李傲然,胡倬瑜,楊 寧,孫 郡,何靜仁,何 毅*
(武漢輕工大學(xué) 食品科學(xué)與工程學(xué)院 湖北省農(nóng)產(chǎn)品加工與轉(zhuǎn)化重點實驗室,大宗糧油精深加工省部共建教育部重點實驗室,湖北 武漢 430023)
銀杏(Ginkgo biloba)又名公孫樹。其果實一般為白色,有“白果”之稱,具有長梗,外種皮肉質(zhì),味甘略苦。銀杏果實中富含銀杏內(nèi)酯、黃酮、多酚和銀杏酸等藥用成分。DEKOSKY S T等[1]研究了銀杏在改善記憶和認(rèn)知方面的相關(guān)應(yīng)用,其還具有益氣溫肺、止喘咳,抗衰老、保護(hù)肝臟等功效[2-3]。
大麥營養(yǎng)成分豐富、全面,含有高纖維、高維生素、低脂肪、低糖、多種微量元素以及β-葡聚糖、α-生育三烯醇、黃酮、γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)、抗性淀粉等多種功能成分[4]。大麥中纖維具有低血糖指數(shù),對糖尿病患者日常生理功能維持有益[5]。AHMEDRM等[6]研究發(fā)現(xiàn),在用雙歧桿菌(Bifidobacterium)和嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)發(fā)酵的酸奶中添加大麥β-葡聚糖可以有效降低血漿和肝臟中膽固醇的水平,同時糞便中膽汁酸的排泄增加。IDEHEN E等[7]也研究證明,大麥中富含植物化學(xué)物質(zhì),具有與癌癥、心血管疾病、糖尿病和肥胖等常見營養(yǎng)相關(guān)疾病作斗爭的潛力。
以銀杏果為原料開發(fā)的產(chǎn)品眾多,在釀酒方面,由銀杏果發(fā)酵而成的純天然有保健功能的銀杏酒也早已進(jìn)入市場[8]。銀杏果作為優(yōu)質(zhì)的釀酒原料,大多都是作為單一的原料用來釀酒。本研究選用銀杏和大麥為原料釀造一種口感良好、營養(yǎng)豐富的銀杏大麥酒,采用響應(yīng)面法研究其最佳釀造工藝和釀造過程中總酸、總酚、總黃酮含量的變化規(guī)律,然后分析銀杏大麥酒的抗氧化活性。為進(jìn)一步開發(fā)兼具銀杏與大麥復(fù)合香味、營養(yǎng)豐富、保健功效的銀杏大麥酒提供參考依據(jù)。
銀杏果:產(chǎn)自隨州市洛陽鎮(zhèn);大麥:市售;釀酒高活性干酵母:廣西丹寶利酵母有限公司;安琪高活性酵母:安琪酵母股份有限公司;福林酚:北京索萊寶科技有限公司;蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品(純度≥98%):上海源葉生物科技有限公司;總抗氧化能力檢測試劑盒(ABTS法):碧云天生物技術(shù)公司;沒食子酸(標(biāo)準(zhǔn)品)、硫酸亞鐵、水楊酸、酚酞、苯酚等(均為分析純):國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。
STARTER3100 pH計:普蘭德(上海)貿(mào)易有限公司;WIATC手持折光儀:上海精密科學(xué)儀器有限公司;AL204型電子天平:梅特勒托利多儀器有限公司;SpectraMax M2e酶標(biāo)儀:美國Molecular Devices公司;Lambda25紫外分光光度計:美國PERKINELMER公司;7890A/5957C氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀:美國Aglient公司。
1.3.2 菌種的活化
稱取適量干酵母,將其投入到10倍35~40℃蒸餾水中,復(fù)水15 min,于28℃恒溫培養(yǎng)箱中活化2 h。
1.3.3 酵母菌的篩選
將經(jīng)處理后(大麥粉碎后與打漿好的銀杏果混合后糊化、糖化)糖度為20°Bx銀杏大麥汁,調(diào)節(jié)pH至3.6,然后分別加入0.25%安琪高活性干酵母、廣西丹寶利酵母、混合酵母(安琪高活性酵母和廣西丹寶利酵按1∶1比例混合),在26℃條件下靜置發(fā)酵13 d,測定其酒精度和糖度,以確定最佳酵母菌。
