周子人　李貴華　余林

【摘 要】 目的：了解當(dāng)下時間段轄區(qū)內(nèi)流感流行的類別。方法：抽取轄區(qū)某段時間內(nèi)流感樣病例，通過實(shí)時熒光PCR檢測方法對所采病例樣本進(jìn)行檢測，確證是否為流感病例，并對陽性病例進(jìn)行流感類別分型。結(jié)果：在5所醫(yī)院共收集流感樣病例標(biāo)本41例，有效標(biāo)本40例，甲型流感病例30例，陽性率為75<%，全部為甲流H1N1型，乙型流感病例1例，為乙流Yamagata型。結(jié)論：轄區(qū)內(nèi)主要流行群為甲流H1N1型，發(fā)現(xiàn)1例乙流病例，不是轄區(qū)內(nèi)主要流行群，未發(fā)現(xiàn)H7N9流感病例。

【關(guān)鍵詞】 流感 流感樣病例 H1N1 H7N9

Abstract Objective： Understanding the influenza epidemic category in jurisdictions in the current time. Methods： Detecting the samples by real-time PCR. Classifying the positive samples. Results： A total of 41 cases of influenza-like illness cases are collected in 5 hospitals， 40 cases are valid samples. 30 cases are influenza A（ the positive rate was 75%）， which all are H1N1 type. 1 case is influenza B， which is Yamaiata type. Conclusion： The main epidemic group is H1N1of influenza A. 1 case of Yamagata of influenza B is found， which is not the main epidemic group in the area. H7N9 has not been found.

Keywords Infuenza； Influenza-like illness case； H1N1； H7N9

【中圖分類號】R249.8 【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A 【文章編號】1672-3783（2019）01-03--01

流行性感冒（ influenza，以下簡稱流感） 是由流感病毒引起的一種傳染性強(qiáng)、傳播速度快的急性呼吸道傳染病，是WHO實(shí)行全球監(jiān)測的傳染病[1]，全球每年有5～10%的成年人和20～30%的兒童感染流感[2]，學(xué)齡前兒童（5歲及以下）更是流感的易感人群和高發(fā)人群[3]。根據(jù)病毒的核蛋白、M1蛋白抗原性和基因特性等方面的差異，流感病毒可分為甲、乙、丙三型，其中甲型最易發(fā)生變異，常引起大流行和中小流行；乙型流感病毒變異較少，感染人類后， 可引起暴發(fā)或小流行；丙型較穩(wěn)定，多為散發(fā)病例[4-5]。禽流感則是甲型流感病毒感染禽類后引起的禽類呼吸道感染性疾病，其中高致病性禽流感病毒突破種屬屏障感染人類后，稱為人感染高致病性禽流感。

2017年5月，郫都區(qū)轄區(qū)內(nèi)發(fā)生人感染高致病性禽流感H7N9疫情，出現(xiàn)人感染高致病性禽流感H7N9患者，且出現(xiàn)死亡病例，在禽類相關(guān)的環(huán)境，如活禽交易市場、菜市場宰殺點(diǎn)、農(nóng)貿(mào)市場排污溝內(nèi)等多次檢測出高致病性禽流感H7N9病毒核酸，經(jīng)過衛(wèi)生部門的努力和各相關(guān)單位的配合，采取了嚴(yán)格的防控措施，疫情得到控制，并于2017年7月終止疫情。隨著秋冬季節(jié)的到來，流感進(jìn)入常規(guī)發(fā)病高峰時節(jié)，醫(yī)院門診流感樣病例明顯增多，2017年底，全國出現(xiàn)了一次乙型Yamagata型流感發(fā)病小高峰，作為剛剛經(jīng)歷過禽流感疫情的區(qū)域，經(jīng)過媒體對流感疫情的報道，政府和群眾對相關(guān)信息關(guān)注度較高。為進(jìn)一步了解和掌握轄區(qū)內(nèi)流感發(fā)病具體情況，區(qū)疾控中心選取部分醫(yī)院，對流感樣病例進(jìn)行采樣和檢測，對轄區(qū)內(nèi)流感流行情況進(jìn)行初步的了解，為評價和指導(dǎo)今后的流感防控工作提供科學(xué)的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標(biāo)本來源 分區(qū)域選取轄區(qū)內(nèi)主要醫(yī)療機(jī)構(gòu)，集中時間段（3天內(nèi)）收集流感樣病例（ influenzalike illness，ILI）咽拭子，送至區(qū)疾控中心實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行核酸檢測。41份樣品均來自轄區(qū)內(nèi)固定居住人群，其中12歲以下兒童19人，成人22。

1.1.2 試劑 流感核酸檢測試劑盒（甲、乙、丙型流感核酸檢測試劑盒，H1N1/H3雙通道流感核酸檢測試劑盒，H7N9雙通道流感核酸檢測試劑盒，乙型流感Victoria/Yamagata分型檢測試劑盒，H5型流感核酸檢測試劑盒，H9型流感核酸檢測試劑盒）和人核糖核酸酶P核酸檢測試劑盒均來自碩世生物。核酸提取試劑來自Promega。

1.1.3 儀器 ROCHE 480Ⅱ型實(shí)時熒光PCR儀，Promega全自動核酸提取儀，A2型生物安全柜。

1.2 方法

1.2.1 核酸提取 使用Promega全自動核酸提取儀進(jìn)行提取，病毒采樣管震蕩混勻15s，取200μl樣品加入到無RNA酶的EP管中，再加入200μl細(xì)胞裂解液和20μl蛋白酶K，輕輕吹打混勻，室溫靜置15分鐘后加入到核酸提取條中，放入全自動核酸提取儀進(jìn)行自動提取。

