張 爽 蔡迪鳴

（葫蘆島市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心，遼寧 葫蘆島 125000）

頭孢地嗪鈉是常見(jiàn)第三代頭孢菌素之一，其具有較強(qiáng)的免疫功能。據(jù)有關(guān)資料顯示[1]，頭孢地嗪鈉可使巨噬細(xì)胞被激活，促進(jìn)殺菌率及吞噬活性的提高。該藥物具有抵抗革蘭陰性菌與革蘭陽(yáng)性菌作用，而且有助于穩(wěn)定β-內(nèi)酰胺酶、青霉素酶及頭孢菌素酶等[2]。中國(guó)藥典（ChP）及日本藥典（JP）中均記錄了頭孢地嗪鈉[3]。通過(guò)JP方法對(duì)頭孢地嗪鈉雜質(zhì)進(jìn)行分析的過(guò)程中，可知頭孢地嗪鈉具有較低的雜質(zhì)水平，但是雜質(zhì)數(shù)量較多，JP要想采用高效液相-質(zhì)譜系統(tǒng)（HPLCMS）分析雜志，則需要轉(zhuǎn)換磷酸鹽緩沖體系，使其以可發(fā)揮性的流動(dòng)相體系呈現(xiàn)出來(lái)[4]。本次研究主要針對(duì)頭孢地嗪鈉含量與有關(guān)物質(zhì)測(cè)定方面進(jìn)行分析，報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器：Milli-Q超純水系統(tǒng)；WatersAlliance2695 高效液相色譜儀；Platisil 18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色譜柱；AT260分析天平；MettlerToledo320pH計(jì)。

1.2 試藥：樣品，乙腈，頭孢地嗪鈉對(duì)照品（含量90.9%），醋酸銨，甲酸，雜質(zhì)對(duì)照組[頭孢噻肟?jī)?nèi)脂（L）、7-氨基頭孢烷酸（7-ACA）、頭孢噻肟、頭孢地嗪母核（3-MTA）、去乙酰氧頭孢噻肟（DSF）、頭孢地嗪側(cè)鏈酸（MMTA）及去乙酰頭孢噻肟（DF）]。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件：色譜柱選擇P118（250 mm×4 mm，5 μm），流動(dòng)相A與流動(dòng)相B分別是醋酸銨溶液（甲酸調(diào)整至pH 3.2，2000 mL水溶解，醋酸銨1.9 g）與乙腈，流速設(shè)置為每分鐘1.0 mL，檢測(cè)波長(zhǎng)及柱溫分別為254 nm和35 ℃；進(jìn)樣量設(shè)置為20 μL。流動(dòng)相與洗脫程序如下：0～17 min，流動(dòng)相A與流動(dòng)相B分別是81%和19%；17～27 min，流動(dòng)相A與流動(dòng)相B分別為81%→60%和19%→40%；27～28 min，流動(dòng)相A與流動(dòng)相B分別是60%→80%和40%→19%；28～35 min，流動(dòng)相A與流動(dòng)相B分別是81%和19%[5]。

2.2 制備溶液

2.2.1 頭孢地嗪鈉供試品溶液：選取適量本品，精密稱(chēng)量，添加乙腈-水混合溶液，比例為19:81，由此進(jìn)行溶解，制成0.5 μg/mL溶液，振搖均勻，獲得供試品溶液。

2.2.2 頭孢地嗪鈉對(duì)照品溶液：選取適量頭孢地平對(duì)照品，精密稱(chēng)量，添加乙腈-水混合溶液，比例為19∶81，制定0.5 μg/mL溶液，振搖均勻，獲得成品。

2.2.3 測(cè)定含量：供試品溶液及對(duì)照品溶液進(jìn)樣量20 μL，分別注入液相色譜儀，將色譜圖記錄，根據(jù)外標(biāo)法對(duì)樣品中頭孢地嗪（C20H20N6O7S4）含量進(jìn)行計(jì)算。

2.2.4 檢測(cè)有關(guān)物質(zhì)：于100 mL量瓶中置入經(jīng)過(guò)精密量取的1 mL對(duì)照品溶液，采用稀釋液進(jìn)行稀釋直至刻度，稀釋液為乙腈-水（19∶81），振搖均勻，制取溶液為對(duì)照溶液；于液相色譜儀中注入20 μL對(duì)照溶液，對(duì)檢測(cè)儀器靈敏度進(jìn)行調(diào)節(jié)，確保主成分色譜峰的峰高最低為滿(mǎn)量程的10%，后于液相色譜儀中注入20 μL供試品溶液，將色譜圖記錄下來(lái)，頭孢地嗪峰及相鄰雜質(zhì)峰分離度應(yīng)與要求相符。如果供試品溶液存在雜質(zhì)峰，則根據(jù)1%自身對(duì)照法準(zhǔn)確計(jì)算。