1.3.4 銀杏大麥酒發(fā)酵條件優(yōu)化單因素試驗
(1)發(fā)酵時間的確定
將經(jīng)處理后糖度為20°Bx銀杏大麥汁,調(diào)節(jié)pH值至3.6,然后添加0.25%高活性干酵母,在26℃發(fā)酵15 d,于第1、3、5、7、9、11、13、15天測定酒液中的酒精度和糖度。
(2)初始糖度的確定
將經(jīng)處理的銀杏大麥汁pH值調(diào)至3.6,然后添加0.25%高活性干酵母,調(diào)節(jié)銀杏大麥汁糖度分別至18°Bx、20°Bx、22 °Bx、24 °Bx、26 °Bx,在26 ℃分別發(fā)酵13 d,測定各酒液的酒精度和糖度。
(3)接種量的確定
將經(jīng)處理后糖度為20°Bx銀杏大麥汁,調(diào)節(jié)pH值至3.6,然后分別添加0.10%、0.25%、0.40%、0.55%活性干酵母,在26℃發(fā)酵13 d,測定各酒液的酒精度和糖度。
(4)初始pH值的確定
將經(jīng)處理后糖度為20°Bx銀杏大麥汁,調(diào)節(jié)pH值分別至2.4、2.8、3.2、3.6、4.0,然后添加0.25%活性干酵母,在26 ℃分別發(fā)酵13 d,測定各酒液的酒精度和糖度。
(5)發(fā)酵溫度的確定
將經(jīng)處理后糖度為20°Bx銀杏大麥汁,調(diào)節(jié)pH值至3.6,然后添加0.25%高活性干酵母,分別在18℃、22℃、26℃、30℃、34℃培養(yǎng)箱中發(fā)酵13 d,測定各酒液的酒精度和糖度。
1.3.5 銀杏大麥酒發(fā)酵條件優(yōu)化的響應(yīng)面試驗
在單因素試驗分析結(jié)果基礎(chǔ)上,采用Box-Behnken響應(yīng)面設(shè)計方法,選擇初始糖度(A)、接種量(B)、初始pH值(C)和發(fā)酵溫度(D)這4個影響較大的因素,設(shè)計4因素3水平響應(yīng)面試驗,以酒精度(Y)為響應(yīng)值進(jìn)行優(yōu)化,因素水平設(shè)計見表1。
表1 大麥酒發(fā)酵條件優(yōu)化Box-Behnken試驗因素與水平Table 1 Factors and levels of Box-Behnken experiments for ginkgo-barley wine fermentation conditions optimization
1.3.6 理化指標(biāo)的測定
pH值采用STARTER3100 pH計測定;可溶性固形物(糖度):采用手持折光儀測定,所得數(shù)值均校正為20℃條件下的數(shù)值;總酸含量:采用GB/T 15038—2006《葡萄酒、果酒通用分析方法》中指示劑法測定[9];酒精度:采用分光光度計法測定[10-11]。
總黃酮含量的測定:吸取質(zhì)量濃度為0.174 561 mg/mL蘆丁標(biāo)準(zhǔn)液0 mL、1 mL、2 mL、3 mL、4 mL、5 mL于10 mL的容量瓶中,分別加入5%的NaNO2溶液0.3 mL還原6 min;加入10%的Al(NO3)3溶液0.3 mL絡(luò)合6 min;加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為4%(1 mol/L)的NaOH溶液4 mL;最后用體積分?jǐn)?shù)60%乙醇定容,搖勻,顯色20 min。在波長506 nm條件下測定吸光度值,繪制蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線,得溶液吸光度值A(chǔ)與蘆丁質(zhì)量濃度C(mg/mL)的回歸方程:A=0.012 7C+0.093 3(R2=0.999 6)。再利用紫外分光光度計測定待測液的吸光度值,然后利用回歸直線方程得出所取樣品液中的總黃酮含量[12]。
