喬思佳，錢(qián)琳琳，元小冬，張萍淑，劉妍

神經(jīng)信息的傳遞通過(guò)突觸囊泡膜和突觸前膜的融合釋放神經(jīng)遞質(zhì)來(lái)實(shí)現(xiàn)，突觸囊泡的內(nèi)吞作用一旦喪失，會(huì)導(dǎo)致突觸前膜的面積持續(xù)增大，膜的側(cè)向張力逐漸減小，神經(jīng)元突觸會(huì)失去正常功能，可見(jiàn)突觸囊泡的內(nèi)吞作用對(duì)突觸前膜的動(dòng)態(tài)平衡至關(guān)重要[1,2]。囊泡的內(nèi)吞功能主要有以下幾點(diǎn)：補(bǔ)充囊泡池，保障囊泡循環(huán)正常進(jìn)行；攝取神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子及細(xì)胞表面的分子；維持膜動(dòng)態(tài)平衡。內(nèi)吞途徑主要包括慢速內(nèi)吞作用（網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)內(nèi)吞）、快速內(nèi)吞作用（Kiss and run、不依賴網(wǎng)格蛋白的大量?jī)?nèi)吞作用、超快速內(nèi)吞）[3,4]。突觸囊泡內(nèi)吞作用缺陷是癲癇、帕金森病、阿爾茲海默病等多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)病機(jī)制之一。本文就國(guó)內(nèi)外突觸囊泡內(nèi)吞作用的研究現(xiàn)狀并結(jié)合臨床病癥進(jìn)行綜述。

1 突觸囊泡內(nèi)吞作用的研究方法

1.1 電生理技術(shù)檢測(cè)

電生理技術(shù)可獲得正常的神經(jīng)元狀態(tài)、功能及其相互作用，同時(shí)也是研究神經(jīng)突觸是否發(fā)育成熟的最可靠方法。目前國(guó)內(nèi)外最常用于研究?jī)?nèi)吞機(jī)制的是全細(xì)胞式的膜片鉗技術(shù)。它具有應(yīng)用范圍廣、可在神經(jīng)興奮膜電位穩(wěn)定時(shí)快速記錄離子通道電流的優(yōu)點(diǎn)。Zhong等[5]運(yùn)用這種技術(shù)連續(xù)記錄基因嵌合體共培養(yǎng)小鼠神經(jīng)元突觸電活動(dòng)，檢查突觸前后Nrg1/ErbB信號(hào)誘導(dǎo)調(diào)節(jié)谷氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)。同樣，張吉鳳等[6]采用高頻刺激干擾神經(jīng)元并用這種技術(shù)記錄變化，驗(yàn)證endophilin表達(dá)異常破壞大鼠海馬神經(jīng)元突觸囊泡內(nèi)吞作用。膜片鉗技術(shù)目前存在一些問(wèn)題無(wú)法攻破，如損傷細(xì)胞骨架、對(duì)細(xì)胞和電極要求高、不利于長(zhǎng)時(shí)間測(cè)量記錄等，還需進(jìn)一步研究改進(jìn)。

1.2 電子顯微鏡檢測(cè)（electron m icroscopy，EM）

1.2.1 冷凍電鏡（Cryo-EM）和光電聯(lián)合顯微技術(shù)（Correlative light and electron microscopy，CLEM）Cryo-EM可避免神經(jīng)元被復(fù)雜的化學(xué)藥品處理及漫長(zhǎng)的固定、染色、脫水過(guò)程，減少突觸超微結(jié)構(gòu)變形損傷。它直接將神經(jīng)元短時(shí)間內(nèi)在極低的溫度下冷凍（液氮）再經(jīng)過(guò)冷凍替代或直接在冷凍電鏡下觀看。運(yùn)用這種“快速冷凍”的顯微鏡可觀察到生理狀態(tài)下難以捕捉到的超快速內(nèi)吞，為研究超快速內(nèi)吞途徑提供有利證據(jù)[7]。目前冷凍電鏡技術(shù)的分辨率還不完美，還需進(jìn)一步開(kāi)發(fā)[8]。

