高青云 張思雨 王惟萍 柴阿麗* 石延霞 謝學(xué)文 張紅杰李寶聚*

（1中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所，北京 100081；2河北北方學(xué)院農(nóng)林科技學(xué)院，河北張家口 075061；3中國農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社，北京 100081）

蕓 薹 根 腫 菌（Plasmodiophora brassicaeWoron.）是一種土傳活體專性寄生菌，該病原菌不僅侵染所有十字花科蔬菜，同時也會侵染十字花科作物及雜草等，導(dǎo)致根腫病的發(fā)生（王靖 等，2011；Hwang et al.，2012）。在我國根腫病常年發(fā)生，每年有320萬～400萬hm2的十字花科植物受害，一般產(chǎn)量損失20%～30%，嚴(yán)重時達100%，直接影響菜農(nóng)的經(jīng)濟效益（Chai et al.，2014）。根腫菌一旦傳播開來后果不堪設(shè)想，會給菜農(nóng)帶來不可估量的損失。

近年來我國蔬菜種植面積迅速擴大，2016年達2 167萬hm2，產(chǎn)量8.05億t（馬兆紅和司智霞，2017），隨之帶動育苗產(chǎn)業(yè)和育苗基質(zhì)等相關(guān)產(chǎn)業(yè)的興起。蔬菜育苗不僅可以節(jié)約用種量、提高土地利用率、增加復(fù)種指數(shù)和有效控制病蟲害發(fā)生，而且便于集約化管理及批量生產(chǎn)（郭孟報 等，2015）。我國蔬菜生產(chǎn)用苗量大，約2/3蔬菜采用育苗移栽，年種苗需求量超過6 800億株（張真和和馬兆紅，2017）。

蔬菜育苗產(chǎn)業(yè)在我國擁有廣闊的市場前景，基質(zhì)在育苗中起著非常重要的作用。但由于育苗基質(zhì)原料來源復(fù)雜，包括秸稈、草炭等有機基質(zhì)，基質(zhì)帶菌現(xiàn)象時有發(fā)生。使用含有根腫病菌的基質(zhì)，隨著育苗基質(zhì)商品化調(diào)運，可造成病菌遠距離傳播（何海艷和司軍，2017）。2017年7月，河北省張家口壩上沽源縣和康寶縣，由于育苗基質(zhì)中含有根腫菌造成兩地大白菜、花椰菜大面積發(fā)生根腫病，病株率高達45%。2017年8月，河南省安陽市安陽縣寶蓮寺鎮(zhèn)崇召村63名菜農(nóng)的32 hm2（480畝）蔬菜由于購買的1 600袋育苗基質(zhì)帶菌，造成大白菜、青花菜等蔬菜葉片發(fā)黃、枯萎，根部有瘤狀突出。2017年9月，中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所順義試驗基地，由于購買的育苗基質(zhì)含有根腫菌，造成大量大白菜、甘藍、青花菜等十字花科蔬菜發(fā)生根腫病。

根腫菌作為一種土傳病原菌，其休眠孢子可在土壤中存活20 a以上，土壤一經(jīng)根腫菌污染后便不再適宜種植十字花科作物（Wallenhammar，1996）。由于基質(zhì)帶菌導(dǎo)致大白菜、花椰菜、甘藍等十字花科蔬菜定植后發(fā)生根腫病，給菜農(nóng)和育苗場都帶來很大損失，嚴(yán)重制約了蔬菜產(chǎn)業(yè)發(fā)展。同時因育苗基質(zhì)原料需求量大，到目前為止還沒有有效的滅菌方法，也沒有檢測基質(zhì)是否攜帶病原菌的流程方法。為了解決育苗基質(zhì)帶菌引發(fā)病害的問題，相對有效的方法是基質(zhì)消費者根據(jù)種植蔬菜品種及易發(fā)病害種類，在育苗基質(zhì)中拌入相應(yīng)殺菌劑，預(yù)防病害發(fā)生。本試驗通過人工接種蕓薹根腫菌，在基質(zhì)帶菌量為3×103個·mL-1的條件下，采用基質(zhì)拌藥法測定了7種藥劑消毒育苗基質(zhì)對大白菜和花椰菜根腫病的防治效果，旨在篩選適合對帶根腫菌育苗基質(zhì)進行消毒的藥劑，為十字花科蔬菜健康種苗生產(chǎn)提供技術(shù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗于2015年9月至2016年9月在中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所十字花科根腫病試驗溫室內(nèi)進行。

供試菌株：蕓薹根腫菌采自湖北省長陽市火燒坪鄉(xiāng)黍子嶺村，由中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所菜病綜防課題組以帶菌腫根-20 ℃冰箱保存。