總酚含量的測定:采用Folin-Ciocalteu法[13]。精確稱取干燥恒質(zhì)量的沒食子酸10.0 mg,溶解后加水定容到100 mL,配成0.1 mg/mL的沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。準(zhǔn)確吸取沒食子酸標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.1 mL、0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL、1.0 mL,于10 mL刻度試管中,加5.0 mL蒸餾水,再加0.5 mL福林酚試劑,搖勻1 min后再加入1.5 mL 20%碳酸鈉溶液,于室溫反應(yīng)2 h。在波長760 nm處測定標(biāo)準(zhǔn)溶液的吸光度值,得溶液吸光度值A(chǔ)與沒食子酸質(zhì)量濃度C(mg/mL)的回歸方程:A=9.916C+0.003(R2=0.9997)。
準(zhǔn)確量取樣品0.1 mL于10 mL刻度試管中,按標(biāo)準(zhǔn)曲線制備操作步驟于760 nm波長處進(jìn)行吸光度值的測定(樣液如有沉淀,應(yīng)過濾后測定)。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性方程計算總酚含量。
1.3.7 抗氧化能力測定
(1)羥基自由基清除能力的測定
參照文獻(xiàn)[14]采用水楊酸法,于波長510 nm處測定吸光度值。羥基自由基清除率按下式計算:
式中:A0為空白對照的吸光度值;A1為無水楊酸時樣品的吸光度值;A2為加入樣品后的吸光度值。
(2)DPPH自由基清除能力的測定
參照文獻(xiàn)[15-16]采用DPPH·法測定清除DPPH·能力。在波長517 nm下測定吸光度值。DPPH·清除率按下式計算:
式中:A0為DPPH·與無水乙醇混合液的吸光度值;A1為無水乙醇調(diào)零,加入樣品溶液后的吸光度;A2為樣品溶液與無水乙醇混合液的吸光度值。
(3)ABTS法測定總抗氧化能力
采用ABTS法測定總抗氧化能力。在波長735 nm下測定各種濃度的Trolox標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度值。得到并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(A=-0.778 9C+1.224 5(R2=0.999 3))計算出樣品的總抗氧化能力[17]。
1.3.8 數(shù)據(jù)處理
采用SPSS19.0軟件,對試驗結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計分析,統(tǒng)計方法采用方差分析進(jìn)行各試驗組間的顯著性檢驗。
表2 不同酵母對酒精發(fā)酵的影響Table 2 Effect of different yeasts on alcoholic fermentation
不同菌種對酒精發(fā)酵的影響見表2。在廣西丹寶利酵母發(fā)酵時,發(fā)酵液中酒精度最高,由此可知,廣西丹寶利酵母的發(fā)酵能力和速率優(yōu)于安琪高活性酵母和混合酵母。此外,在使用廣西丹寶利酵母發(fā)酵時,消耗了相對較少的糖分卻產(chǎn)生較高的酒精度,綜合考慮選擇廣西丹寶利酵母作為銀杏大麥酒的發(fā)酵用酵母。
2.2.1 發(fā)酵時間對銀杏大麥酒酒精度和糖度的影響
發(fā)酵時間對酒精發(fā)酵影響的結(jié)果見圖1。發(fā)酵初期的1~7 d,發(fā)酵液中的糖含量急劇降低,同時發(fā)酵液的酒精度上升至10%vol左右,發(fā)酵至13 d時酒精度達(dá)到最大值(11.3%vol)。后續(xù)發(fā)酵銀杏大麥酒的酒精度不變,發(fā)酵時間過長,對果酒的品質(zhì)風(fēng)味會有所影響,綜合考慮,發(fā)酵時間定為13 d。
圖1 發(fā)酵時間對酒精發(fā)酵的影響Fig.1 Effect of fermentation time on alcoholic fermentation
2.2.2 初始糖度對銀杏大麥酒酒精度和糖度的影響
