史劍飛，盧北玲，李 俏，毛 瑞，曹三成，寧遠(yuǎn)征

（1.西安市兒童醫(yī)院檢驗(yàn)科，西安 710003；2.西安市中醫(yī)醫(yī)院檢驗(yàn)科，西安 710021）

血清缺血修飾清蛋白（ischemia modified albumin，IMA）是正常人清蛋白發(fā)生氧化應(yīng)激自由基損傷后形成的產(chǎn)物。清蛋白在缺血缺氧或酸中毒等病理?xiàng)l件下氨基酸N-末端被修飾，導(dǎo)致其與重金屬離子（Cu2+，Ni2+和Co2+等）結(jié)合的能力下降，根據(jù)此原理檢測(cè)IMA的生成[1]。研究發(fā)現(xiàn)IMA在心肌梗死[2]，苯丙酮尿癥[3]，兒童哮喘[4]等疾病進(jìn)展中表達(dá)顯著升高。IMA已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床各種疾病的診斷評(píng)估與病情監(jiān)測(cè)，目前國(guó)內(nèi)外暫無(wú)統(tǒng)一的兒童IMA參考區(qū)間，多參考試劑說(shuō)明書(shū)且均為成人參考區(qū)間，因此建立西安地區(qū)兒童的參考區(qū)間尤為重要[5]。本實(shí)驗(yàn)室依據(jù)現(xiàn)有的檢測(cè)系統(tǒng)，結(jié)合統(tǒng)計(jì)學(xué)分析初步建立西安地區(qū)0～12歲健康兒童IMA的參考區(qū)間，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選取2019年7月1日～8月15日在西安市兒童醫(yī)院兒童保健科健康體檢兒童260例，其中按性別分為男性組140例，女性組120例；按年齡分為≤1歲組41例、1～3歲組56例和≥3歲組163例。收集上述健康兒童的血清進(jìn)行檢測(cè)。所有入選兒童無(wú)黃疸、心肌缺血性疾病、手術(shù)外傷以及用藥史等，肝功能、腎功能、心肌酶和血脂檢查均正常且血清標(biāo)本無(wú)溶血、乳糜和黃疸。

1.2 試劑與儀器 上海科華生物工程股份有限公司的IMA檢測(cè)試劑以及配套校準(zhǔn)品和質(zhì)控品，美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特AU5800全自動(dòng)生化分析儀，采用清蛋白-鈷結(jié)合法，根據(jù)IMA標(biāo)準(zhǔn)操作程序檢測(cè)IMA水平。

1.3 方法

1.3.1 檢測(cè)儀器性能驗(yàn)證：根據(jù)CLSI-EP9-A2文件，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室AU5800分析系統(tǒng)的批內(nèi)精密度、批間精密度、線性范圍和可報(bào)告范圍等進(jìn)行驗(yàn)證以滿足臨床檢測(cè)需求。

1.3.2 建立參考區(qū)間：①標(biāo)本采集與檢測(cè)：根據(jù)試劑說(shuō)明書(shū)要求，收集健康體檢兒童血清3ml上機(jī)檢測(cè)；②離群值剔除：采用Dixon法，將數(shù)據(jù)從小到大排列，可疑離群值與其相鄰值之差為D，R為所有數(shù)據(jù)最大值與最小值之差，若D/R≥1/3，則作為離群值剔除，以此類推；③初步分組：根據(jù)健康體檢兒童的性別和年齡進(jìn)行分組和統(tǒng)計(jì)分析；④參考區(qū)間驗(yàn)證：選取在西安市兒童醫(yī)院兒童保健科進(jìn)行健康體檢的男性和女性各20例，對(duì)本實(shí)驗(yàn)室建立的血清IMA參考區(qū)間進(jìn)行驗(yàn)證，若男性和女性兒童的血清IMA濃度值落在參考區(qū)間之外不超過(guò)2例，說(shuō)明建立的參考區(qū)間適用。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用GraphPad Prism5.0對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。選擇D檢驗(yàn)法（D'Agostino-Pearson法）判斷數(shù)據(jù)是否為正態(tài)分布，P＞0.1數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，若數(shù)據(jù)呈正態(tài)分布，采用95%參考值范圍±1.96s計(jì)算參考區(qū)間；若數(shù)據(jù)呈偏態(tài)分布，則采用單側(cè)95%分位數(shù)法（P95）計(jì)算參考區(qū)間。不同性別組間的比較采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)，不同年齡組間的比較采用Kruskal-Wallis H檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 檢測(cè)系統(tǒng)性能驗(yàn)證 檢測(cè)系統(tǒng)的批內(nèi)精密度、批間精密度、線性范圍和可報(bào)告范圍等各項(xiàng)指標(biāo)均符合試劑廠家性能參數(shù)要求。

2.2 離群值判斷和剔除 260例數(shù)據(jù)中最大值為79 U/ml，最小值為46 U/ml，則全矩R為33 U/ml，D為14 U/ml，D/R＞1/3，79 U/ml數(shù)據(jù)被剔除不可用。以此類推，共259例數(shù)據(jù)被納入。

2.3 血清IMA水平的數(shù)據(jù)分布 IMA總體數(shù)據(jù)判斷：P=0.002＜0.10，呈偏態(tài)分布；健康男性兒童數(shù)據(jù)判斷：P=0.002＜0.10，呈偏態(tài)分布；女性數(shù)據(jù)判斷：P=0.112＞0.10，呈正態(tài)分布。

