原發(fā)性高血壓(EH)是指無確切病因的以體循環(huán)動脈壓升高為主要臨床表現(xiàn)的心血管綜合征[1-2]。既往研究認為，EH是一種慢性低級別炎癥性疾病，免疫功能異常在EH發(fā)生、發(fā)展過程發(fā)揮重要作用[3]，因此有關(guān)EH與免疫細胞、免疫分子的相關(guān)研究已成為當前心血管病學研究的重要方向。本研究探討Th22細胞及其細胞因子在EH病人中表達的臨床意義，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象 選取2013年1月—2016年10月我院收治的64例1級EH病人(A組)、70例2級EH病人(B組)、49例3級EH病人(C組)及同期體檢科體檢的50名健康對照者(D組)作為研究對象。A組、B組、C組研究對象納入標準：符合EH診斷標準[4]；最近6個月內(nèi)未服用降壓藥物、免疫抑制劑類藥物。排除標準：繼發(fā)性高血壓病人；合并免疫系統(tǒng)疾??；合并腦血管疾??；合并冠心病、心力衰竭等心臟疾??；合并重要臟器功能不全；合并惡性腫瘤。4組研究對象性別、年齡比較，差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

1.2 研究方法

1.2.1 外周血Th22細胞檢測 采用美國BD公司FACSCalibur流式細胞儀進行檢測，步驟如下：①抽取研究對象空腹靜脈血2 mL，肝素抗凝。②取500μL肝素抗凝血，依次加入氟波酯液12.5 μL、莫能霉素液0.35 μL、伊諾霉素液1.3 μL，混勻，37 ℃水浴6 h。③取一根流式細胞管，加入孵育后樣本300 μL、CD4單克隆抗體30 μL，混勻，室溫避光孵育10 min。④加入紅細胞裂解液3 mL，混勻，室溫避光孵育10 min。待紅細胞裂解完全后，采用磷酸鹽緩沖液(PBS)洗滌細胞2次或3次，將PBS液吸凈。⑤加入破膜劑250 μL，混勻，室溫避光孵育25 min，采用PBS液洗滌1次或2次，將PBS液吸凈。⑥加入PBS液2 mL，混勻，備用。⑦取兩根流式細胞管，一根為試驗管加入100 μL細胞液及5 μL 藻紅素(PE)標記白介素-22(IL-22)抗體、異硫氰酸熒光素(FITC)標記干擾素-γ(IFN-γ)抗體、PE標記白介素-17(IL-17)抗體，另外一根作為對照管，加入細胞液100 μL及PE 5 μL標記IL-22抗體、FITC標記IFN-γ抗體、PE標記IL-17抗體的同型對照抗體，混勻，室溫避光孵育30 min。⑧兩管中均加入PBS液2 mL，混勻，離心棄上清，加入1%多聚甲醛300 μL，4 ℃冰箱保存。⑨48 h內(nèi)檢測完畢，采用CD4設(shè)門，CD4+ IFN-γ- IL-17- IL-22+ 細胞即為Th22細胞，采用軟件分析結(jié)果。

1.2.2 外周血IL-22檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)進行檢測，試劑盒由上?？道噬锟萍加邢薰咎峁瑖栏癜凑赵噭┖姓f明書操作。

2 結(jié) 果

2.1 4組研究對象外周血Th22細胞和IL-22水平比較 A組、B組、C組、D組外周血Th22細胞、IL-22水平比較，差異有統(tǒng)計學意義(Th22細胞：F=14.763，P=0.000；IL-22：F=30.074，P=0.000)，D組外周血Th22細胞、IL-22水平顯著低于A組、B組、C組(Th22細胞：qA vs D=9.910，P=0.000；qB vs D=11.489，P=0.000；qC vs D=12.657，P=0.000；IL-22：qA vs D=29.870，P=0.000；qB vs D=25.100，P=0.000；qC vs D=24.595，P=0.000)，A組外周血Th22細胞水平低于B組、C組(qA vs B=2.001，P=0.047；qA vs C=3.481，P=0.001)，B組外周血Th22細胞水平低于C組(qB vs C=2.022，P=0.046)，A組、B組、C組外周血IL-22水平比較差異無統(tǒng)計學意義(qA vs B=1.471，P=0.145；qA vs C=1.173，P=0.243；qB vs C=0.189，P=0.850)。詳見表1。

