趙廣宇，劉元水，路春暉，孫玉露，張學(xué)德，趙文華，魏有國

乳腺癌是世界上女性發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一[1]，目前已知乳腺癌發(fā)病可能與家族史、乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene 1，BRCA1)突變、初潮早和絕經(jīng)晚、生育史、口服避孕藥以及激素替代療法相關(guān)[2]，也有研究表明乳腺癌發(fā)生也可能與基因多態(tài)性有關(guān)[3-4]。

腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧是惡性腫瘤的的主要特征，在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中起到重要作用[5]。缺氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor-1，HIF-1)是腫瘤細(xì)胞適應(yīng)缺氧過程中重要的轉(zhuǎn)錄因子，許多研究已經(jīng)證明HIF-1能夠調(diào)節(jié)多種細(xì)胞因子從而影響血管生成、能量代謝等生物學(xué)過程，從而在惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移中起到重要作用[6]。HIF-1是一個異質(zhì)二聚體，包括α和β兩個亞基，HIF-1β亞基是HIF-1的結(jié)構(gòu)亞基，持續(xù)表達(dá)，HIF-1α是HIF-1的功能性亞基，通過氧濃度調(diào)節(jié)表達(dá)影響HIF-1的活性，在常氧狀態(tài)下被降解，而在缺氧狀態(tài)下則穩(wěn)定存在。目前許多研究表明HIF-1α在許多腫瘤中高表達(dá)，如乳腺癌[7]、食管癌[8]以及非小細(xì)胞肺癌[9-10]等。

基因多態(tài)性造成生物體之間的多樣性，可能與多種疾病包括惡性腫瘤易感性有關(guān)。目前研究表明HIF-1α也存在2種常見的單核苷酸多態(tài)性(single nucleotide polymorphisms，SNPs)，分別為HIF-1 C1772T和G1790A，這2個SNPs無論是常氧還是缺氧狀態(tài)下均可引起HIF-1α的轉(zhuǎn)錄活性增高，而且導(dǎo)致微血管密度增加，可能導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展[11]。目前已經(jīng)有多項(xiàng)研究探討了HIF-1α基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生的關(guān)系，但是這些研究結(jié)果并不完全一致，考慮可能與樣本量小或偏倚有關(guān)。雖然也有少量研究對HIF-1α的基因多態(tài)性和乳腺癌發(fā)病風(fēng)險進(jìn)行了研究，但是這些研究納入的研究和病例數(shù)較少[12]。本研究采用Meta分析方法全面的對既往相關(guān)研究進(jìn)行系統(tǒng)評價，進(jìn)一步探討HIF-1α基因多態(tài)性與乳腺癌易感性之間的關(guān)系。

1 材料和方法

1.1 資料來源和文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn) 以(HIF-1alpha OR hypoxia inducible factor-1alpha) AND breast AND (cancer OR tumor OR carcinoma) AND (polymorphisms OR SNP OR mutation OR variant)檢索式檢索PubMed數(shù)據(jù)庫和Cochrane Library，以相應(yīng)中文檢索式檢索在中國期刊全文數(shù)據(jù)庫、萬方數(shù)據(jù)庫(時間截至2017/9/28)等國內(nèi)外發(fā)表的關(guān)于HIF-1α基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險的相關(guān)文獻(xiàn)，瀏覽參考文獻(xiàn)以及相關(guān)文獻(xiàn)綜述，并補(bǔ)充相關(guān)文獻(xiàn)中所引用的研究。文獻(xiàn)納入標(biāo)準(zhǔn)：①HIF-1α C1772T和G1790A基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險的獨(dú)立病例對照研究；②原始資料完整；③對照組基因型分布不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律的研究也納入系統(tǒng)評價，但是在敏感性分析中加以排除；④對于樣本人群相同而發(fā)表的文獻(xiàn)多于1篇的研究只保留其中質(zhì)量最好的研究。