供試作物：大白菜品種為中白60，花椰菜品種為中花1號，均由中蔬種業(yè)科技（北京）有限公司提供。

供試藥劑：50%烯酰嗎啉可濕性粉劑（dimethomorph），江蘇輝豐生物農(nóng)業(yè)股份有限公司生產(chǎn)；50%氟啶胺懸浮劑（fluazinam），10%氰霜唑懸浮劑（cyazofamid），日本石原產(chǎn)業(yè)株式會社生產(chǎn)；75%百菌清可濕性粉劑（chlorothalonil），先正達（蘇州）作物保護有限公司生產(chǎn)；25%吡唑醚菌酯乳油（pyraclostrobin），巴斯夫歐洲公司生產(chǎn)；40%五氯硝基苯可濕性粉劑（pentachloronitrobenzene），德州天邦農(nóng)化有限公司生產(chǎn)；50%啶酰菌胺水分散粒劑（boscalid），江陰蘇利化學(xué)股份有限公司生產(chǎn)。

1.2 試驗方法

1.2.1 菌懸液制備 稱取50 g發(fā)病腫根，加入適量無菌水，用組織搗碎機打碎腫根，8層紗布過濾，棄沉淀；濾液中加入無菌水，利用血球計數(shù)板調(diào)節(jié)蕓薹根腫菌休眠孢子濃度為3×106個·mL-1備用。

1.2.2 帶菌育苗基質(zhì)對根腫病發(fā)病程度的影響 采用拌土接種法（司軍 等，2003）制備帶菌育苗基質(zhì)。將蕓薹根腫菌休眠孢子懸浮液濃度分別調(diào)整為 3×106、3×105、3×104、3×103、3×102個·mL-1，以體積比1∶10拌入無菌育苗基質(zhì)中，混合均勻，得到帶菌量分別為3×105、3×104、3×103、3×102、3×10個·mL-1的帶菌育苗基質(zhì)；對照為無菌育苗基質(zhì)中拌入等量清水。然后將基質(zhì)裝入育苗缽中，播種已催芽的大白菜和花椰菜種子，每處理3次重復(fù)，每重復(fù)30株。播種45 d后調(diào)查各處理根系的發(fā)病情況，計算發(fā)病率和病情指數(shù)。

1.2.3 帶菌基質(zhì)消毒防治根腫病藥劑篩選 根據(jù)1.2.2的試驗結(jié)果，選取帶菌量為3×103個·mL-1的帶菌育苗基質(zhì)進行藥劑篩選試驗。將蕓薹根腫菌接種到育苗基質(zhì)后，分別用7種藥劑噴淋基質(zhì)并混合均勻，藥劑用量均為100 kg·m-3。供試藥劑濃度分別為：50%烯酰嗎啉WP 50 mg·L-1、50%氟啶胺 SC 10 mg·L-1、10%氰霜唑SC 3 mg·L-1、75%百菌清WP 150 mg·L-1、25%吡唑醚菌酯EC 50 mg·L-1、40% 五氯硝基苯 WP 150 mg·L-1、50%啶酰菌胺WDG 50 mg·L-1；以育苗基質(zhì)接菌不施藥為清水對照，以不接菌不施藥作為空白對照。藥劑處理后，播種已催芽的大白菜和花椰菜種子，每處理3次重復(fù)，每重復(fù)30株。播種45 d后調(diào)查各處理根系的發(fā)病情況，計算病情指數(shù)和防治效果。1.2.4 播后管理 播種后，前2周保證基質(zhì)含水量＞90%；之后按需澆水。白天溫度控制在22～25℃，夜間15～18 ℃，16 h光周期。試驗期間不施用其他殺菌劑、殺蟲劑。

1.2.5 病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)和防效計算 根腫病調(diào)查及分級標(biāo)準(zhǔn)參考楊佩文等（2009）的方法：0級，根部無腫大；1級，根腫只附著在側(cè)根上，占全部根系的1%～25%；2級，主根上有根腫附著，側(cè)根上根腫數(shù)量占根系的25%～50%；3級，主根上有根腫附著，側(cè)根上根腫數(shù)量占根系的50%～75%；4級，主根上有根腫附著，側(cè)根上根腫數(shù)量占根系的75%以上（圖1）。

大白菜和花椰菜幼苗藥害分級標(biāo)準(zhǔn)（Niwa et al.，2007）：-，無藥害，幼苗健康生長；+，輕度藥害，葉色變深，幼苗生長受一定程度抑制，繼續(xù)培養(yǎng)一段時間藥害癥狀可恢復(fù)；++，中度藥害，明顯抑制幼苗生長，葉色變深、黃化，有壞死斑，藥害癥狀不可恢復(fù)；+++，重度藥害，葉色變深、黃化程度嚴(yán)重，葉片畸形，幼苗萎蔫，生長停滯。

圖1 十字花科根腫病的分級標(biāo)準(zhǔn)

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 采用Microsoft Excel 2010軟件和SPSS Statistics 20.0統(tǒng)計分析軟件對試驗數(shù)據(jù)進行整理分析，利用Duncan氏新復(fù)極差法進行差異顯著性檢驗（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 育苗基質(zhì)帶菌量對大白菜、花椰菜根腫病發(fā)病程度的影響

