孫亞波

（遼寧省畜牧科學研究院，遼寧 遼陽 111000）

絨山羊的肢蹄病是指其四肢膝關節(jié)腫大、蹄部變形、蹄葉炎，表現(xiàn)為無法站立、跛行、蹄夾異常生長，常常跪地休息和采食，行走運動障礙。一般在舍飼養(yǎng)殖條件下發(fā)病較多，影響絨山羊正常的運動、采食、配種，嚴重時長時間臥地不起、食欲下降、采食量減少、消瘦。肢蹄病在舍飼絨山羊生產(chǎn)中較常見，據(jù)孫亞波2017年[1]對遼寧東部山區(qū)的調研發(fā)現(xiàn)，舍飼圈養(yǎng)方式下絨山羊肢蹄病發(fā)病率達到3.06%，特別是種公羊發(fā)生肢蹄病后嚴重影響配種和采精，造成養(yǎng)殖效益降低。本研究采用補飼微量元素鋅的方式對未發(fā)生肢蹄病的健康絨山羊開展營養(yǎng)調控研究，探討鋅在高精料日糧飼養(yǎng)中對肢蹄病的預防作用。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及試驗設計選擇未發(fā)生肢蹄病的舍飼遼寧絨山羊母羊15只，隨機分為5組，其中1組為對照組，2組至5組為試驗組，飼喂蛋氨酸鋅見表1。日糧其他營養(yǎng)水平相同，見表2。試驗日糧制成TMR日糧，每天飼喂2次，自由采食和飲水。預試期15 d，試驗期60 d。

表1 試驗設計Table 1Design of experiment

表2 試驗日糧配方Table 2 Rations of experiment

1.2 樣品采集、指標測定在試驗進行第60天，采集血液10 mL，以3 500 r/min離心10 min，血清置于-20℃冷凍保存。

血清測定指標：鋅、胰島素（INS）、胰高血糖素（PG）、葡萄糖（GLU）、尿酸（UA）、尿素氮（Urea）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、超氧化物岐化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）、氧化型谷胱甘肽（GSSG）、丙二醛（MDA）、Ⅱ型膠原羧基端端肽（CTX-Ⅱ）、ⅡA型膠原氨基端端肽（PⅡANP）、軟骨寡聚基質蛋白（COMP）。

測定方法：INS、PG采用放射性免疫法測定；UA、Urea 采用比色法；GSH-Px、SOD、CAT、GSSG、MDA采用化學比色法測定；CTX-Ⅱ、PⅡANP、COMP采用酶聯(lián)免疫法測定。以上試劑盒由北京華英生物技術研究所測定提供。

1.3 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析本研究數(shù)據(jù)采用SPSS 13.0軟件的One-Way ANOVA過程進行統(tǒng)計分析，結果以平均值±標準誤形式表示。

2 結果與分析

2.1 蛋氨酸鋅對機體糖代謝和氮代謝指標的影響健康絨山羊分別飼喂不同水平的蛋氨酸鋅，血清鋅、胰島素、胰高血糖素、尿素氮、尿酸結果見表3。

表3 補飼蛋氨酸鋅對血清氮代謝和糖代謝指標的影響Table 3 Serum indicators of nitrogen and glucose metabolism in health cashmere goat fed Zn-Met

血清鋅含量隨氨基酸鋅補飼量的增加而明顯增加，試驗組血清鋅水平均明顯高于對照組，其中對照組、試驗2組與試驗3、4、5組均差異極顯著（P＜0.01），試驗3組與試驗4組和5組差異顯著（P＜0.05）。

血糖水平隨著蛋氨酸鋅補飼量的增加呈升高趨勢，對照組與試驗3組差異顯著（P＜0.05）、與試驗4組和5組差異極顯著（P＜0.01）；試驗2組與試驗4組和5組差異顯著（P＜0.05）。血清INS水平隨著蛋氨酸鋅補飼量的增加呈降低趨勢，但是各試驗組之間差異不顯著（P＞0.05）。血清PG水平隨蛋氨酸鋅補飼量增加而呈現(xiàn)降低趨勢，其中對照組顯著（P＜0.05）高于試驗3組、4組。

血清UA含量隨著蛋氨酸鋅補飼量的增加而呈降總體低趨勢，其中對照組、試驗2組均與試驗4組、5組差異極顯著（P＜0.01）。血清Urea水平隨著氨酸鋅補飼量的增加而呈總體增加趨勢，其中試驗1組和2組與試驗3組、4組、5組均差異顯著（P＜0.05）。

2.2 蛋氨酸鋅對血清抗氧化指標的影響 健康絨山羊分別飼喂不同水平蛋氨酸鋅，血清抗氧化指標結果見表4。

血清GSH-px活性隨著蛋氨酸鋅補飼量的增加而明顯增加，其中試驗4組最高，并與對照組差異顯著（P＜0.05）。血清SOD和CAT的活性隨著蛋氨酸鋅補飼量的增加而呈增加趨勢，這兩種酶的活性均表現(xiàn)為對照組與試驗4組和5組差異顯著（P＜0.05），其他各組間均差異不顯著（P＞0.05）。