CLEM結(jié)合光學(xué)顯微鏡可觀察活體細(xì)胞和電子顯微鏡的高空間分辨率的特點(diǎn)，為突觸超微結(jié)構(gòu)的研究提供新的技術(shù)手段[9]。CLEM即將神經(jīng)元進(jìn)行熒光染色處理，首先在光學(xué)顯微鏡下成像，然后迅速固定應(yīng)用電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)。Begemann等[10]運(yùn)用CLEM觀察小鼠海馬神經(jīng)元時(shí)對(duì)這項(xiàng)技術(shù)進(jìn)行改良，利用金微圖案對(duì)神經(jīng)元定位，保證光電顯微鏡拍攝為同一神經(jīng)元。但這種隨機(jī)圖案自動(dòng)對(duì)齊CLEM也存在偏差，導(dǎo)致目前很多學(xué)者認(rèn)為可將CLEM與Cryo-EM結(jié)合，以彌補(bǔ)各自的缺點(diǎn)，這種聯(lián)合技術(shù)仍在探索中。

1.2.2 原子力顯微鏡（atom ic force m icroscope，AFM）和掃描透射電子顯微鏡（Scanning transmission electron microscopy，STEM） 由于神經(jīng)突觸僅幾百個(gè)納米大小，只有在納米分辨率下直接觀察，才能清晰地觀察到突觸超微結(jié)構(gòu)及突觸局部動(dòng)力學(xué)改變，這在學(xué)術(shù)界仍是一個(gè)挑戰(zhàn)。AFM不需對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行任何處理，液體環(huán)境下就可觀察，將神經(jīng)元損傷降到最低。通過(guò)探針與神經(jīng)元碰撞，探頭懸臂彎曲并接收細(xì)胞表面原子信息，改變探針位置和產(chǎn)生震動(dòng)，實(shí)現(xiàn)神經(jīng)元的三維成像[11]。Shibata等[12]應(yīng)用AFM觀察培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)元，實(shí)現(xiàn)活神經(jīng)元?jiǎng)討B(tài)的形態(tài)學(xué)的直接可視化。德國(guó)明斯特大學(xué)醫(yī)學(xué)研究所在研究CLEM應(yīng)用于神經(jīng)元突觸功能研究時(shí)提出，掃描電子顯微鏡（SEM）和透射電子顯微鏡（TEM）可更直觀地觀察到突觸超微結(jié)構(gòu)[13]。這種與AFM相似的以斷層掃描三維重構(gòu)方式觀察突觸超微結(jié)構(gòu)的技術(shù)叫作STEM，為學(xué)術(shù)界研究突觸囊泡內(nèi)吞過(guò)程提供新的視角。

1.3 熒光染料標(biāo)記

1.3.1 FM 1-43和pHluorin FM 1-43是一種具備雙極性的水溶性苯乙烯類熒光燃料，分子由親水基團(tuán)頭部和親脂基團(tuán)尾部組成[14]。FM 1-43具有不影響正常的囊泡功能和轉(zhuǎn)運(yùn)、易溶于水及被細(xì)胞膜吸收、不會(huì)擴(kuò)散到細(xì)胞質(zhì)中、插入脂質(zhì)雙分子層具有強(qiáng)熒光作用而在水溶液中幾乎不發(fā)熒光等優(yōu)點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于追蹤突觸囊泡內(nèi)吞過(guò)程。Ramperez等[15]體外培養(yǎng)7 d小腦顆粒細(xì)胞并用布雷菲德菌素A干擾抑制AP-1/AP-3介導(dǎo)的囊泡回收，應(yīng)用FM 1-43熒光標(biāo)記干擾的細(xì)胞，觀察不同情況下囊泡內(nèi)吞變化，表明AP-1/AP-3有利于突觸囊泡循環(huán)。但是由于FM 1-43特異性標(biāo)記的時(shí)間分辨率較差，不能像膜片鉗技術(shù)一樣提供毫秒級(jí)變化的信息，難以排除其他因素干擾。目前，學(xué)者們應(yīng)用光轉(zhuǎn)化與突觸囊泡共定位解決了這一缺陷。光轉(zhuǎn)化使得作用的突觸囊泡被電鏡觀察到，增加熒光標(biāo)記精準(zhǔn)度[16]。