育苗基質(zhì)攜帶蕓薹根腫菌，會直接導(dǎo)致大白菜和花椰菜幼苗發(fā)病。隨著基質(zhì)帶菌量的增加，大白菜和花椰菜幼苗根腫病的發(fā)病率和病情指數(shù)也逐漸增加。播種后45 d，基質(zhì)帶菌量為3×103個·mL-1處理的大白菜和花椰菜根腫病發(fā)病率分別為100.00%和97.62%，與基質(zhì)帶菌量3×105個·mL-1和3×104個·mL-1處理的發(fā)病率差異均不顯著，而病情指數(shù)隨著蕓薹根腫菌休眠孢子濃度降低有所下降。基質(zhì)帶菌量≤3×102個·mL-1時，大白菜和花椰菜根腫病的發(fā)病率和病情指數(shù)均顯著低于基質(zhì)帶菌量3×103個·mL-1處理（表1）。因此，本試驗選擇帶菌量為3×103個·mL-1的基質(zhì)作為根腫病穩(wěn)定發(fā)病的最低閾值，用于基質(zhì)消毒法防治根腫病藥劑的篩選。

表1 育苗基質(zhì)不同帶菌量對大白菜、花椰菜根腫病發(fā)病程度的影響

2.2 不同藥劑拌入帶菌基質(zhì)對大白菜、花椰菜根腫病的防治效果

在基質(zhì)帶菌量為3×103個·mL-1的條件下，采用基質(zhì)拌藥法防治大白菜和花椰菜根腫病，不同藥劑處理的防治效果差異明顯（表2）。其中，50%氟啶胺SC和10%氰霜唑SC對大白菜和花椰菜根腫病的防治效果最好，防效均達到100.00%，且無藥害產(chǎn)生；75%百菌清WP 對大白菜和花椰菜根腫病的防治效果也較好，防效分別為98.60%和100.00%，但大白菜幼苗有輕度藥害產(chǎn)生；25%吡唑醚菌酯EC對大白菜和花椰菜根腫病的防治效果良好，防效分別為86.25%和82.43%，但有輕微藥害產(chǎn)生；50%烯酰嗎啉WP、40%五氯硝基苯WP、50%啶酰菌胺WDG的防效較差，均低于52%。

表2 不同殺菌劑對帶菌基質(zhì)的防病效果

3 結(jié)論與討論

帶菌育苗基質(zhì)能夠作為初侵染源，使十字花科蔬菜幼苗發(fā)生根腫病，而且基質(zhì)帶菌量越高根腫病發(fā)病越嚴(yán)重。因此，對帶菌育苗基質(zhì)進行消毒是非常必要的。本試驗比較了帶菌基質(zhì)中拌入不同化學(xué)藥劑對根腫病的防治效果，結(jié)果表明50%氟啶胺SC和10%氰霜唑SC對大白菜和花椰菜根腫病的防治效果最好，且無藥害產(chǎn)生。該結(jié)果與前人報道結(jié)果一致，楊佩文等（2009）在大田試驗中發(fā)現(xiàn)氟啶胺和氰霜唑?qū)Υ蟀撞烁[病具有較好的防治效果；譚清等（2014）發(fā)現(xiàn)50%氟啶胺SC對大白菜根腫病的相對防效最高為92.32%；張日波（2010）采用孢子萌發(fā)率法測定了12種殺菌劑對大白菜根腫病菌的室內(nèi)抑菌毒力，發(fā)現(xiàn)氰霜唑、氟啶胺等殺菌劑對蕓薹根腫菌休眠孢子抑制作用較強。所以，氰霜唑和氟啶胺可用于帶根腫菌育苗基質(zhì)消毒，預(yù)防基質(zhì)帶菌引起十字花科根腫病的發(fā)生。此外，本試驗發(fā)現(xiàn)百菌清和吡唑醚菌酯對根腫病也有較好的防治效果，防效達80%以上，但采用基質(zhì)拌藥法施用后大白菜和花椰菜幼苗產(chǎn)生輕微藥害。目前這兩種藥劑防治根腫病在我國尚未登記，今后還需對其最佳使用濃度進行試驗篩選和驗證。

考慮到本試驗未涉及商業(yè)基質(zhì)帶菌問題，因此將本試驗篩選出的藥劑應(yīng)用于商業(yè)帶菌基質(zhì)消毒前，需要先進行小范圍的消毒效果驗證和安全性試驗，再大量應(yīng)用。為防止藥劑濫用，在十字花科作物育苗和種植區(qū)，應(yīng)對新購買的育苗基質(zhì)進行帶菌檢測，可采用誘導(dǎo)植物法在作物適宜播期前45 d播種十字花科作物，或采用分子生物學(xué)方法（Chai et al.，2016）檢測基質(zhì)中是否帶有根腫菌。在確認基質(zhì)帶菌的情況下，再使用藥劑消毒。