從烏桕中分離得到,現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與材料

核磁共振波譜儀(Bruker Avance 600,TMS為內(nèi)標(biāo))；ESI-MS質(zhì)譜儀(Waters Xevo TQ)；柱層析硅膠和GF254薄層層析硅膠(青島海洋化工有限公司)；Sephadex LH-20凝膠(GE Healthcare Bio-Sciences AB公司)；D101大孔樹(shù)脂(天津海光化工有限公司)；半制備型HPLC高效液相色譜儀(Perkin-Elmer 200)；C18HPLC色譜柱(Welch公司,10 mm×250 mm,5μm)。所有溶劑均為工業(yè)級(jí),使用前均經(jīng)過(guò)蒸餾處理。

試驗(yàn)用藥材于2016年7月采自貴州省貴陽(yáng)市開(kāi)陽(yáng)縣,經(jīng)貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院趙俊華教授鑒定為大戟科烏桕屬烏桕(Sapium sebiferum)的枝葉。樣品標(biāo)本(201607)存于貴陽(yáng)中醫(yī)學(xué)院苗醫(yī)藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

2 提取與分離

取干燥烏桕粗粉6.6 kg,常溫下以30 L 95%EtOH浸提3次,每次7天。提取完畢后,過(guò)濾,合并濾液,減壓條件下回收乙醇后得總浸膏449.7g。將總浸膏分散于2L水中,依次以石油醚(1.5 L×3)、氯仿(1.5 L×3)、乙酸乙酯(1.5 L×3)、正丁醇(1.5 L×3)進(jìn)行萃取,減壓條件下分別回收溶劑后得石油醚部位(P,19g)、氯仿部位(C,19g)、乙酸乙酯部位(E,21g)和正丁醇部位(B,115 g)。

氯仿部位經(jīng)硅膠柱層析,以石油醚-丙酮(1∶0→0∶1)梯度洗脫后得14個(gè)亞組分C1～C14。組分C4(1.68g)進(jìn)一步經(jīng)硅膠柱層析,以石油醚-丙酮(8∶1)洗脫后得到化合物1(191mg)。組分C6(2.53 g)先后經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析(氯仿-甲醇=1∶1)、硅膠柱層析和重結(jié)晶(氯仿-甲醇=1∶1)得到化合物2(90 mg)。組分C8(1.57 g)經(jīng)硅膠柱層析和重結(jié)晶(丙酮)得到化合物3(3 mg)。乙酸乙酯部位經(jīng)硅膠柱層析,以氯仿-甲醇(50∶1→0∶1)梯度洗脫得到6個(gè)組分E1～E6。組分E1進(jìn)一步經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇=20∶1)分離得到化合物5(5 mg)。組分E2反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析、凝膠柱層析和重結(jié)晶后,得化合物4(8 mg)。組分E3經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇=9∶1)分離得化合物9(53 mg)。組分E5經(jīng)硅膠柱層析(石油醚-丙酮=2∶1)分離得到化合物6(10 mg)。正丁醇部位經(jīng)大孔樹(shù)脂柱層析,以乙醇-水(0∶1→1∶0)梯度洗脫得4個(gè)亞組分B1～B4。B3組分反復(fù)經(jīng)硅膠柱層析、凝膠柱層析和半制備高效液相柱層析,從中分離得到化合物7(5 mg)和8(3 mg)。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：黃色固體；ESI-MS：m/z 267.1[M+H]+；1H-NMR(600 MHz,CDCl3)：δ7.93(1H,d,J=9.8Hz,H-4),6.29(1 H,d,J=9.8 Hz,H-3),4.04,3.97,3.96,3.89(each 3 H,s,4×OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[8]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為5,6,7,8-四甲氧基香豆素。

化合物2：淡黃色針狀結(jié)晶(氯仿/甲醇1：1)；ESI-MS：m/z 237.1[M+H]+；1H-NMR(600 MHz,CDCl3)：δ 7.59(1H,d,J=9.5 Hz,H-4),6.65(1H,s,H-5),6.28(1 H,d,J=9.3 Hz,H-3),3.98,3.94,3.85(each 3 H,s,3×OCH3)；13C-NMR(151 MHz,CDCl3)：δ160.5(C-2),150.2(C-8a),146.0(C-8),143.6(C-4),143.0(C-7),141.1(C-6),115.1(C-3),114.4(C-4a),103.9(C-5),61.8,61.5,56.3(each 1C,3×OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[9]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為6,7,8-三甲氧基香豆素。

化合物3：無(wú)色針晶(丙酮)；ESI-MS：m/z 229.1[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz,CDCl3)：δ7.61(1 H,d,J=9.5 Hz,H-4),6.85(1H,s,H-5),6.84(1 H,s,H-8),6.28(1 H,d,J=9.5 Hz,H-3),3.95,3.92(each 3H,s,2×OCH3)；13C-NMR(151 MHz,CDCl3)：δ161.5(C-2),153.0(C-7),150.2(C-8a),146.5(C-6),143.4(C-4),113.7(C-3),111.6(C-4a),108.2(C-5),100.2(C-8),56.5(2×OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[10]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為7-O-甲基東莨菪內(nèi)酯。

化合物4：無(wú)色針晶(甲醇)；ESI-MS：m/z 215.0[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz,CD3OD)：δ7.85(1H,d,J=9.2 Hz,H-4),7.10(1H,s,H-5),6.76(1H,s,H-8),6.19(1 H,d,J=9.4 Hz,H-3),3.90(3 H,s,OCH3)；13C-NMR(151 MHz,CD3OD)：δ164.1(C-2),153.4(C-7),151.5(C-8a),147.3(C-6),146.1(C-4),112.4(C-4a),112.3(C-3),109.9(C-5),104.0(C-8),56.8(6-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[11]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為東莨菪內(nèi)酯。

