祝志川，張喜平

（內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院 普通外科，內(nèi)蒙 呼和浩特 010050）

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌是乳腺癌中最常見的病理類型，特別是在具有乳腺BRCA遺傳易感基因攜帶的患者中，乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)生率可進(jìn)一步的增加[1]。臨床上乳腺惡性腫瘤的發(fā)生，能夠增加患者的致殘率，導(dǎo)致無瘤生存時間的顯著下降[2]。在探討乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)病機(jī)制的過程中發(fā)現(xiàn)，P53蛋白能夠通過影響到癌細(xì)胞的周期調(diào)控，導(dǎo)致上皮細(xì)胞的持續(xù)性增殖，提高了癌細(xì)胞對于導(dǎo)管基底部的浸潤作用[3]；表皮生長因子受體（epidermal growth factor receptor，EGFR）家族成員c-erbB-2的表達(dá)，能夠通過提高癌細(xì)胞DNA的擴(kuò)增速度，并促進(jìn)局部病灶組織的新生血管的形成，從而為惡性腫瘤的早期發(fā)生及中晚期轉(zhuǎn)移提供前提和基礎(chǔ)[4]； B淋巴細(xì)胞瘤2基因（B-cell lymphoma-2，bcl-2）是重要的凋亡因子，其表達(dá)濃度的維持能夠促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡，抑制癌細(xì)胞的過度增殖[5]。為了揭示P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者組織內(nèi)表達(dá)水平變化意義，筆者收集相關(guān)乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者臨床資料，分析探討P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白的異常表達(dá)情況及其與乳腺癌患者臨床病理特征的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取2016年12月—2017年10月在我院接受治療的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡≥18周歲；(2)經(jīng)術(shù)中病理檢查確診為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者；(3)無其他部位原發(fā)腫瘤者。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)不愿參與本項研究者；(2)合并其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病者。根據(jù)納入排除標(biāo)準(zhǔn)共納入研究對象150例，年齡32～62歲，平均（48.92±10.05）歲；高分化者85例，中低分化者65例；絕經(jīng)者105例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者60例；浸潤深度T1＋T2者88例，T3+T4者62例；TNM分期I+I I期者110例，I I I+I V期40例。對照組150例為乳腺良性腫瘤患者，年齡30～64歲，平均（49.04±9.85）歲。兩組患者的年齡等一般資料方面無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05），具有可比性。本項研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會評審?fù)ㄟ^，且所有患者均知情同意。

1.2 檢測方法

所有組織標(biāo)本經(jīng)石蠟包埋后作連續(xù)切片，厚度約為4 mm，采用免疫組化鏈霉卵白素一生物素復(fù)合體法（strep avidin—biotin complex，SABC法）染色，二氨基聯(lián)苯胺（diamionben zidene，DAB）顯色。P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白通用型二抗以及SP試劑盒和DAB顯色盒均購自北京中杉金橋生物技術(shù)開發(fā)公司。以陽性片及PBS代替一抗分別作為陽性及陰性對照，高倍顯微鏡下觀察P53、bcl-2及c-erbB-2蛋白的表達(dá)情況，具體染色步驟嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.3 評價指標(biāo)

觀察兩組P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)率的差異，分析P53、bcl-2及c-erbB-2的關(guān)系，比較不同臨床病理特征的乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2表達(dá)陽性率的差異。陽性評價標(biāo)準(zhǔn)：在高倍鏡下隨機(jī)觀察5個視野，以整張切片陽性細(xì)胞≥25%為陽性，＜25%為陰性。P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)結(jié)果見圖1。

圖1 P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)結(jié)果

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

所有數(shù)據(jù)經(jīng)雙人錄入后，采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。計數(shù)資料采用例或百分率表示，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。兩組和不同臨床病理特征患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)率的比較采用χ2檢驗進(jìn)行處理，采用回歸分析法分析影響乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2表達(dá)的因素。P＜0.05記為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)率的比較

乳腺癌組患者P53、c-erbB-2陽性表達(dá)率高于對照組，bcl-2陽性表達(dá)率低于對照組，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)率的比較[n=150，n（%）]

2.2 不同臨床特征的乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)率的比較

分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度T3+T4、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的乳腺癌患者P53、c-e r bB-2陽性表達(dá)率較高，b c l-2陽性表達(dá)率較低。P53、c-erbB-2及bcl-2的表達(dá)與分化程度、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度、TNM分期有關(guān)（P＜0.05）；與患者年齡無關(guān)（P＞0.05）（表2）。

表2 不同臨床病理特征的乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)率的比較[n（%）]

2.3 影響乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)率的因素

將單因素分析有意義的因素作為自變量，將乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)情況作為因變量進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示分化程度和TNM分期是影響P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)的因素（表3）。