1.2 文獻(xiàn)資料提取 由2名研究者根據(jù)上述入選標(biāo)準(zhǔn)對可用文獻(xiàn)進(jìn)行資料提?。浩诳?、第一作者姓名，發(fā)表的年份，研究人種、國家，病例組和對照組的人群來源，樣本數(shù)目，病例組和對照組C1772T和G1790A基因型人數(shù)，檢測方法。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用Revman 5.0軟件進(jìn)行Meta分析，采用卡方檢驗(yàn)Hardy-Weinberg遺傳平衡，P≤0.05考慮不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。將HIF-1α C1772T和 G1790A基因多態(tài)性與乳腺癌易感性的關(guān)聯(lián)采用優(yōu)勢比(odds ratio，OR)及其95%可信區(qū)間(95%confidence interval,95%CI)評價。各研究間的異質(zhì)性采用Q檢驗(yàn)(P≤0.05考慮存在異質(zhì)性)和I2檢驗(yàn)評價(I2>50%考慮異質(zhì)性明顯)。當(dāng)研究間存在異質(zhì)性時，采用隨機(jī)效應(yīng)模型分析，無異質(zhì)性則采用固定效應(yīng)模型分析。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)基本情況 本研究共檢索出英文文獻(xiàn)72篇，未檢索出中文文獻(xiàn)，閱讀文獻(xiàn)題目和摘要及瀏覽全文后共篩選出9篇文獻(xiàn)[13-21](圖1)，9篇文獻(xiàn)均研究了C1772T基因多態(tài)性與乳腺癌關(guān)系，乳腺癌患者2 787例，對照組2 686例；關(guān)于C1772T基因多態(tài)性與乳腺癌關(guān)系的研究，其中有3篇文獻(xiàn)不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。4篇研究了G1790A基因多態(tài)性與乳腺癌關(guān)系，乳腺癌患者796例，對照組651例。而關(guān)于G1790A基因多態(tài)性與乳腺癌關(guān)系的研究均符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律(見表1)。

圖1 文獻(xiàn)篩選流程圖

第一作者發(fā)表年份國家基因型病例數(shù)對照數(shù)對照組Hardy-Weinberg檢驗(yàn)Meka[13]2015印度C1772T3483200.10Sharma[14]2014印度C1772TG1790A200200<0.051.0Huang[15]2014中國臺灣C1772T96120<0.01Ribeiro[16]2013葡萄牙C1772TG1790A9674<0.011.0Zagouri[17]2012希臘C1772T1131240.41Naidu[18]2009馬來西亞C1772TG1790A4102750.920.90Apaydin[19]2008土耳其C1772TG1790A1021020.410.83Kim[20]2008韓國C1772TG1790A901020.640.06Lee[21]2008韓國C1772T133213690.25

2.2 Meta分析結(jié)果

2.2.1 HIF-1α C1772T基因多態(tài)性與乳腺癌易感性 HIF-1α C1772T基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險的各項(xiàng)研究之間存在異質(zhì)性。本研究遂采用隨機(jī)效應(yīng)模型分別進(jìn)行分析，C1772T基因顯性模型(TT+CT vs CC)、隱性模型(TT vs CT+CC)(圖2)、等位基因模型(T vs C)以及TT vs CC均與乳腺癌發(fā)生無明顯相關(guān)性。OR值分別為1.31(0.89～1.93)，P=0.17；2.09(0.84～5.16)，P=0.11；1.35(0.91～2.00)，P=0.14；2.19(0.82～5.87)，P=0.12(表2)。

2.2.2 HIF-1α G1790A基因多態(tài)性與乳腺癌易感性 HIF-1α G1790A基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險各研究間無明顯異質(zhì)性，按照固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析，G1790A基因顯性模型(AA+GA vs GG)、隱性模型(AA vs GA+GG)、等位基因模型(A vs G)及AA vs GG也未發(fā)現(xiàn)與乳腺癌有相關(guān)性，OR值分別為1.05(0.72～1.53)，P=0.79；1.41(0.37～5.37)，P=0.61；1.07(0.76～1.52)，P=0.70；1.44(0.38～5.44)，P=0.59(表2)。