化合物5：黃色粉末；ESI-MS：m/z 499.1[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)：δ7.78(1 H,s,H-5'),7.51(1H,s,H-5),5.56(1H,s,H-1''),4.06(3H,s,3'-OCH3),4.05(3 H,s,3-OCH3),1.14(3H,d,J=6.1 Hz,H-6'')；13C-NMR(151 MHz,DMSO-d6)：δ158.9(C-7'),158.7(C-7),153.3(C-4'),150.8(C-4),142.4(C-3'),142.1(C-2'),141.5(C-2),140.7(C-3),114.6(C-1'),113.2(C-6'),112.5(C-6),112.2(C-5),112.1(C-5'),111.5(C-1),100.4(C-1''),72.1(C-4''),71.0(C-2''),70.8(C-3''),70.6(C-5''),62.1(3'-OCH3),61.5(3-OCH3),18.4(C-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[12]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為3,3'-O-二甲基鞣花酸-4-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物6：淡黃色粉末；ESI-MS：m/z 331.0[M+H]+；1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)：δ10.73(2H,s,4/4'-OH),7.49(2H,s,H-5/5'),4.04(6H,s,3/3'-OCH3)；13C-NMR(151 MHz,DMSO-d6)：δ158.5(C-7/7'),152.2(C-4/4'),141.2(C-2/2'),140.3(C-3/3'),112.1(C-6/6'),111.7(C-1/1'),111.5(C-5/5'),61.0(3/3'-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[12]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為3,3'-O-二甲基鞣花酸。

化合物7：無(wú)色粉末；ESI-MS：m/z 529.2[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)：δ6.69(1H,d,J=8.0 Hz,H-5'),6.60(1H,s,H-2),6.57(1H,d,J=2.0 Hz,H-6'),6.44(1H,s,dd,J=8.0,2.0 Hz,H-2'),6.07(1H,s,H-5),4.33(1H,d,J=1.7 Hz,H-1''),3.75(1 H,d,J=10.5 Hz,H-7'),3.69,3.67(each 3H,s,2×OCH3),3.54(1 H,d like,J=10.5 Hz,H-9a),3.15(1H,t like,J=9.4 Hz,H-9'b),2.70(2H,d,J=7.6 Hz,H-7),1.83(1H,m,H-8),1.74(1H,t like,J=10.1 Hz,H-8'),1.05(3H,d,J=6.2 Hz,H-6'')；13C-NMR(151 MHz,DMSO-d6)：δ147.9(C-3'),146.1(C-3),145.2(C-4'),144.6(C-4),136.8(C-1'),132.8(C-6),127.4(C-1),121.7(C-6'),116.5(C-5),115.8(C-5'),113.4(C-2'),112.3(C-2),101.2(C-1''),72.3(C-4''),71.3(C-2''),71.0(C-3''),69.2(C-5''),66.4(C-9'),63.4(C-9),56.1,56.0(each 1C,2×OCH3),46.8(C-7'),44.0(C-8'),38.7(C-8),32.7(C-7),18.3(C-6'')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[13-14]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為栗木酯苷。

化合 物 8：無(wú) 色 粉 末；ESI-MS：m/z 329.1[MH]-；1H-NMR(600 MHz,CD3OD)：δ6.80(2H,d,J=2.0 Hz,H-2/2'),6.74(2H,d,J=8.1 Hz,H-5/5'),6.69(1H,dd,J=8.1,2.1 Hz,H-6/6'),4.63(2H,d,J=4.1 Hz,H-7/7'),4.20(2 H,m,H-9/9'a),3.80(2 H,dd,J=9.1,3.3 Hz,H-9/9'b),3.09(2H,m,H-8/8')；13C-NMR(151 MHz,CD3OD)：δ146.4(C-3/3'),146.1(C-4/4'),133.9(C-1/1'),118.9(C-6/6'),116.3(C-5/5'),114.5(C-2/2'),87.5(C-7/7'),72.6(C-9/9'),55.3(C-8/8')。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[15]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為3,3'-bisdemethylpinoresinol。

化合物9：無(wú)色粉末；ESI-MS：m/z 221.0[M+Na]+；1H-NMR(600 MHz,DMSO-d6)：δ6.95(2 H,s,H-2/6),4.20(2H,q,J=7.1 Hz,H-8),1.26(3H,t,J=7.1 Hz,H-9)；13C-NMR(151 MHz,DMSO-d6)：δ165.9(C-7),145.6(C-3/5),138.4(C-4),119.7(C-1),108.5(C-2/6),60.1(C-8),14.3(C-9)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)報(bào)道[16]的數(shù)據(jù)基本一致,故鑒定為沒(méi)食子酸乙酯。

4 討論

本項(xiàng)目對(duì)烏桕枝葉部分的酚酸類(lèi)成分進(jìn)行了研究,從中共分離鑒定單體化合物9個(gè),其中,3,3'-O-二甲基鞣花酸-4-O-α-L-鼠李糖苷(5)、栗木酯苷(7)、3,3'-bisdemethylpinoresinol(8)均為首次從烏桕中分離得到。研究表明,酚酸類(lèi)成分被認(rèn)為是烏桕抗菌、滅螺等活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ),并與其抗炎功效息息相關(guān)[4,7]。因此,本項(xiàng)目的實(shí)施為進(jìn)一步明確烏桕的藥效物質(zhì)基礎(chǔ),并建立相應(yīng)的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了良好的基礎(chǔ),有助于烏桕資源經(jīng)濟(jì)價(jià)值的提升。