pHluorin是一種pH值敏感的綠色熒光蛋白（green fluorescent protein，GFP），它可以隨著pH值的升高熒光強(qiáng)度增高。突觸囊泡內(nèi)吞作用攝取酸性神經(jīng)遞質(zhì)pH值降低酸化，胞吐釋放神經(jīng)遞質(zhì)pH值升高，pHluorin感知這種pH變化發(fā)出不同強(qiáng)度的熒光，用于研究突觸囊泡的循環(huán)[17]。由于pHluorin便于操作檢測(cè)，靈敏度高；不需要加入輔助因素，僅激發(fā)就可以發(fā)出熒光，熒光穩(wěn)定性強(qiáng)，不易淬滅；染料對(duì)細(xì)胞無(wú)害，可直接鑒定活細(xì)胞的內(nèi)吞，因此普遍應(yīng)用于突觸囊泡內(nèi)吞的研究。近幾年，很多學(xué)者們應(yīng)用這項(xiàng)技術(shù)研究囊泡內(nèi)吞，特別是不依賴網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的快速內(nèi)吞[18-20]。

1.3.2 量子點(diǎn)（quantum dots，QDs） QDs是半導(dǎo)體納米級(jí)晶體，尺寸大概在1～10 nm，QDs發(fā)出熒光的波長(zhǎng)取決于量子點(diǎn)的大小，因此結(jié)合不同的受體激發(fā)的熒光波長(zhǎng)不盡相同。較小的納米粒子可經(jīng)過(guò)CME途徑內(nèi)吞，較大的粒子則需要其他胞吞方式攝取。與FM 1-43和pHluorin不同，QDs可精準(zhǔn)標(biāo)記囊泡，定位單一囊泡位置，追蹤不同途徑內(nèi)吞的過(guò)程。作為一種優(yōu)勢(shì)熒光探針，QDs具有量子產(chǎn)量高，耐光漂白；寬激發(fā)熒光范圍和窄發(fā)射熒光范圍，避免背景散射；良好的光穩(wěn)定性和持續(xù)性，追蹤活細(xì)胞中介導(dǎo)的內(nèi)吞等優(yōu)點(diǎn)。Carcea等[21]將大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)元在含Sema3A-QDs復(fù)合物的溶液中室溫培養(yǎng)30 m in，每5 m in渦旋一次，洗去多余培養(yǎng)液以保證觀察到純凈的被轉(zhuǎn)染的神經(jīng)元，監(jiān)測(cè)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元Sema3A胞吞作用。中國(guó)香港科技大學(xué)分子神經(jīng)科實(shí)驗(yàn)室同樣利用QDs技術(shù)，通過(guò)熒光強(qiáng)度以區(qū)分內(nèi)化的和細(xì)胞表面的乙酰膽堿受體（acetylcholine receptor，AchR），證實(shí)重癥肌無(wú)力的發(fā)病機(jī)制與乙酰膽堿內(nèi)吞紊亂有關(guān)，可為此類疾病提供一種新的干預(yù)治療方式[22]。

2 突觸囊泡內(nèi)吞與神經(jīng)系統(tǒng)疾病

2.1 網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)內(nèi)吞作用（Clathrin mediated endocytosis，CME）

CME是突觸囊泡內(nèi)吞作用的主要途徑，該通路實(shí)現(xiàn)一次囊泡循環(huán)約20 s[23-25]。該通路按時(shí)間順序大抵可以分為四個(gè)階段，即形成網(wǎng)格蛋白包被、突觸前膜凹窩形成、凹窩縮縊和剪切、去除網(wǎng)格蛋白包被[26]。

2.1.1 形成網(wǎng)格蛋白包被 胞吐完成神經(jīng)遞質(zhì)釋放后，“引物”囊泡膜碎片從遞質(zhì)釋放的“活動(dòng)區(qū)”移動(dòng)到相隔1 μm距離的“內(nèi)吞區(qū)”觸發(fā)內(nèi)吞過(guò)程[27]?！斑m配器”銜接蛋白-2（adaptor protein 2，AP-2）識(shí)別“內(nèi)吞區(qū)”的囊泡膜成分，同時(shí)與具有“三腳架”結(jié)構(gòu)的網(wǎng)格蛋白結(jié)合，形成網(wǎng)格蛋白包被[28]。網(wǎng)格蛋白包被形成障礙導(dǎo)致CME通路無(wú)法啟動(dòng)，阻礙囊泡內(nèi)吞作用正常進(jìn)行。突觸功能降低和突觸缺失是阿爾茲海默?。ˋlzheimer disease，AD）的發(fā)病機(jī)制之一，AP-2、網(wǎng)格蛋白等突觸內(nèi)吞蛋白在AD腦組織中明顯減少。Garcia等[29]培養(yǎng)原代海馬神經(jīng)元，運(yùn)用抗體內(nèi)化測(cè)定法、M 6a-GFP/RFP共表達(dá)標(biāo)記等方法觀察膜糖蛋白M 6a內(nèi)化情況，證明M 6a的內(nèi)化與AP-2有關(guān)涉及CME，對(duì)神經(jīng)元可塑性具有重要作用，M 6a通過(guò)CME途徑內(nèi)吞再循環(huán)回細(xì)胞膜，編碼神經(jīng)元膜表面M 6a基因的表達(dá)突變會(huì)引起AD、抑郁癥、精神分裂等疾病，故通過(guò)恢復(fù)M 6a水平可以治療這些神經(jīng)系統(tǒng)疾病。