1.2.2 核酸檢測 對樣品先進(jìn)行甲、乙、丙三型流感病毒分型檢測，陽性樣品再進(jìn)行甲、乙、丙型流感具體分型；陰性樣品進(jìn)行人核糖核酸酶P（RNP）核酸檢測，陽性樣品為有效樣品，表明采集到口腔上皮細(xì)胞，采樣合格，陰性樣品未采集到人口腔上皮細(xì)胞，為無效樣品，最后不納入數(shù)據(jù)統(tǒng)計。PCR反應(yīng)體系均為25μl，其中PCR 反應(yīng)液20μl，模板5μl ；實(shí)時熒光PCR 擴(kuò)增條件均為：50℃ 30min、95℃ 5min；95℃ 10s、55℃ 40s（在此階段結(jié)束時收集熒光信號），循環(huán)45次，F(xiàn)AM通道和VIC通道采集熒光信號，其中FAM通道采集H1N1、H5、H7、H9信號，VIC通道采集H3、N9信號，陽性對照Ct≤30，陰性對照無擴(kuò)增曲線時實(shí)驗(yàn)有效。樣品Ct值<35時，判定為陽性樣品；Ct值>38時判定為陰性樣品；35≤Ct≤38時，重復(fù)檢測一次，Ct值<35或仍在此范圍內(nèi)判定為陽性樣品，；Ct值>38判定為陰性樣品。

2 結(jié)果

2.1 RNP檢測 12號樣品RNP檢測陰性，未采集到人口腔上皮細(xì)胞，為無效樣品，予以剔除，結(jié)果不納入最后統(tǒng)計。12號樣品為成人組樣品。

2.2 甲、乙、丙三型流感病毒分型檢測 40份樣品進(jìn)行流感分型檢測，其中甲型流感病毒核酸陽性樣品30份，陽性率為75%，其中12歲及以下兒童15例，陽性率為37.5%，成人15例，陽性率也為37.5%；乙型流感病毒核酸陽性樣品1份，陽性率為2.5%；無丙型流感病毒核酸陽性樣品；流感病毒核酸陰性樣品10份。H1N1流感病毒核酸實(shí)時熒光

2.3 甲型流感病毒分型檢測 30份甲型流感病毒核酸陽性樣品同時進(jìn)行H1N1、H3、H5、H7N9、H9甲流分型檢測，30份甲型流感病毒樣品均為H1N1型甲流，具體年齡組分布見表1，H1N1流感病毒實(shí)時熒光PCR檢測結(jié)果見圖1。

2.4 乙型流感病毒分型檢測 對乙型流感病毒核酸陽性樣品進(jìn)行Victoria/Yamagata分型檢測，結(jié)果顯示為Yamagata型乙型流感病毒。

3 討論

2017年5月郫都區(qū)轄區(qū)內(nèi)出現(xiàn)了人感染高致病性禽流感H7N9疫情，且出現(xiàn)重癥死亡病例，相關(guān)部門采取了一系列預(yù)防控制措施，因此轄區(qū)內(nèi)各部門和民眾對流感關(guān)注度較高。進(jìn)入秋冬季后，轄區(qū)內(nèi)各醫(yī)院流感樣病例數(shù)明顯增多，政府部門和民眾對此均高度關(guān)注。以往研究表明，冬春季節(jié)為華南地區(qū)流感流行的傳統(tǒng)高發(fā)季節(jié)[6-8]，在轄區(qū)內(nèi)對流感樣病例做一次小范圍的調(diào)查，摸清轄區(qū)內(nèi)流感流行的主要型別，對流感的防控工作和疫苗接種計劃有很大的指導(dǎo)意義。經(jīng)調(diào)查顯示，所采集的流感樣病例標(biāo)本流感核酸陽性率為77.5%，其中甲型流感H1N1核酸陽性 30例，檢出率為75%，為轄區(qū)內(nèi)主要流行的流感型別，同時未發(fā)現(xiàn)其他甲型流感型別，表明在郫都區(qū)轄區(qū)范圍內(nèi)，主要流感流行群為甲型流感H1N1型，且流行型別單一，未見其他甲型流感型別，通過針對性疫苗接種和防控措施，能夠有效的預(yù)防和控制轄區(qū)內(nèi)流感疫情的爆發(fā)。通過粗略的年齡組陽性率對比研究，成人和兒童的甲型流感H1N1核酸陽性檢出率沒有統(tǒng)計學(xué)意義，表明甲型流感H1N1在轄區(qū)內(nèi)全人群分布較為均勻，沒有年齡差別，為了更好的預(yù)防流感病毒感染，控制流感疫情發(fā)生，各年齡人群均需要接種流感疫苗；乙型流感病毒核酸檢出1例，為乙型流感Yamagata型，與媒體報道的秋冬季國內(nèi)乙型流感以Yamagata型流行為主相符，但在本次調(diào)查中，乙型流感病例僅檢出一例，表明其為散發(fā)病例，并未在轄區(qū)內(nèi)流行，與媒體報道的乙型流感流行不符；此次小范圍調(diào)查中未發(fā)現(xiàn)高致病性禽流感H7N9病例，表明經(jīng)過2017年的各種防疫措施，如關(guān)閉活禽交易市場、禁止市場活禽點(diǎn)殺，以及全年度的環(huán)境流感核酸監(jiān)測等取得了很好的效果，有效的控制了甲型H7N9流感疫情。

通過本次研究，基本了解了轄區(qū)內(nèi)主要的流感流行類別，達(dá)到了進(jìn)行該項(xiàng)調(diào)查研究的目的，為轄區(qū)內(nèi)疫苗接種計劃和進(jìn)一步的疫情防控提供了基本信息，對轄區(qū)內(nèi)的流感防控工作具有很大意義。

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