初始糖度對酒精發(fā)酵影響的結(jié)果見圖2。由圖2可知,經(jīng)同時段發(fā)酵,發(fā)酵液中酒精度隨著初始糖度的增加呈先增后減的趨勢。因為糖既是酵母菌的生長繁殖的“必需品”,也是其代謝合成酒精等物質(zhì)的原料。因此,隨著發(fā)酵液中初始糖度的增加,酵母菌的生長和代謝速率都加快,酒精產(chǎn)生量增加,但糖度過高則會抑制酵母菌生長繁殖和代謝。綜合考慮,確定22°Bx為銀杏大麥酒發(fā)酵的最佳初始糖度。
圖2 初始糖度對酒精發(fā)酵的影響Fig.2 Effect of initial sugar content on alcoholic fermentation
2.2.3 酵母菌接種量對銀杏大麥酒酒精度和糖度的影響
接種量對酒精發(fā)酵影響的結(jié)果見圖3。由圖3可知,隨著接種量的增加,發(fā)酵液中糖度持續(xù)降低,酒精度呈先增后減趨勢。結(jié)果表明在一定范圍內(nèi),釀酒酵母接種量適當(dāng)增加有利于發(fā)酵過程的快速啟動和代謝產(chǎn)物生成,有利于酒精的生成,減少污染雜菌的機(jī)會[18]。綜合考慮,確定0.25%為銀杏大麥酒發(fā)酵的最佳酵母菌接種量。
圖3 接種量對酒精發(fā)酵的影響Fig.3 Effect of inoculum on alcoholic fermentation
2.2.4 初始pH值對銀杏大麥酒酒精度和糖度的影響
由圖4可知,從pH值2.4開始,隨著發(fā)酵液初始pH值逐漸增大,銀杏大麥酒的酒精度呈先增后減趨勢,當(dāng)發(fā)酵液初始pH值為3.6時,酒體中酒精度達(dá)到最高。出現(xiàn)變化主要原因是酵母有適合其生長、繁殖和代謝的pH范圍。當(dāng)pH過低或過高時,酵母的生長和繁殖受到抑制,代謝活性降低,產(chǎn)生的酒精量減少。因此,確定pH值3.6為銀杏大麥酒釀造的最佳初始pH值。
圖5 發(fā)酵溫度對酒精發(fā)酵的影響Fig.5 Effect of fermentation temperature on alcoholic fermentation
2.3.1 響應(yīng)面設(shè)計及結(jié)果
將初始糖度、接種量、初始pH值和發(fā)酵溫度作為評價因素,以銀杏大麥酒的酒精度(Y)為響應(yīng)值,共設(shè)29個試驗點,銀杏大麥酒的響應(yīng)曲面試驗設(shè)計方案與試驗結(jié)果如表3所示。利用Design-Expert軟件對表3中試驗數(shù)據(jù)進(jìn)行多元回歸擬合,得到酒精度(Y)對自變量A(初始糖度)、B(接種量)、C(初始pH值)、D(發(fā)酵溫度)的回歸方程[18]:
圖4 初始pH值對酒精發(fā)酵的影響Fig.4 Effect of initial p H value on alcoholic fermentation
2.2.5 發(fā)酵溫度對銀杏大麥酒酒精度和糖度的影響
由圖5可知,發(fā)酵溫度從18℃升高到34℃時,發(fā)酵液中酒精度含量呈先增后減趨勢。26℃時發(fā)酵液中酒精度最高、糖度最低。主要原因是溫度影響酵母菌的生長,隨著溫度升高,酵母對糖的消耗以及代謝產(chǎn)生酒精的速率加快。當(dāng)溫度過高時,酵母老化加快,導(dǎo)致產(chǎn)生的酒精量減少,容易造成雜菌污染,嚴(yán)重影響銀杏大麥酒的風(fēng)味和口感。因此,選擇26℃作為銀杏大麥酒的最佳發(fā)酵溫度。
表3 大麥酒發(fā)酵條件優(yōu)化Box-Behnken試驗設(shè)計及結(jié)果Table 3 Design and results of Box-Behnken experiments for ginkgo-barley wine fermentation conditions optimization
續(xù)表
2.3.3 響應(yīng)面交互作用分析