2.1.2 突觸前膜凹窩形成 包被段膜表面在BAR家族蛋白等曲率蛋白的作用下逐漸內(nèi)陷，形成凹窩。BAR蛋白家族的Endophilin被證實(shí)參與囊泡內(nèi)吞的早期膜凹陷至后期去包被等多個(gè)過(guò)程[30]。Endophilin蛋白的羧基（C）端含SH結(jié)構(gòu)域，結(jié)合內(nèi)吞作用蛋白的多聚脯氨酸殘基，參與凹窩形成；氨基（N）端含BAR結(jié)構(gòu)域，具備螺旋結(jié)構(gòu)和卷曲結(jié)構(gòu)（Coiled-coil，C-C），改變膜的曲率[31]。Endophilin缺陷后凹窩不能繼續(xù)形成，CME通路中斷[32]。

帕金森?。≒arkinson’s disease，PD）與突觸功能失調(diào)是分不開(kāi)的，囊泡內(nèi)吞作用障礙導(dǎo)致多巴胺能神經(jīng)元死亡是PD發(fā)病的一個(gè)重要原因。Pan等[33]以PD相關(guān)基因（Leucine-rich repeat kinase2，LRRK2）調(diào)節(jié)突觸囊泡內(nèi)吞為切入點(diǎn)，制作LRRK2突變體小鼠模型，觀察其運(yùn)動(dòng)障礙等典型的PD表現(xiàn)，取LRRK2轉(zhuǎn)基因小鼠中腦神經(jīng)元，利用pH luorin實(shí)時(shí)成像追蹤囊泡驗(yàn)證內(nèi)吞機(jī)制損傷，由于LRRK2突變破壞endophilin的作用干擾囊泡內(nèi)吞引起PD，臨床上可通過(guò)干預(yù)LRRK2以達(dá)到治療PD的目的。

2.1.3 突觸前膜凹窩縮縊和剪切 突觸前膜凹窩縮縊足夠的彎曲度后，需要Dynamin蛋白的“剪刀”作用將新囊泡從突觸前膜上剪切下來(lái)。抑制Dynamin的表達(dá)，雖然凹窩可以形成，但不能及時(shí)被剪切的大量凹窩聚集在突觸前膜影響正常的內(nèi)吞作用[34]。癲癇性腦?。╡pileptic encephalopathies，EE）表現(xiàn)為癲癇性異常引起的腦功能損傷，包括認(rèn)知、行為、智力及精神狀態(tài)的改變，是一種嚴(yán)重的兒童期神經(jīng)系統(tǒng)疾病[35]。腦癲癇性放電很大程度上與興奮性神經(jīng)遞質(zhì)釋放過(guò)多有關(guān)。Fan等[36]發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組相比，Dynam in1和Dynam in3基因敲除小鼠體型小、駝背姿勢(shì)且對(duì)正常刺激無(wú)反應(yīng)，由于阻斷Dynam in作用損害網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用，神經(jīng)元回收谷氨酸等興奮性神經(jīng)遞質(zhì)、神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子等物質(zhì)的作用減弱，這種缺陷的慢性累積很大程度上會(huì)影響神經(jīng)發(fā)育，導(dǎo)致EE發(fā)生。

