王 慧，楊 俊，杜麗飛，邱美珍，周望平，劉伯承，彭苗苗2，

（1.湖南美神育種有限公司，湖南 株洲 412000；2.湖南鑫廣安農牧股份有限公司，湖南 長沙 410129；3.湖南省畜牧獸醫(yī)研究所，湖南 長沙 410131）

口蹄疫（Foot-and-mouth Disease,FMD）是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性傳染病，主要侵害偶蹄動物，被國際獸醫(yī)局（OIE）列為A類傳染病[1]，我國也將該病列為一類傳染病。它具有很強的傳染性，可以通過空氣等多種媒介進行傳播，易感動物也可以通過消化道、呼吸道、人工授精、外傷接觸等多種方式感染病毒，發(fā)病率高達100%。目前，豬口蹄疫的流行毒株主要有O型、A型和亞洲Ⅰ型，而湖南省以O型和A型為主。因為口蹄疫各血清型間交叉保護性差，為減少免疫次數(shù)，降低勞動強度，采用O型和A型口蹄疫二聯(lián)苗進行免疫逐漸成為大多豬場的首選和趨勢。為合理安排口蹄疫二聯(lián)苗的免疫，本試驗于2017年3—12月選擇一家規(guī)模豬場，對仔豬O型和A型口蹄疫母源抗體進行跟蹤檢測，了解其消長規(guī)律的同時，還開展首免、二免及三次免疫后抗體水平評估，確定了最佳首免、二免和三免時間，按此免疫程序，能較好發(fā)揮口蹄疫二聯(lián)苗的免疫效果。該試驗結果，對于選擇O型和A型二聯(lián)苗作為口蹄疫免疫防控的豬場有很好的指導作用，為臨床使用提供了數(shù)據(jù)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗 口蹄疫O/A型二價滅活苗，生產廠家為某股份有限公司。

1.1.2 診斷試劑 口蹄疫病毒O型特異性抗體固相競爭ELISA（SPCE）檢測試劑盒，口蹄疫病毒A型特異性抗體固相競爭ELISA（SPCE）檢測試劑盒，生產廠家為倫巴第及艾米利亞-羅馬涅大區(qū)的動物疾病預防實驗室，批號為170404B。

1.1.3 試驗豬 選擇抗體水平合格并整齊度好的母豬所產仔豬，均為杜長大三元雜種豬，該場仔豬基本在21日齡斷奶。

1.2 方法

1.2.1 豬場免疫方案 仔豬：35日齡左右首免，60日齡左右二免，110日齡左右三免；經產公母豬：每年3、9、10、12月的每月下旬普免1次，劑量均為2毫升/頭。

1.2.2 血清采集 未免疫：選擇抗體水平合格的母豬所產仔豬，且仔豬未進行口蹄疫免疫，采集其0、7～9、14～16、21～23、28～30、35～37、42～44、49～51、56～58日齡仔豬全血；免疫后：隨機采集首免后30天（58～70日齡）、二免后 30天（90～100日齡）、二免后60天（120～130日齡）、三免后60天（150～160日齡）全血，分離血清置于-20℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 抗體檢測方法 按照抗體檢測試劑盒步驟進行操作分析。

1.2.4 試劑盒原理 ELISA微孔板預先包被有口蹄疫病毒O（A）型抗原，該抗原可被同源的特異性單抗（MAb）所捕獲，將適當稀釋的待檢血清與被捕獲的抗原進行孵育，存在于樣品中的特異性抗體最終與抗原結合，再加入辣根過氧化物酶標記的口蹄疫病毒O型（A型）MAb，其與同源抗原的反應將被預先結合到該抗原的陽性血清抗體所阻斷，而如果樣品為陰性的話，酶標單克隆抗體將可與口蹄疫病毒抗原結合。然后加TMB進行顯色反應后再加入終止液，測其OD值。

1.2.5 ELISA判定標準 豬口蹄疫病毒O型VPI合成肽ELISA抗體檢測試劑盒：1）試驗成立條件：陽性對照孔OD450值應介于0.9～2.5之間，陰性對照孔OD450值均應≤0.15；2）臨界值=陽性對照孔 OD450均值×0.17；3）待檢血清測定OD450值≥臨界值者判定為陽性；待檢血清測定OD450值＜臨界值者判定為陰性。

口蹄疫病毒O型特異性抗體固相競爭ELISA（SPCE）檢測試劑盒結果計算：阻斷率%=100-（血清OD/陰性對照平均OD值）×100；檢測有效性：陰性對照OD值必須≥1；陽性對照血清的阻斷率在1/10稀釋時應≥90%，在1/30稀釋時應＞50%；結果判定：阻斷率≥50%時為陽性，阻斷率＜50%時為陰性，陽性為免疫合格。

2 結果與分析

2.1 未免疫仔豬母源抗體水平

表1的檢測結果顯示，剛出生的仔豬沒有獲得母源抗體，口蹄疫O型抗體陽性率為0，吮吸母乳后開始獲得母源抗體，在7～9日齡時抗體陽性率達到77.8%，14～16日齡陽性率為94.4%，在3周齡期間抗體達到最高水平，陽性率為100%，后母源抗體開始逐漸降低，但直到35～37日齡抗體陽性率還有83.3%，42～44日齡抗體陽性率為72.2%，51日齡后抗體陽性率下降到50%以下，未達到農業(yè)部規(guī)定的免疫合格率≥70%，處于受感染風險狀態(tài)。

