李 英，張金花，費中海，劉 文

(川北醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗科，四川南充 637000)

隨著電阻抗、高頻電導(dǎo)、激光散射、細胞化學(xué)及多角度激光偏振光散射等檢測技術(shù)用于全自動血細胞分析儀，血常規(guī)的檢測速度和準確性越來越高。血細胞分析儀檢測的準確性主要體現(xiàn)在2個方面：(1)血細胞數(shù)量的準確性；(2)血細胞形態(tài)的準確性。前者的質(zhì)量保證可通過室內(nèi)質(zhì)評、室間質(zhì)評及儀器比對得以實現(xiàn)[1-2]，而后者的準確性受諸多因素影響，目前，尚沒有統(tǒng)一的標準進行評價。血細胞形態(tài)的檢查沒有實現(xiàn)自動化或標準化的主要原因是離體標本的細胞形態(tài)受患者疾病類型、涂片染色技術(shù)和檢驗人員細胞形態(tài)識別能力的影響，而細胞形態(tài)的準確識別依賴涂片及染色良好的血片。傳統(tǒng)的手工涂片染色受檢驗人員操作水平的影響較大，不同檢驗人員對同一患者進行推片染色效果不一且重復(fù)性差。本研究對SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工涂片染色效果及鏡檢結(jié)果準確性進行了對比分析，并進行了效果評價，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1標本來源 隨機選擇在本院就診的門診健康體檢者20例、貧血患者30例、白血病患者20例及兒科患者30例(其中EB病毒抗體陽性者3例，陰性27例)共100例乙二胺四乙酸二鉀抗凝血樣本，隨機編號，樣本處理在2 h內(nèi)完成。

1.2儀器與試劑 邁瑞B(yǎng)C6800全自動血細胞分析儀、邁瑞SC-120全自動推片染色機、Olympus CX21顯微鏡、Olympus圖像采集系統(tǒng)等。所有儀器在使用前均進行校準及性能評價，各儀器均使用原裝配套試劑及質(zhì)控品，使用當日室內(nèi)質(zhì)控在控。瑞氏-吉姆薩染液為珠海貝索生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)。

1.3方法

1.3.1SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工推片染色法的推片及染色效果評價 100例標本隨機編號后采用SC-120全自動推片染色機和手工方法推片染色各1張，由2名有細胞形態(tài)識別經(jīng)驗的檢驗人員對推片效果(推片有明顯頭體尾形成，體尾交界處細胞分布均勻為推片效果好)及染色效果(成熟紅細胞顏色為淡紅色，粒細胞質(zhì)中3種顆粒顏色易于識別為染色效果好)進行評價。

1.3.2SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片鏡檢結(jié)果一致性分析 由2名檢驗人員在Olympus圖像采集系統(tǒng)的輔助下對2種方法制備的血涂片在油鏡下的細胞形態(tài)進行識別，每例標本識別100個白細胞，共10 000個白細胞，同時，觀察成熟紅細胞、有核紅細胞及血小板形態(tài)[3]，分別記錄2名檢驗人員的辨認結(jié)果。

1.3.3SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片異型淋巴細胞(異淋)鏡檢結(jié)果準確性分析 通過對兒科患者30例標本進行EB病毒抗體檢測，與鏡檢異淋檢出率進行對比，比較SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工涂片鏡檢結(jié)果的準確性。異淋涂片鏡檢結(jié)果陽性為>5%[4]

1.4統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS19.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析，計數(shù)資料以率(%)表示，2種方法間的采用χ2檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工推片染色法的推片及染色效果評價 SC-120全自動推片染色機與手工推片染色法的推片及染色效果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，SC-120全自動推片染色機的推片及染色效果均優(yōu)于手工推片染色法。見表1。

2.2SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片鏡檢結(jié)果一致性分析 2名檢驗人員對SC-120全自動推片染色機制備的血涂片中血細胞形態(tài)識別的符合率較高(90%～98%)。而對手工推片染色制備的血涂片中血細胞的識別率在原始細胞及原始細胞等同細胞、中性中幼粒細胞、中性晚幼粒細胞、單核細胞、淋巴細胞和成熟紅細胞異常形態(tài)的識別符合率低于90%，與全自動推片染色機制備的血涂片分析結(jié)果比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.3SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片異淋鏡檢結(jié)果分析 SC-120全自動推片染色機制備的血涂片對淋巴細胞的形態(tài)影響較小，結(jié)果較準確，而手工推片染色法制備的血涂片對淋巴細胞的形態(tài)影響較大，異淋的檢出率具有較高的假陽性，2種方法的鏡檢結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

表1 SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工推片染色法的推片及染色滿意率比較(%)

表2 SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工涂片染色法的鏡檢符合率比較(%)