2.1.4 去除網(wǎng)格蛋白包被 網(wǎng)格蛋白包被去除的過(guò)程主要有具有ATP活性的熱休克蛋白（Hsc70）及輔助蛋白Auxilin的參與[37]，Auxilin具有激活Hsc70、提高Hsc70的ATP酶活性、錨定包被促使網(wǎng)格蛋白和AP-2迅速脫離囊泡的作用。Hsc70及其輔助蛋白異常造成突觸內(nèi)吞作用的缺陷，導(dǎo)致肌萎縮側(cè)索硬化癥（amyotrophic lateral sclerosis，ALS）、PD、AD等神經(jīng)退行性疾病[38]。

毒性神經(jīng)遞質(zhì)如谷氨酸大量堆積于神經(jīng)元之間是ALS的一個(gè)重要發(fā)病機(jī)制，囊泡內(nèi)吞作用可及時(shí)回收谷氨酸防止神經(jīng)元持續(xù)興奮，一旦內(nèi)吞作用缺失便會(huì)增加ALS發(fā)病機(jī)率。Coyne等[39]發(fā)現(xiàn) TAR-DNA 結(jié)合蛋白-43（TAR DNA-binding domain protein 43，TDP-43）過(guò)度表達(dá)與ALS發(fā)病有關(guān)，運(yùn)用PCR等技術(shù)驗(yàn)證突變體TDP-43的果蠅神經(jīng)元中Hsc70 mRNA隔離于TDP-43復(fù)合物中導(dǎo)致其表達(dá)量減少，實(shí)驗(yàn)轉(zhuǎn)染TDP-43至小鼠運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元，由于Hsc70及輔助蛋白水平降低，F(xiàn)M 1-43回收囊泡缺陷間接證明內(nèi)吞作用受阻，此實(shí)驗(yàn)為突變神經(jīng)元加入Hsc70干預(yù)發(fā)現(xiàn)可減少TDP-43毒性。因此，臨床可根據(jù)相關(guān)原理調(diào)控Hsc70表達(dá)治療ALS。

2.2 Kiss and run

Kiss and run是神經(jīng)遞質(zhì)釋放囊泡膜不會(huì)與突觸前膜完全融合，而是在胞吐活動(dòng)區(qū)形成一納米級(jí)小孔，快速釋放遞質(zhì)同時(shí)回收物質(zhì)，小孔關(guān)閉，全程僅需1 s即進(jìn)入下一囊泡循環(huán)[40]。融合小孔的形成主要依靠SNARE復(fù)合體形成及肌動(dòng)蛋白相互作用[41]。Wen等[42]的實(shí)驗(yàn)表明在感光細(xì)胞突觸存在的有效Kiss and run途徑內(nèi)吞有助于快速補(bǔ)充囊泡池，同時(shí)也驗(yàn)證這種途徑是融合孔（孔徑約2.3～4.6 nm）瞬間開(kāi)放和關(guān)閉的過(guò)程。維持Kiss and run機(jī)制的關(guān)鍵在于突觸囊泡不完全塌陷，已有研究發(fā)現(xiàn)Dynam in 1起重要作用。此時(shí)，Dynam in 1發(fā)揮的并非剪切作用，而是在小孔附近環(huán)繞成套，抑制突觸囊泡與突觸前膜持續(xù)融合，并協(xié)同肌動(dòng)蛋白關(guān)閉融合小孔[43-45]。

2.3 不依賴網(wǎng)格蛋白的大量?jī)?nèi)吞作用（Clathrin-independent bulk endocytosis，CIE）

CIE是在強(qiáng)烈刺激下，大片突觸前膜向內(nèi)褶皺形成類似內(nèi)涵體的結(jié)構(gòu)，隨后類內(nèi)涵體結(jié)構(gòu)以出芽形式釋放囊泡，補(bǔ)充囊泡池。CIE通路首先在青蛙的神經(jīng)肌接頭被發(fā)現(xiàn)，之后也在中樞神經(jīng)突觸研究中被發(fā)現(xiàn)。Park等[23]通過(guò)研究原代培養(yǎng)海馬神經(jīng)元成熟過(guò)程中CIE作用，證明CIE通過(guò)依賴AP-1/AP-3捕獲突觸囊泡，且在強(qiáng)烈刺激下，CIE對(duì)突觸囊泡回收作用隨神經(jīng)元成熟而增強(qiáng)，并且在神經(jīng)元完全成熟時(shí)達(dá)到67%。與Park不同的是，Soykan等[1]在生理狀態(tài)下加入Dynam in抑制劑，測(cè)定不同頻率與時(shí)間下突觸囊泡蛋白-pHluorin表達(dá)水平，Dynamin抑制劑處理組神經(jīng)元340 Hz 5 s刺激后1 s中突觸素-pHluorin恢復(fù)水平降低，證明CIE主要依賴Dynam in介導(dǎo)裝配。

