彭微　袁桂　劉潔　黃旭

【摘 要】目的：探究Rb、p16和cyclinD1基因在早期胃癌組織中的表達(dá)及臨床意義。方法：選取2017年8月-2018年4月我院收治的50例胃部疾病患者， 將他們分為兩組，對(duì)照組為32例良性胃部疾病患者，其中有15例患者胃粘膜細(xì)胞異型增生，17例患者的胃粘膜細(xì)胞正常；研究組為18例早期胃癌患者。觀察比較兩組患者體內(nèi)Rb、p16和cyclinD1基因的表達(dá)水平差異以及不同種類細(xì)胞內(nèi)陽(yáng)性表達(dá)率。結(jié)果：研究組患者中cyclin D1基因的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<0.05），Rb與p16的基因表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05）；研究組患腫瘤細(xì)胞中cyclin D1基因表達(dá)的陽(yáng)性率高于異型增生細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），Rb與p16的基因表達(dá)陽(yáng)性率低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：廣大醫(yī)學(xué)工作者應(yīng)該加大對(duì)cyclinD1、p16和Rb基因表達(dá)機(jī)制及其調(diào)控癌癥發(fā)生機(jī)制的研究，不斷創(chuàng)新早期胃癌的治療方法，為臨床上通過(guò)調(diào)控基因表達(dá)途徑來(lái)治療早期胃癌提供一種有效的依據(jù)。

【關(guān)鍵詞】Rb；p16；cyclinD1；早期胃癌；

【中圖分類號(hào)】R735.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】1672-3783（2019）01-03--01

胃癌是我國(guó)臨床上比較常見(jiàn)的一種惡性腫瘤疾病，嚴(yán)重威脅著人類的身體健康，尤其是近幾年隨著人們生活環(huán)境的變化，胃癌的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)。本文探究分析了cyclinD1、p16和Rb基因在早期胃癌組織中的表達(dá)及其臨床意義，旨在為臨床上提供一種有效的早期胃癌的治療依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2017年8月-2018年4月我院收治的50例胃部疾病患者， 依據(jù)他們的病情將他們隨機(jī)分為兩組，對(duì)照組為32例良性胃部疾病患者，其中17例胃粘膜細(xì)胞正常的患者中男10例，女7例，患者的年齡為22—85歲，平均年齡為（60.1±4.5）歲， 15例胃粘膜細(xì)胞異型增生患者中男7例，女8例，患者的年齡為20—80，平均年齡為（57.1±2.5）歲。研究組為18例早期胃癌患者男10例，女8例，患者的年齡為21—78歲，平均年齡為（53.6±6.5）歲。兩組患者在年齡、性別、身體狀況等方面比較差異均不具有可比性（P>0.05），患者及其家屬均知情同意本研究，同時(shí)經(jīng)過(guò)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 方法

首先，采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）法擴(kuò)增cyclinD1、p16和Rb基因，具體的步驟為：①變性：cyclinD1、p16和Rb基因模板DNA在90～95℃下加熱一定時(shí)間后，使之變性成為單鏈；②退火（復(fù)性）：降低溫度到50～60℃，使引物與模板DNA單鏈的互補(bǔ)序列配對(duì)結(jié)合；③延伸：調(diào)整溫度到70～75℃，使DNA模板與引物在DNA聚合酶的作用下相結(jié)合，并以dNTP為反應(yīng)原料重新合成DNA雙鏈，重復(fù)循環(huán)此過(guò)程。之后采用免疫組化S-P法，即鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連結(jié)法檢測(cè)所有患者體內(nèi)cyclinD1、p16和Rb基因的表達(dá)。具體方法：將事先準(zhǔn)備的患者的切片標(biāo)本依次進(jìn)行常規(guī)脫蠟至水、消除標(biāo)本中內(nèi)源性的過(guò)氧化物酶的活性，放置室溫下在3%的H2O2中孵育 5-10 分鐘，接下來(lái)用緩沖液水洗，再經(jīng)一抗標(biāo)記、水洗以及辣根酶酶標(biāo)記二抗、沖洗后染色。cyclinD1、p16和Rbcyclin 抗體的稀釋倍數(shù)分別度為75倍、50倍、100倍，陽(yáng)性對(duì)照采取事先已經(jīng)明確測(cè)定為陽(yáng)性的組織切片，用磷酸鹽緩沖液代替一抗做陰性對(duì)照。

1.3 觀察指標(biāo)

陽(yáng)性：患者的胃組織標(biāo)本上細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)均一的棕黃色顆粒；陰性：患者的細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)內(nèi)沒(méi)有出現(xiàn)棕黃色顆粒；

陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為弱陽(yáng)性：患者組織切片內(nèi)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)小于25% ；陽(yáng)性：患者組織切片內(nèi)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)在25%～55%； 強(qiáng)陽(yáng)性：患者組織切片內(nèi)的陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)細(xì)胞數(shù)大于55%。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS18.0進(jìn)行分析，其中計(jì)數(shù)進(jìn)行X2（%）檢驗(yàn)，計(jì)量進(jìn)行t檢測(cè)（）檢驗(yàn)， P<0.05提示有顯著差異。

2 結(jié)果

研究組患者中cyclin D1基因的表達(dá)水平明顯高于對(duì)照組（P<0.05），Rb與p16的基因表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組（P<0.05），具體見(jiàn)表一。

研究組患者早期胃癌組織細(xì)胞中cyclin D1基因表達(dá)的陽(yáng)性率高于異型增生組織細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），Rb與p16的基因表達(dá)陽(yáng)性率低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），具體見(jiàn)表2。

3 討論

胃癌是我國(guó)臨床上比較常見(jiàn)的一種惡性腫瘤疾病，具有較高的發(fā)病率，在胃癌的發(fā)生的早期對(duì)患者進(jìn)行治療具有相對(duì)較高的治愈率。

綜上所述，廣大醫(yī)學(xué)工作者應(yīng)該加大對(duì)cyclinD1、p16和Rb基因表達(dá)機(jī)制及其調(diào)控癌癥發(fā)生機(jī)制的研究，不斷創(chuàng)新早期胃癌的治療方法，為臨床上通過(guò)調(diào)控基因表達(dá)途徑來(lái)治療早期胃癌提供一種有效的依據(jù)。

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