表1 免疫前仔豬O型口蹄疫母源抗體檢測情況

表2的檢測結果顯示，剛出生的仔豬口蹄疫A型抗體陽性率為0，吮乳后開始獲得母源抗體，但較O型口蹄疫抗體水平上升得慢一些，在7～9日齡時抗體陽性率才55.6%，14～16日齡陽性率為83.3%，在21日齡期間抗體達到最高水平，陽性率為88.9%，一直持續(xù)到30日齡，后母源抗體開始逐漸降低，35～37日齡抗體陽性率已經下降到66.7%，42～44日齡抗體陽性率為50%，50日齡后抗體水平下降到了38.9%，56～59日齡時母源抗體水平已經非常低了，抗體陽性率只有27.8%。

表2 免疫前仔豬A型口蹄疫母源抗體檢測情況

2.2 首免和二免后抗體水平

從表3和表4可以看出，本場選擇在35日齡左右進行首次免疫，免疫后30天即58～70日齡豬口蹄疫O型抗體陽性率才66.7%，離散度也較高，為36%；但豬口蹄疫A型抗體陽性率達到了94.4%，整齊度也較好。在二免后30天即90～100日齡檢測血清，豬口蹄疫O型抗體陽性率達到了100%，離散度只有8%；同時豬口蹄疫A型抗體陽性率仍處于高水平為94.4%，且離散度相較于第1次檢測有所降低。120～130日齡再次檢測時，兩種抗體水平均有所下降，但O型抗體水平仍處于很高的狀態(tài)，陽性率為94.4%，A型抗體水平下降到了77.8%?？赡苁怯捎诙蚊庖吆髸r間間隔稍長，而三次免疫后產生的抗體不到高峰值。最后在110日齡左右進行3次免疫，150～160日齡時兩種抗體陽性率均達到了100%，且阻斷率平均值均大于80%。確保斷奶肥育豬對豬口蹄疫O型和A型野毒的抵抗力。

表3 免疫后O型口蹄疫抗體水平情況

表4 免疫后A型口蹄疫抗體水平情況

3 討論

規(guī)模養(yǎng)豬場均是以群體免疫的理念進行疫苗免疫，在進行抗體監(jiān)測時，抽樣要根據(jù)豬場具體生產模式、檢測目的等設計合理的采樣方案，因此獲得的檢測數(shù)據(jù)也是代表一個群體的免疫狀態(tài)。本次采樣豬場嚴格執(zhí)行全進全出和分區(qū)飼養(yǎng)。豬群轉入下一個生產區(qū)時按同一欄或同一棟豬群同時轉入相應的欄舍飼養(yǎng)，豬的疫苗免疫也是按欄或棟為單位進行免疫。本研究采樣方案是按豬場實際生產流程進行，采集的每個日齡階段樣品為免疫時間是同一天的同一批豬，所以初生日齡有相應的跨度，按此采樣方式檢測的數(shù)據(jù)相應代表了該批次豬群整體抗體水平。因此得到的檢測結果更符合規(guī)?；i場生產流程和免疫接種操作方案，對免疫程序的制定有更現(xiàn)實的指導意義[2]。

由于豬胎盤是上皮絨毛膜類型，豬在胎兒時期不能從母體獲得母源抗體，新生仔豬通過吮吸初乳經消化道吸收獲得母源抗體[3]。母源抗體保護初生仔豬免受病原侵襲，在提高仔豬抗病力和成活率方面發(fā)揮重要作用。但它的存在對仔豬也有兩面性，既可以保護仔豬免受病原感染，同時較高的母源抗體又會降低疫苗免疫效果。從表1和表2可以看出，仔豬在出生吮乳后均獲得了較高的母源抗體，直到21日齡到30日齡時達到持續(xù)高峰，但相比較而言，仔豬獲得口蹄疫O型母源抗體較高，持續(xù)時間較長，50日齡左右抗體陽性率還有50%，而口蹄疫A型母源抗體在43日齡左右就降到了50%，由于免疫的是口蹄疫O/A二價滅活苗，為了避開口蹄疫O型母源抗體的干擾，又要考慮確保能得到有效抵抗A型口蹄疫野毒感染的能力，避免免疫空白，確定在45日齡左右進行首次免疫比較合理，同時將二免、三免時間相應推后。再結合表3和表4的檢測結果來看，58～70日齡口蹄疫O型抗體陽性率只有66.7%，而A型抗體陽性率達到了94.4，很大原因是O型高母源抗體水平干擾了疫苗免疫效果，同時印證了本場在35日齡首次免疫是不合理的。

此次檢測發(fā)現(xiàn)，該場經過3次免疫后肥育豬群口蹄疫O型和A型抗體水平都達到了很高的水平，在150日齡左右抗體陽性率均達到了100%，整齊度好，阻斷率平均值高，都在80%以上（表3和表4），說明采取3次免疫已經是相對安全的免疫次數(shù)了，足夠保護各個階段的肥育豬群抵抗外來病原的入侵。

根據(jù)相關報道[2，4-5]，不同豬場豬O型口蹄疫的首次免疫時間各有不同，從25日齡到60日齡不等。因此確定首免時間應根據(jù)自身豬場的免疫狀況及監(jiān)測數(shù)據(jù)而定，同時避開與其他疫苗的免疫時段，制定切合實際生產的免疫程序。