表3 影響乳腺癌患者P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)率的因素

3 討 論

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的發(fā)生主要考慮與性激素水平的紊亂及基因調(diào)控異常有關(guān)，不同的生物學(xué)因素的改變，能夠通過影響到腫瘤相關(guān)信號通路的激活，導(dǎo)致早期細(xì)胞異常病變的發(fā)生[6]?，F(xiàn)階段臨床上乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的早期診斷的水平仍然較為局限，影像學(xué)篩查雖然能夠提高乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的篩查水平，但漏診率或者誤診率水平仍然較高[7]；臨床上通過手術(shù)及綜合性的放療方式輔助治療乳腺浸潤性導(dǎo)管癌，但其治療后的乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的生存時間的改善并不理想，治療后的3年生存率并無明顯的提高[8]。本次研究對于乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者病灶組織中的免疫組化相關(guān)蛋白水平的相關(guān)研究，具有下列兩個方面的價值：(1)能夠為臨床上乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的早期篩查提供理論基礎(chǔ)；(2)能夠為免疫靶向治療提供作用靶點(diǎn)，從而提高乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者的生存預(yù)后水平。

P53的表達(dá)能夠影響到導(dǎo)管上皮細(xì)胞的增殖活性，提高上皮細(xì)胞核DNA的異常增殖的風(fēng)險，P53的表達(dá)陽性率的提升還能夠誘導(dǎo)癌細(xì)胞的早期分化調(diào)控障礙，促進(jìn)癌細(xì)胞的低分化及中低分化的發(fā)生風(fēng)險[9]；c-erbB-2作用PI3K/AKT信號通路的下游因子，其表達(dá)濃度的上調(diào)能夠提高乳腺導(dǎo)管細(xì)胞的核轉(zhuǎn)錄水平，抑制柱狀上皮細(xì)胞的凋亡?；A(chǔ)領(lǐng)域的研究[4]還認(rèn)為，c-erbB-2的表達(dá)能夠提高乳腺浸潤性導(dǎo)管癌細(xì)胞的侵襲能力，提高癌細(xì)胞對于臨近正常乳腺組織的浸潤風(fēng)險；bcl-2是重要的凋亡相關(guān)因子，其能夠影響到導(dǎo)管上皮細(xì)胞的凋亡過程，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的程序性凋亡過程[10-11]。

本次研究通過免疫組化的相關(guān)分析研究發(fā)現(xiàn)，在浸潤性導(dǎo)管癌患者病灶組織中，P53、c-erbB-2的表達(dá)陽性率顯著的上升，高于正常對照乳腺組織，差異較為明顯，提示了P53、c-erbB-2均可能影響到了乳腺癌發(fā)生，通過薈萃相關(guān)研究[12-13]，筆者認(rèn)為P53、c-erbB-2對于乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的病情影響可能與下列幾個方面的因素有關(guān)：(1)P53的上升能夠提高導(dǎo)管上皮細(xì)胞內(nèi)的MAPK信號通路的激活，促進(jìn)了癌細(xì)胞轉(zhuǎn)錄活性的增強(qiáng)；(2)c-erbB-2不僅能夠促進(jìn)乳腺上皮細(xì)胞的異常增殖過程，同時還能夠促進(jìn)新生微血管的形成，提高腫瘤病灶組織的血流灌注水平。賴靜等[14]也認(rèn)為，在乳腺癌患者病灶組織中，P53的表達(dá)陽性率可平均上升30%以上，同時在臨床分期較晚或者遠(yuǎn)期病死率較高的導(dǎo)管癌患者中，P53的表達(dá)陽性率可進(jìn)一步的上升。bcl-2在乳腺癌病灶組織中的表達(dá)陽性率顯著的下降，提示了bcl-2在乳腺癌的發(fā)生過程中可能具有一定的保護(hù)性作用，這主要由于bcl-2的表達(dá)能夠維持乳腺上皮細(xì)胞的增殖，抑制癌細(xì)胞的過度增殖和浸潤過程，并促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡過程。在分化程度低、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤深度較深或者臨床分期較晚的乳腺癌患者中，P53、c-erbB-2的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的上升，同時bcl-2的表達(dá)濃度可進(jìn)一步的下降，提示不同的指標(biāo)與乳腺癌患者的臨床病理特征密切相關(guān)，這主要由于P53、c-erbB-2的表達(dá)能夠改變癌細(xì)胞的生物學(xué)活性，影響到癌細(xì)胞對于淋巴結(jié)的黏附過程[15]。而bcl-2的表達(dá)濃度的下降失去了其對于癌細(xì)胞的細(xì)胞周期的穩(wěn)定作用。但部分研究者認(rèn)為bcl-2等指標(biāo)的改變與淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移并無關(guān)系，存在不同的結(jié)論可能與免疫組化相關(guān)指標(biāo)的檢測靈敏度的差異等有關(guān)。回歸分析也可見，分化程度和TNM分期是影響P53、bcl-2及c-erbB-2陽性表達(dá)的因素，進(jìn)一步提示了P53、c-erbB-2等與乳腺癌的病情關(guān)系。

綜上所述，乳腺浸潤性導(dǎo)管癌患者組織內(nèi)P53、c-erbB-2蛋白陽性表達(dá)率較高，bcl-2陽性表達(dá)率較低，分化程度和TNM分期是其表達(dá)的影響因素。