2.3 方法驗(yàn)證分析

2.3.1 考察專(zhuān)屬性：為了對(duì)本方法能夠?qū)?chǔ)存期間即生產(chǎn)期間產(chǎn)生的雜質(zhì)進(jìn)行有效檢測(cè)，以貯存條件、結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及合成工藝等為依據(jù)開(kāi)展分離度考察實(shí)驗(yàn)、強(qiáng)制降解實(shí)驗(yàn)。①?gòu)?qiáng)制降解實(shí)驗(yàn)：高溫破壞樣品粉末，溫度設(shè)置為60 ℃，紫外光照破壞（10 d，UV254 nm），強(qiáng)酸（10 min，1 mol/L鹽酸溶液），強(qiáng)氧化（15 min，35%過(guò)氧化氫溶液），強(qiáng)堿（5 min，0.1 mol/L氫氧化鉀溶液），在上述環(huán)境中破壞。結(jié)果提示：于氧化條件及堿性條件中，頭孢地嗪降解度提高，于光照環(huán)境中，顯著增加了異構(gòu)體2和MMTA；堿性環(huán)境中，極易形成異構(gòu)體4、異構(gòu)體3及異構(gòu)體1；處于酸性環(huán)境中，顯著增加了雜質(zhì)L。強(qiáng)制降解形成的雜質(zhì)可完全分離主成分。②考察分離度：混合溶解各雜質(zhì)與頭孢地嗪鈉制成的對(duì)照品，溶解后，考察分離度，根據(jù)考察本方法的可行性，對(duì)生產(chǎn)工藝中形成的雜質(zhì)進(jìn)行監(jiān)測(cè)。頭孢地嗪鈉與雜質(zhì)混合液及頭孢地嗪鈉供試品溶液實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，可有效分離各雜質(zhì)。根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，該方法專(zhuān)屬性較強(qiáng)，可用于檢測(cè)頭孢地嗪鈉保存及生產(chǎn)期間有關(guān)物質(zhì)。

2.3.2 測(cè)定定量限與檢出限：精密稱(chēng)量適量頭孢地嗪鈉，通過(guò)乙腈-水混合溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)纬砂?.044，0.13 μg/mL的頭孢地嗪鈉溶液，重復(fù)進(jìn)行33次實(shí)驗(yàn)。計(jì)算公式為S/N=3，計(jì)算結(jié)果如下：0.056 μg/mL為頭孢地嗪鈉檢測(cè)限；根據(jù)S/N=10對(duì)頭孢地嗪鈉定量限進(jìn)行計(jì)算，結(jié)果為0.22 μg/mL。

2.3.3 考察線(xiàn)性關(guān)系：對(duì)頭孢地嗪鈉對(duì)照作品進(jìn)行準(zhǔn)確稱(chēng)量，通過(guò)乙腈-水混合溶液進(jìn)行稀釋?zhuān)纬砂^孢地嗪鈉不同濃度的對(duì)照品溶液，分別是0.1479、619.7、0.4929、599.4、4.929、505.4、9.858、411.1、24.64、388.2、49.29、306.9、98.58、218.7，橫坐標(biāo)為濃度C（μg/mL），縱坐標(biāo)為峰面積A，根據(jù)上述二者做回歸直線(xiàn)，回歸方程為A=34352843.7C+9506.5，線(xiàn)性范圍為0.1479～769.2 mg/mL，r=1.0000。

2.3.4 準(zhǔn)確度實(shí)驗(yàn)：共稱(chēng)取9份頭孢地嗪鈉對(duì)照品，通過(guò)乙腈-水混合溶液分別制取50%、100%和120%溶液。根據(jù)2.2.3方法對(duì)樣品含量進(jìn)行檢測(cè)。

2.3.5 重復(fù)性試驗(yàn)即精密度實(shí)驗(yàn)：準(zhǔn)確稱(chēng)量50.0 mg頭孢地嗪鈉對(duì)照品，將其分為6分，溶劑為乙腈-水混合液，形成0.5 mg/mL溶液，均勻搖晃。將樣品注入至液相色譜儀中，將峰面積記錄，并對(duì)頭孢地嗪鈉相應(yīng)因子進(jìn)行計(jì)算，獲取結(jié)果為RSD是0.13%，其中一份進(jìn)行連續(xù)6次計(jì)算，將峰面積記錄下來(lái)。頭孢地嗪鈉峰面積RSD計(jì)算結(jié)果是0.2%，結(jié)果提示，該方法具有較高的精密度。

2.3.6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)：分別采用流動(dòng)相溶解頭孢地嗪鈉，將其置于20 ℃環(huán)境中檢測(cè)，時(shí)間分別是80、160、240、320、360、420 min，對(duì)每種雜質(zhì)改變狀況進(jìn)行考察。結(jié)果提示，通過(guò)流動(dòng)相溶解的樣品溶液穩(wěn)定性較差，其中存在諸多雜質(zhì)，從整個(gè)方面來(lái)看，雜質(zhì)提高大約3.2%。通過(guò)乙腈-水及水溶解的樣品溶液穩(wěn)定性較強(qiáng)，總雜質(zhì)量改變?cè)?.1%以下。處于流動(dòng)相中的樣品降解速度明顯，而通過(guò)乙腈-水溶解的樣品溶液盡管具有較強(qiáng)的穩(wěn)定性，但是由于空白峰值的作用，所以需要通過(guò)乙腈-水對(duì)樣品進(jìn)行溶解。

2.3.7 耐用性實(shí)驗(yàn)：實(shí)驗(yàn)工具為Gemini18（5 μm，250 mm×4.6 mm）色譜柱，確保每種雜質(zhì)的分離及保留狀況與Platisil柱相符。

3 討 論

根據(jù)本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，通過(guò)高效液相色譜法檢測(cè)頭孢地嗪鈉成分具有較高的可行性，而且具有良好的溶液穩(wěn)定性、耐用性、準(zhǔn)確度、精密度、線(xiàn)性及適應(yīng)性，符合檢測(cè)限及定量限檢測(cè)要求。