銀杏大麥酒酒精度對初始糖度、接種量、初始pH值和發(fā)酵溫度4因素回歸模型的響應(yīng)曲面和等高線如圖6所示。在交互作用對銀杏大麥酒的酒精度影響中,初始糖度與初始pH值的交互作用最顯著(P<0.01),其次是接種量與初始pH值的交互作用顯著(P<0.05),而初始糖度與接種量、初始糖度與發(fā)酵溫度、接種量與發(fā)酵溫度和初始pH值與發(fā)酵溫度的交互作用不顯著(P>0.05),這與方差分析結(jié)果一致。
2.3.2 回歸模型的方差分析
對銀杏大麥酒發(fā)酵條件的數(shù)學(xué)模型進(jìn)行方差分析,以檢驗方程的有效性和各因子的偏回歸系數(shù),回歸模型的方差分析如表4所示。由表4可知,該試驗選用的模型極顯著(P<0.01),方差的失擬項不顯著(P=0.074 0>0.05),即模型選擇合適;同時,所選模型的校正決定系數(shù)R2=0.941 7,表明此模型能解釋94.17%的結(jié)果值變化,僅有總變異5.83%不能用該模型解釋,基本可用于銀杏大麥酒發(fā)酵條件的分析和預(yù)測。在此試驗設(shè)計的作用因素中,一次項A(初始糖度)、C(初始pH值)、D(發(fā)酵溫度)、二次項A2、B2、C2、D2及交互項AC對銀杏大麥酒酒精度的影響極顯著(P<0.01),交互項BC對銀杏大麥酒酒精度的影響顯著(P<0.05),B(接種量)及交互項AB、AD、BD、CD對銀杏大麥酒酒精度的影響均不顯著(P>0.05)。
表4 回歸方程方差分析Table 4 Variance analysis of regression equation
圖6 初始p H值、初始糖度以及接種量的交互作用對銀杏大麥酒酒精度影響的響應(yīng)面和等高線Fig.6 Response surface and contour line of effects of interaction between initial pH value,sugar content and inoculum on the alcohol content of ginkgo-barley wine
2.3.4 最佳發(fā)酵條件的確定
根據(jù)Box-Behnken Design試驗分析的結(jié)果和二次多項回歸方程,利用Design Expert 8.0.6.1軟件,可獲得銀杏大麥酒的最佳發(fā)酵條件,即初始糖度22.80°Bx、接種量0.24%、初始pH值3.70、發(fā)酵溫度27.0℃。在此最優(yōu)條件下,銀杏大麥酒的酒精度最高,為11.51%vol。為驗證此模型的可靠性,在最優(yōu)條件下進(jìn)行3次平行試驗,結(jié)果表明,所得銀杏大麥酒的平均酒精度為11.46%vol;與理論預(yù)測值相比,其相對誤差約為0.43%,說明模型可以較好地反映出銀杏大麥酒的發(fā)酵條件,也再次證明了通過響應(yīng)曲面法對銀杏大麥酒的發(fā)酵條件進(jìn)行優(yōu)化是可行的。
發(fā)酵過程中總酸含量的變化如圖7所示,銀杏大麥酒的總酸含量在發(fā)酵過程中呈現(xiàn)先顯著上升后緩慢下降的趨勢,在發(fā)酵第3天時達(dá)到最高,為121 mg/100 mL。原因是酵母菌在發(fā)酵前3 d的發(fā)酵過程中也會形成少量的有機(jī)酸,如乙酸、月桂酸、檸檬酸和酒石酸等[20],使酒液的總酸呈顯著上升趨勢。在發(fā)酵后期,總酸含量在保持穩(wěn)定的基礎(chǔ)上略有下降,保持在80~100 mg/100 mL,是因為二氧化碳緩慢溢出,同時部分酸性物質(zhì)轉(zhuǎn)化成了酯、醛、酮等其他物質(zhì),使總酸含量緩慢下降。
圖7 發(fā)酵過程中總酸含量的變化Fig.7 Changes of total acid content during the fermentation
發(fā)酵過程中總酚含量的變化如圖8所示,銀杏大麥酒中的總酚含量呈現(xiàn)先上升后下降,最后小幅升降的趨勢。發(fā)酵前期由于出汁量較多或者產(chǎn)生的乙醇有利于酚類物質(zhì)的溶出,使過久的總酚含量增加,并在發(fā)酵第2天時達(dá)到最高,為0.34 mg/mL。隨著氧化時間延長,隨著酵母菌和銀杏果和大麥原始菌群的生長繁殖,微生物在代謝過程中產(chǎn)生的酶會使多酚類物質(zhì)發(fā)生降解,使得總酚含量呈下降趨勢。7~13 d,總酚含量呈小幅升降的趨勢,這可能是由于之前未溶出的酚類物質(zhì)隨著發(fā)酵時間的推移慢慢溶出及后續(xù)慢慢被氧化造成的[21-22]。