2.2.3 敏感性分析 排除不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律的研究進(jìn)行敏感性分析。結(jié)果表明：C1772T基因隱性模型(TT vs CT+CC)以及TT vs CC可能與乳腺癌易感性有關(guān)，OR值分別為2.61(1.32～5.15)，P=0.006；2.62(1.33～5.16)，P=0.005，其余基因模型的研究結(jié)果無明顯變化，也與乳腺癌發(fā)生無明顯相關(guān)性(表3)。此外，對G1790A基因多態(tài)性研究進(jìn)行敏感分析，通過逐一去除的方法進(jìn)行研究，未發(fā)現(xiàn)對總體分析結(jié)果有明顯影響。

圖2 HIF-1α C1772T基因隱性模型(TT vs CT+CC)森林圖

基因多態(tài)性比較Q檢驗(yàn)P值I2分析模型OR(95%CI)P值C1772T TT+CT vs CC<0.000 0181%Random1.31(0.89～1.93)0.17 TT vs CT+CC0.00764%Random2.09(0.84～5.16)0.11 T vs C<0.000 0186%Random1.35(0.91～2.00)0.14 TTvsCC0.00269%Random2.19(0.82～5.87)0.12G1790A AA+GA vs GG0.0860%Fixed1.05(0.72～1.53)0.79 AA vs GA+GG0.360%Fixed1.41(0.37～5.37)0.61 A vs G0.0864%Fixed1.07(0.76～1.52)0.70 AA vs GG0.340%Fixed1.44(0.38～5.44)0.59

表3 HIF-1α C1772T敏感性分析

2.2.4 偏倚性評價 本研究C1772T基因多態(tài)性的漏斗圖基本對稱，表明研究基本無偏移。G1790A基因多態(tài)性研究太少，僅4篇，存在偏倚。

3 討論

研究表明HIF-1在惡性腫瘤發(fā)生、適應(yīng)缺氧、血管生成等多種惡性生物學(xué)進(jìn)程中起到重要作用。HIF-1不僅在卵巢癌[22]、胃癌[23]等多種腫瘤中高表達(dá)，也在乳腺癌高表達(dá)，與乳腺癌發(fā)生、進(jìn)展、預(yù)后差密切相關(guān)[24]。目前研究表明，HIF高表達(dá)的患者可能對化療抵抗，從而導(dǎo)致治療失敗，患者預(yù)后差，針對HIF的抑制劑已經(jīng)成為癌癥治療熱點(diǎn)，并取得了一定的進(jìn)展[25]。

目前研究表明，缺氧誘導(dǎo)因子基因多態(tài)性可能與許多腫瘤發(fā)生有關(guān)[26]。Xu等[27]的一項(xiàng)Meta分析對缺氧誘導(dǎo)因子基因多態(tài)性與消化道腫瘤易感性進(jìn)行了評價，表明HIF-1α C1772T基因多態(tài)性增加了胃腸道腫瘤發(fā)病風(fēng)險。關(guān)于缺氧誘導(dǎo)因子基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生的研究也有報道。Huang等[15]研究表明HIF-1α C1772T基因多態(tài)性增加了乳腺癌發(fā)生的風(fēng)險，Kim等[20]的研究也得出了相似的結(jié)論，但是另外的研究則未發(fā)現(xiàn)二者之間存在相關(guān)性[14,16]，鑒于研究之間存在不一致性，我們對此進(jìn)行了綜合評價。