表1 4組外周血Th22細胞和IL-22水平比較(±s)

2.2 4組研究對象血壓水平比較 4組研究對象收縮壓及舒張壓從高到低依次為：C組>B組>A組>D組，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。詳見表2。

表2 4組研究對象血壓水平比較(±s) mmHg

2.3 EH病人外周血Th22細胞及IL-22與血壓相關(guān)性分析 EH病人外周血Th22細胞水平與收縮壓(SBP)呈正相關(guān)(r=0.407，P=0.033)，與舒張壓(DBP)無相關(guān)性(r=0.219，P=0.155)。EH病人外周血IL-22水平與SBP(r=0.155，P=0.210)、DBP(r=0.190，P=0.286)均無相關(guān)性。

3 討 論

EH是目前臨床常見的心血管系統(tǒng)疾病之一，約占所有高血壓病人的95%以上[5]。EH發(fā)病機制至今尚未完全明確，盡管臨床已確認其是一種多因素病因疾病，尤其是遺傳因素、環(huán)境因素交互作用在EH發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，這兩個因素具體通過何種途徑促使血壓升高目前尚無完整統(tǒng)一認識[6-7]。

隨著研究深入，炎癥因素與EH的關(guān)系逐步得到重視。周言等[8]報道，EH病人血清人軟骨糖蛋白(YKL-40)水平顯著高于健康對照組，EH合并代謝綜合征(MS)病人血清YKL-40水平顯著高于EH未合并MS病人，EH病人血清YKL-40水平與其SBP、DBP、白細胞計數(shù)(WBC)呈正相關(guān)，由此可見，炎癥因子YKL-40可能參與EH的病理生理過程，其在高血壓病人預后評估方面可能有一定的臨床價值。朱瑞英等[9]報道，EH病人血清C反應(yīng)蛋白(CRP)水平顯著高于健康對照組，進一步多元Logistic回歸分析顯示，血清CRP水平是EH發(fā)生的獨立危險因素。由此可見，EH發(fā)生發(fā)展與機體炎癥因素密切相關(guān)。Th22細胞是Eyerich等于2009年在CD4+T細胞中發(fā)現(xiàn)的一種新型效應(yīng)性T細胞，其與Th1、Th2、Th17細胞明顯不同，存在特有的分化和轉(zhuǎn)錄因子[10]。關(guān)于Th22細胞研究認為，其典型特征是大量分泌IL-22而不分泌IFN-γ，不分泌或少量分泌IL-17，因此臨床對Th22細胞的相關(guān)研究常同時檢測外周血IL-22水平[11-12]。目前研究認為，外周血Th22細胞及IL-22水平異?？梢娪诙喾N疾病。戴小波等[13]報道，慢性乙型肝炎病人外周血Th22細胞、IL-22水平顯著低于健康對照組、乙肝病毒攜帶者、非病毒性肝炎病人，因此外周血Th22細胞數(shù)量減少或功能減退、IL-22水平降低可能是慢性乙型肝炎發(fā)病的重要因素。賀燕妮等[14]報道，斑禿病人外周血Th22、IL-22水平顯著高于健康對照組，重型斑禿病人、活動期斑禿病人外周血Th22、IL-22水平顯著高于輕型斑禿病人、穩(wěn)定期斑禿病人，因此Th22及其細胞因子可能參與斑禿的發(fā)生、發(fā)展?？梢姡琓h22細胞及IL-22在慢性炎癥性疾病中發(fā)揮重要作用。

本研究結(jié)果顯示，EH病人外周血Th22細胞、IL-22水平均顯著高于健康對照組，且EH分級越高，外周血Th22細胞亦逐步升高，但不同分級EH病人外周血IL-22水平比較差異無統(tǒng)計學意義。進一步相關(guān)，分析顯示，EH病人外周血Th22細胞水平與SBP呈顯著正相關(guān)而與DBP無顯著相關(guān)性，其外周血IL-22水平則與SBP、DBP均無顯著相關(guān)性。本研究結(jié)果與楊子聰[15]報道不一致，其可能原因是兩者研究對象選擇、樣本量方面存在差異。

綜上所述，外周血Th22細胞可能在EH發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮一定的作用，其具體作用機制尚未明確，有待臨床進一步研究。