表4 補飼蛋氨酸鋅對血清抗氧化指標的影響Table 4 Serum antioxidant stress enzymes inditators in health cashmere goat fed Zn-Met

血清MDA含量略有降低。血清GSSG水平隨著蛋氨酸鋅補飼量的增加呈升高趨勢，對照組與試驗5組差異顯著（P＜0.05），其他各組間均差異不顯著（P＞0.05）。

2.3 蛋氨酸鋅對血清內(nèi)肢/蹄關節(jié)損傷生物標記物的影響健康絨山羊分別飼喂不同水平的蛋氨酸鋅，血清內(nèi)骨關節(jié)損傷生物標記物測定結果見表5。

血清COMP、CTX-Ⅱ、PⅡANP含量都隨著蛋氨酸鋅補飼量的增加而呈降低趨勢，但是均表現(xiàn)為各組間差異不顯著（P＞0.05）。

表5 補飼蛋氨酸鋅對血清骨關節(jié)損傷生物標記物的影響Table 5Serum biological markers of bone and jont injuries in health cashmere goat fed Zn-Met

3 討論

在本研究中，以蛋氨酸鋅的形式給遼寧絨山羊補飼鋅，對氮代謝和糖代謝有一定的影響，表現(xiàn)為隨著蛋氨酸鋅補飼量的增加血清INS和PG降低，血糖略升高。鋅在胰島素的合成、貯存和釋放過程中都起重要作用，胰島素原在高爾基體內(nèi)與鋅結合形成六聚體，之后經(jīng)過轉運、酶解、濃縮形成β-顆粒的核心，貯存于β-顆粒中。胰腺β-細胞分泌INS的同時也分泌大量鋅，當血液中的可利用的游離鋅充足，并且β-細胞內(nèi)鋅充足，則INS分泌減少[2]。本試驗隨著日糧補鋅量增加（血清鋅水平增加），血清胰島素含量呈下降趨勢，與上述理論是相符的。在INS水平降低的影響下，血糖升高，PG分泌受到抑制，于是PG也降低。血清UA水平降低表明蛋白質分解代謝降低、氮的合成代謝（即沉積利用）增強，氮代謝向正平衡方向轉變。

微量元素鋅是SOD組成成分，在清除自由基、保護細胞膜避免氧化損害等方面具有不可替代的作用。鐘映梅等（2007）[3]對鵝的研究表明，鋅能提高鵝血清、肝臟和脾臟內(nèi)的SOD活性，降低了MDA含量。張春香等（2015）[4]研究表明，公羊補飼納米鋅能提高精漿Cu-Zn SOD活性、GPxs活性和總抗氧化能力，并且降低了MDA的含量。谷胱甘肽（GSH）是由谷氨酸半胱氨酸和甘氨酸組成，谷其活性形式為還原型谷胱甘肽，其巰基具有還原性，可作為還原劑保護機體蛋白質或酶分子中巰基免遭氧化。在GSH-px的催化下，GSH可還原細胞內(nèi)產(chǎn)生的過氧化氫，使其變成H2O，GSH被氧化成氧化型谷胱甘肽（GSSG）。因此GSSG含量反應了機體GSH-px的抗氧化結果。本研究中每只羊補飼鋅120～150 mg/d時，GSH-px、Cu-Zn SOD、CAT、GSSG的活性較高，MDA的含量則較低。

COMP是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種細胞外基質蛋白，在人類醫(yī)學骨科學研究中將其作為診斷關節(jié)退變的重要生物標記物[5]。Ⅱ型膠原是軟骨基質的主要成分，當關節(jié)軟骨受損時Ⅱ型膠原降解產(chǎn)生CTX-Ⅱ，因此血清中CTX-Ⅱ含量是綜合反映關節(jié)軟骨損傷程度的生物標志物[6-7]。PⅡANP是ⅡA型膠原前體（即前膠原ⅡA）的一段半胱氨酸富集區(qū)，在軟骨損傷時前膠原ⅡA的mRNA表達量增加，因此PIIANP也是骨關節(jié)損傷的標志物。趙雪軍（2015）[8]對奶牛肢蹄健康的相關研究中將COMP、CTX-Ⅱ和PⅡANP列為肢蹄病研究的關鍵指標。在本研究中，隨著蛋氨酸鋅補飼量增加COMP、CTX-Ⅱ和PⅡANP略呈降低趨勢，但是均無顯著差異，這表明在健康絨山羊日糧中添加蛋氨酸鋅對預防舍飼羊的骨關節(jié)損傷和肢蹄病的發(fā)生有一定作用，其中試驗5組的COMP、CTX-Ⅱ和PⅡANP含量均最低。

4 結論

根據(jù)本研究可知，對于未發(fā)生肢蹄病的絨山羊飼喂蛋氨酸鋅，調節(jié)了機體的糖代謝和氮代謝，促進了機體抗氧化能力的提高，對于維護骨關節(jié)的健康和預防肢蹄病的發(fā)生有一定作用。試驗結果表明，補飼量在120～150 mg/d時效果較好。