2.4 超速內(nèi)吞作用

在高強(qiáng)度刺激下，CME經(jīng)典模式不足以代償突觸間隙的遞質(zhì)殘留及補(bǔ)充囊泡池，需要額外的快速途徑來(lái)完成這項(xiàng)工作。這種不需要形成網(wǎng)格蛋白包被，可在150～250 ms內(nèi)完成遞質(zhì)回收的途徑即超速內(nèi)吞[46]。超速內(nèi)吞作用也受Dynam in的調(diào)控，抑制Dynamin的剪切作用，電鏡下觀察到突觸前膜上形成未被剪切的巨大融合囊泡，突觸沉默。

最近幾年新發(fā)現(xiàn)的活動(dòng)依賴的批量?jī)?nèi)吞作用（activity-dependent bulk endocytosis，ADBE）通路是在強(qiáng)烈刺激下快速回收遞質(zhì)[47]。周繼秀等[48]制備無(wú)鎂小鼠海馬神經(jīng)元癲癇模型，與正常神經(jīng)元比較，模型神經(jīng)元去磷酸化Dynam in水平升高，ADBE通路活動(dòng)增強(qiáng)，驗(yàn)證ADBE途徑內(nèi)吞參與癲癇動(dòng)作電位活動(dòng)，加入Dynamin抑制劑干預(yù)，運(yùn)用膜片鉗技術(shù)記錄正常組、癲癇組及干預(yù)組神經(jīng)元?jiǎng)幼麟娢?，熒光檢測(cè)癲癇細(xì)胞ADBE通路內(nèi)吞情況等方法證明抑制劑干預(yù)后此通路作用減弱，癲癇細(xì)胞興奮性降低，從而給臨床治療癲癇提供新的方法。

3結(jié)語(yǔ)與展望

神經(jīng)元突觸囊泡內(nèi)吞作用是整個(gè)神經(jīng)系統(tǒng)的功能基礎(chǔ)，這是一個(gè)多種復(fù)雜精細(xì)步驟環(huán)環(huán)相扣的過(guò)程，任何一個(gè)環(huán)節(jié)出現(xiàn)問(wèn)題，囊泡內(nèi)吞就會(huì)受損且導(dǎo)致病變。目前，對(duì)突觸囊泡內(nèi)吞作用的研究比較清晰，參與各途徑的相關(guān)因子也逐漸凸顯出來(lái)，但由于囊泡內(nèi)吞速度過(guò)快，捕捉其完整的過(guò)程仍面臨巨大挑戰(zhàn)?，F(xiàn)在的電子顯微技術(shù)發(fā)展迅猛，不僅能清晰觀察突觸超微結(jié)構(gòu)，甚至可以監(jiān)測(cè)活突觸囊泡的內(nèi)吞情況，然而由于這些先進(jìn)的技術(shù)造價(jià)不菲且操作復(fù)雜，并不能普及到各基層研究室，未來(lái)還需改進(jìn)?？茖W(xué)家們?cè)诓粩嗵剿魍挥|囊泡內(nèi)吞機(jī)制時(shí)，發(fā)現(xiàn)內(nèi)吞作用紊亂會(huì)引起癲癇、PD及AD等神經(jīng)系統(tǒng)疾病。目前，內(nèi)吞作用各通路因子抑制劑和激動(dòng)劑干預(yù)、基因調(diào)控等方法作用于神經(jīng)系統(tǒng)疾病動(dòng)物模型離體神經(jīng)元并且初見(jiàn)成效，但這些方法尚未能很好地應(yīng)用到動(dòng)物模型，因此干預(yù)后動(dòng)物模型會(huì)導(dǎo)致什么樣的變化還未可知，還需繼續(xù)探索。了解神經(jīng)系統(tǒng)疾病中突觸缺失及囊泡內(nèi)吞作用障礙機(jī)制，尋找藥物干預(yù)、基因調(diào)控等新治療靶點(diǎn)非常必要。