注：*原始細胞等同細胞包括急性早幼粒細胞白血病中的早幼粒細胞、幼稚單核細胞和幼稚淋巴細胞

表3 SC-120全自動推片染色機與傳統(tǒng)手工方法制備的血涂片異淋陽性率分析

注：與手工推片染色法比較，*P<0.05

3 討 論

血常規(guī)檢查的主要作用是反映患者體內(nèi)血細胞數(shù)量和形態(tài)的變化，在血液系統(tǒng)和血液系統(tǒng)相關(guān)疾病的初診、治療及效果觀察等方面均具有重要價值，同時，對一些感染性疾病也可起到一定的輔助診斷及診斷鑒別作用。但由于全自動血細胞分析儀檢測原理的局限性，目前，血細胞分析儀的準確性僅限于各類血細胞的數(shù)量分析和對正常外周血細胞進行分類，對部分血液系統(tǒng)疾病及血液系統(tǒng)相關(guān)疾病所導(dǎo)致的造血系統(tǒng)中異常釋放到外周血的細胞，如各種原始細胞、原始細胞等同細胞、幼稚細胞、有核紅細胞的分類準確性較差[4-9]，且儀器對成熟紅細胞的形態(tài)僅能以紅細胞平均體積(MCV)、平均紅細胞血紅蛋白量(MCH)、紅細胞分布寬度(RDW)等紅細胞平均參數(shù)進行初步反映，不能代表真正的紅細胞形態(tài)變化，對血小板的形態(tài)異?；蛴锌贵w依賴的血細胞聚集的標本也需進行涂片鏡檢[10-12]。

一直以來，手工推片染色的方法是復(fù)檢的主要方法和較可靠的方法[13]，但在臨床工作中發(fā)現(xiàn)，手工推片染色鏡檢對細胞的形態(tài)影響較大，推片的手法、涂片干燥的方式、染液和緩沖液的比例及染色時間均對細胞的形態(tài)具有不同的影響，尤其是對淋巴細胞和成熟紅細胞，而粒細胞和單核細胞由于有細胞核型的變化和典型的顆粒等特征較易準確識別，這在本研究中也得到了證實。

本研究結(jié)果也說明只有當檢驗人員在鏡下觀察到的細胞形態(tài)沒有或受到標本制備過程中人為因素影響很小的時候，其形態(tài)檢驗結(jié)果才是準確、可靠的，而這一點在臨床工作中往往被忽略而導(dǎo)致部分細胞形態(tài)檢查結(jié)果不準確。通過對SC-120 全自動推片染色機和手工方法進行對比發(fā)現(xiàn)，SC-120 全自動推片染色機的推片效果和染色效果穩(wěn)定，且優(yōu)于手工方法進行血涂片的制備。在細胞形態(tài)的觀察中，2名有經(jīng)驗的檢驗人員分析SC-120 全自動推片染色機和手工方法制備的同一份標本，前者的結(jié)果一致性也優(yōu)于后者，這與標本制備的質(zhì)量有很大關(guān)系。本研究也對2種方法制備的標本中淋巴細胞和紅細胞的形態(tài)觀察結(jié)果進行了探討，結(jié)果顯示，手工推片染色法較易導(dǎo)致異淋(形態(tài)似Ⅱ型異淋為主)的假陽性，這一點在對30例兒童患者標本進行EB病毒抗體檢測后得到了證實。30例中只有3例為EB病毒抗體陽性，采用SC-120 全自動推片染色機進行血涂片制備后鏡檢異淋陽性4例，而手工方法進行血涂片制備后鏡檢異淋陽性達20例，雖然除傳染性單核細胞增多癥患兒異淋會增加外，其他如巨細胞病毒(CMV)病毒感染、小兒肺炎等也可引起外周血異淋不同程度升高，但就2種方法的檢查結(jié)果來看，同一標本手工推片染色法檢出異淋的陽性率確實比SC-120 全自動推片染色機高很多，雖然目前未有基礎(chǔ)研究證實推片的手法會導(dǎo)致假陽性的異淋出現(xiàn)，但在實際工作中確實發(fā)現(xiàn)不同檢驗人員對同一標本進行推片染色時異淋的檢出率相差很大，說明手工推片染色法制片效果的不穩(wěn)定性和不確定性。而SC-120全自動推片染色機的標準化推片染色方式在標本的制備過程中對淋巴細胞的形態(tài)影響較小，結(jié)果更為可靠。

紅細胞形態(tài)的觀察主要體現(xiàn)在紅細胞大小、中央淺染區(qū)、異常紅細胞形態(tài)如球形、淚滴形、靶形及紅細胞碎片等，皺縮紅細胞是常見的在標本制備過程中受人為因素影響的紅細胞形態(tài)，在本研究的30例貧血標本中，僅有1例中度貧血患者用SC-120 全自動推片染色機制備的標本鏡檢為滿視野的皺縮紅細胞，而手工推片染色法卻完全正常，說明SC-120 全自動推片染色機可能對少數(shù)貧血患者的紅細胞形態(tài)造成影響，但此影響易被發(fā)現(xiàn)并可與手工推片染色法涂片鏡檢進行比較確定。2種方法對其他的紅細胞異常形態(tài)的檢出率差異不大。

綜上所述，SC-120 全自動推片染色機推片染色效果穩(wěn)定，重復(fù)性好，適于臨床工作進行血細胞形態(tài)的檢查，也可用于檢驗人員形態(tài)識別能力比對，如與讀片機合用將大大提高血細胞形態(tài)檢驗的準確性，能為臨床提供準確的血細胞數(shù)量和形態(tài)的檢測報告。