在本研究中，我們分別對HIF-1α C1772T和G1790A基因多態(tài)性和乳腺癌的危險性進(jìn)行了分析，研究表明HIF-1α C1772T基因多態(tài)性各個研究中存在異質(zhì)性，遂采用隨機(jī)效應(yīng)模型進(jìn)行了分析，結(jié)果提示HIF-1α C1772T基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生無明顯相關(guān)性。2009年的一項(xiàng)研究中納入了3篇文獻(xiàn)，對HIF-1α C1772T基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)病風(fēng)險進(jìn)行了系統(tǒng)評價，也未發(fā)現(xiàn)二者之間存在相關(guān)性[27]。此外，另一Meta分析納入6篇相關(guān)文獻(xiàn)也未能發(fā)現(xiàn)HIF-1α C1772T基因多態(tài)性與所有人群乳腺癌發(fā)病風(fēng)險之間存在相關(guān)性[12]。我們的研究雖然納入了9篇相關(guān)文獻(xiàn)，但是也未能發(fā)現(xiàn)二者之間存在相關(guān)性。G1790A基因多態(tài)性研究的各研究間無明顯異質(zhì)性，按照固定效應(yīng)模型進(jìn)行分析，也未發(fā)現(xiàn)G1790A基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生的相關(guān)性。但是在之前的一項(xiàng)納入2篇相關(guān)文獻(xiàn)的研究，表明顯性模型降低了乳腺癌發(fā)生風(fēng)險[27]，但是我們增加研究后發(fā)現(xiàn)二者之間無明顯相關(guān)性。

在C1772T基因多態(tài)性納入的研究中，本研究發(fā)現(xiàn)3篇文獻(xiàn)的對照組不符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律，考慮到納入的研究較少，因此在系統(tǒng)評價中未排除，但是考慮到這部分文獻(xiàn)可能對結(jié)果造成一定的影響，在下一步的分析中排除了這3篇文獻(xiàn)進(jìn)行了敏感性分析，結(jié)果表明各研究間異質(zhì)性減少，C1772T基因TT型與(CT+CC)型患者相比，乳腺癌發(fā)病風(fēng)險明顯增加，達(dá)到了2.61倍(1.32～5.15，P=0.006)，TT 型與CC型相比，乳腺癌發(fā)病風(fēng)險也明顯增加，但是CC型與(CT+TT)型以及T攜帶者與C攜帶者相比，乳腺癌發(fā)病風(fēng)險無明顯變化。說明Hardy-Weinberg遺傳平衡的差異可能造成了研究之間的異質(zhì)性。此外，我們對G1790A基因多態(tài)性研究的敏感分析，通過逐一去除的方法進(jìn)行研究，未發(fā)現(xiàn)對總體分析結(jié)果有明顯影響。本研究全面對已經(jīng)發(fā)表的相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行分析，得出了證據(jù)充分的結(jié)果，增強(qiáng)了分析效能；并且研究偏倚很小，結(jié)果基本可靠。

本研究的局限性：①納入研究的病例組和對照組的人群特征可能存在差異，目前已知BRCA1突變、初潮早和絕經(jīng)晚、生育史、口服避孕藥等因素可能與乳腺癌發(fā)生有關(guān)，而納入的人群中這些乳腺癌易感因素可能存在差別，這會導(dǎo)致研究結(jié)果有所偏差；②在對照組人群中，有些研究選用健康人群作為對照，而有些人群僅選擇了非癌癥患者作為對照，這也可能導(dǎo)致研究結(jié)果存在偏差；③本研究較前研究增加了病例數(shù)，但是也僅納入了9篇研究，病例數(shù)仍較少，而且對于G1790A基因多態(tài)性的研究僅有4篇相關(guān)文獻(xiàn)，這都可能影響結(jié)果的可靠性。

雖然乳腺癌發(fā)生與遺傳因素有關(guān)，但是內(nèi)分泌因素、環(huán)境因素以及理化因素等均會對乳腺癌發(fā)生產(chǎn)生一定的影響，在研究基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生時，必須也要考慮到各種危險因素的影響，因此需要更加嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)設(shè)計、更大規(guī)模的研究來證實(shí)基因多態(tài)性與乳腺癌發(fā)生的關(guān)系，以期在基因角度為乳腺癌的發(fā)病機(jī)制以及疾病預(yù)防提供理論依據(jù)。