2.4 血清IMA在不同性別間的數(shù)據(jù)比較 男性和女性兒童組間IMA結(jié)果表達(dá)（70.47±2.64U/ml vs 69.61±3.14U/ml），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（U=6 954, P=0.021＜0.05）。

2.5 血清IMA在不同年齡組間的數(shù)據(jù)比較 ≤1歲組（n=41，69.71±3.27U/ml）、1～3歲 組（n=56，70.66±2.77U/ml）和≥3歲組（n=162，69.97±2.87U/ml）間血清IMA結(jié)果分別比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（H=1.813，P=0.404）。

2.6 IMA參考區(qū)間的確立 以單側(cè)95%分位數(shù)法計(jì)算男性兒童血清IMA的參考區(qū)間：P95=74 U/ml；以95%參考值范圍±1.96s計(jì)算女性兒童血清IMA的參考區(qū)間：63.46～75.76U/ml。清蛋白-鈷結(jié)合檢測(cè)法檢測(cè)西安地區(qū)健康兒童血清IMA的參考區(qū)間：男性0～74.00 U/ml，女性0～75.76 U/ml。

2.7 參考區(qū)間的驗(yàn)證 選取西安地區(qū)健康體檢的男性和女性兒童各20例，其中19例男性兒童和20例女性兒童IMA數(shù)值位于參考區(qū)間內(nèi)，說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)室建立的參考區(qū)間適用于西安地區(qū)兒童。

3 討論

IMA在機(jī)體缺血發(fā)生的數(shù)分鐘內(nèi)急劇上升，在2～4 h內(nèi)達(dá)到峰值，并在6～12 h內(nèi)恢復(fù)到基線水平[6-7]。IMA是一種快速、簡(jiǎn)單、可靠、低成本且敏感的氧化應(yīng)激生物標(biāo)記物，常用于監(jiān)測(cè)機(jī)體不同環(huán)境條件下氧化應(yīng)激的程度[8]。主要優(yōu)點(diǎn)是在機(jī)體缺血的早期階段，血清IMA在組織發(fā)生壞死之前就已經(jīng)顯著升高。

目前國(guó)際上越來(lái)越多的研究發(fā)現(xiàn)IMA在兒童多種疾病的進(jìn)展過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。KESHAVARZI等[3]發(fā)現(xiàn)與健康對(duì)照組相比，50例2～16歲苯丙酮尿癥（phenylketonuria，PKU）患兒血清中IMA和丙二醛（malondialdehyde，MDA）水平顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001），且IMA升高與MDA升高呈顯著正相關(guān)，提示IMA可作為一個(gè)評(píng)價(jià)PKU氧化應(yīng)激損傷的生物標(biāo)記物。DOGRU等[4]通過(guò)隨訪26例平均年齡6歲左右的哮喘兒童，評(píng)估哮喘急性發(fā)作期和無(wú)癥狀期兒童的IMA水平，發(fā)現(xiàn)哮喘急性發(fā)作期和無(wú)癥狀哮喘穩(wěn)定期患兒IMA水平均顯著升高，且嚴(yán)重哮喘急性發(fā)作的患兒IMA表達(dá)水平顯著高于輕/中度哮喘患者（P＜0.01），IMA水平與哮喘急性發(fā)作的嚴(yán)重程度呈正相關(guān)，可反映機(jī)體氧化應(yīng)激損傷的嚴(yán)重程度。OZDEMIR等[9]研究先兆子癇（pre-eclampsia，PE）妊娠母親和其早產(chǎn)兒的血清IMA水平，發(fā)現(xiàn)PE組所有早產(chǎn)兒臍帶血中IMA顯著增加，對(duì)于評(píng)估早產(chǎn)兒發(fā)生氧化應(yīng)激損傷的診斷及評(píng)估有著重要的價(jià)值。OZGUNAY等[10]研究小兒腹腔鏡手術(shù)中應(yīng)用不同腹內(nèi)壓（intraabdominal pressure，IAP）后患兒血清IMA水平的變化，發(fā)現(xiàn)12 mmHg IAP加劇IMA的水平升高，對(duì)于評(píng)估小兒外科手術(shù)中不同程度IAP水平對(duì)兒童機(jī)體氧化應(yīng)激損傷程度提供了很好的參考。馬利軍等[11]發(fā)現(xiàn)缺血性腦血管病患者中IMA水平顯著升高，通過(guò)聯(lián)合脂蛋白相關(guān)磷脂酶A2（Lp-PLA2）和低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）以及經(jīng)顱多普勒超聲（TCD）檢測(cè)，可對(duì)缺血性腦疾病的高危人群進(jìn)行早期預(yù)測(cè)、診斷和干預(yù)，這為今后研究?jī)和毖阅X疾病的進(jìn)展提供了切入點(diǎn)和參考依據(jù)。

IMA已經(jīng)被廣泛應(yīng)用于臨床兒童各種疾病的病情評(píng)估以及預(yù)后監(jiān)測(cè)中，其潛在的價(jià)值正逐漸被發(fā)現(xiàn)。與試劑盒給定的參考區(qū)間（0～78 U/ml）相比，本實(shí)驗(yàn)建立的西安地區(qū)健康兒童IMA參考區(qū)間（男性0～74.00 U/ml，女性0～75.76 U/ml）均低于其水平，適用于本地區(qū)兒童，更好服務(wù)于本地區(qū)兒童臨床疾病氧化應(yīng)激損傷的診斷及評(píng)估。由于新生兒標(biāo)本的數(shù)據(jù)獲取有限，本實(shí)驗(yàn)未將新生兒納入本次研究。