圖8 發(fā)酵過程中總酚含量的變化Fig.8 Changes of total phenols content during the fermentation
發(fā)酵過程中總黃酮含量的變化如圖9所示,在銀杏大麥酒的前酵階段,發(fā)酵時間不超過2 d時,黃酮含量下降速度較快,而在銀杏大麥酒的后酵階段,發(fā)酵7 d后,銀杏大麥酒中黃酮含量下降較緩慢,并趨于平穩(wěn)。總黃酮的含量呈下降趨勢,是由于黃酮難溶于水而較易溶于乙醇溶液,隨著發(fā)酵過程的進(jìn)行將有越來越多的黃酮遷移至酒體中。從而銀杏大麥酒和大麥銀杏酒中的黃酮的含量明顯下降。
圖9 發(fā)酵過程中總黃酮含量的變化Fig.9 Changes of total flavonoids content during the fermentation
2.7.1 羥基自由基清除能力的測定
由圖10所示,羥基自由基的清除率緩慢上升,最終數(shù)值穩(wěn)定在98%左右。是由于銀杏大麥酒中功能性成分如總酚、多糖等含量較高,這些功能性成分對·OH具有較好的清除能力。
圖10 不同發(fā)酵時間大麥酒的羥基自由基清除率Fig.10 Hydroxyl radical scavenging rate of ginkgo-barley wine with different fermentation time
2.7.2 DPPH自由基清除能力的測定
如圖11所示,銀杏大麥酒對DPPH自由基清除率呈先升后降,之后趨于穩(wěn)定的趨勢,最后測量值穩(wěn)定在37%左右。發(fā)酵前期與總酚的變化基本一致,在發(fā)酵前期抗氧化能力提高是由于酚類化合物含量增加引起的,之后的下降是由于酚類物質(zhì)被氧化或被酶解造成的,也可能因為黃酮的不穩(wěn)定性及發(fā)酵過程中產(chǎn)生的酶分解了酚類等大分子物質(zhì),導(dǎo)致抗氧化性降低。
圖11 不同發(fā)酵時間大麥酒的DPPH自由基清除率Fig.11 DPPH radical scavenging rate of ginkgo-barley wine with different fermentation time
2.7.3 總抗氧化能力測定
如圖12所示,總抗氧化性能力總體呈先升后降,之后趨于平穩(wěn)的趨勢,總抗氧化能力的變化可能與發(fā)酵過程中酚類物質(zhì)解離和聚合等復(fù)雜反應(yīng)以及銀杏果實中游離酚和結(jié)合酚的含量有關(guān)[23]。由圖8和圖12可知,銀杏大麥酒中總酚含量與總抗氧化能力的變化基本一致。
圖12 不同發(fā)酵時間大麥酒的總抗氧化能力變化Fig.12 Total antioxidant capacity changes of ginkgo-barley wine with different fermentation time
以銀杏果和大麥為原料,采用單因素試驗和Box-Behnken試驗設(shè)計對銀杏大麥酒的釀造工藝進(jìn)行優(yōu)化,得到最佳工藝條件:初始糖度22.80°Bx、接種量0.24%、初始pH值3.70、發(fā)酵溫度27.0℃。在該工藝下釀造的銀杏大麥酒的酒精含量在11.4%vol左右,屬于低酒精度飲料酒。銀杏大麥酒經(jīng)發(fā)酵后總酸含量維持在80~100 mg/100 mL,總酚含量保持在0.3 mg/mL左右,其羥基自由基清除率穩(wěn)定在98%左右,DPPH自由基清除率穩(wěn)定在37%左右,總抗氧化性能力指標(biāo)保持在較高的水平。但釀造過程中酒體中黃酮類物質(zhì)會有一定程度的損失,因此還需要對釀造工藝進(jìn)行改進(jìn),以最大程度的保留黃酮類物質(zhì),以進(jìn)一步增強(qiáng)其保健功能。